張桂榮劉玉梅武桂梅王振輝*劉 軍

(1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院,吉林吉林 132101; 2.吉林省白山市松樹鎮(zhèn)畜牧站,吉林白山 234704; 3.吉林正業(yè)生物制品股份有限公司,吉林吉林 132101)

抗雛鴨病毒性肝炎卵黃抗體粉飼料添加劑的研制

張桂榮1劉玉梅2武桂梅1王振輝1*劉 軍3

(1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院,吉林吉林 132101; 2.吉林省白山市松樹鎮(zhèn)畜牧站,吉林白山 234704; 3.吉林正業(yè)生物制品股份有限公司,吉林吉林 132101)

當(dāng)雛鴨病毒性肝炎卵黃抗體效價(jià)達(dá)到1∶320倍時(shí),收集免疫雞蛋分離卵黃,減壓低溫干燥制成卵黃抗體細(xì)粉并進(jìn)行抗體效價(jià)測(cè)定和安全檢驗(yàn)。最后將合格的卵黃抗體細(xì)粉以不同比例加入雛鴨飼料,對(duì)雛鴨進(jìn)行預(yù)防量飼喂后強(qiáng)毒攻毒試驗(yàn)及強(qiáng)毒攻毒后治療量的飼喂試驗(yàn)、小區(qū)域雛鴨飼喂試驗(yàn)。結(jié)果:預(yù)防試驗(yàn)為每kg飼料添加30g卵黃抗體粉末時(shí),攻毒保護(hù)率為85.0%;治療試驗(yàn)為每kg飼料添加50g卵黃抗體粉末時(shí),發(fā)病治愈率達(dá)到65.0%以上;小區(qū)域試驗(yàn)表明:卵黃抗體粉末預(yù)防量添加組比同期常規(guī)飼養(yǎng)組總發(fā)病率降低11%,抗生素用量降低12.3%,增重率提高9%。有效的防治了雛鴨病毒性肝炎病。

雛鴨肝炎病毒;卵黃抗體;飼料添加劑;免疫效果

雛鴨肝炎病毒[1]感染是危害養(yǎng)鴨業(yè)極其嚴(yán)重的傳染病。按獸醫(yī)法規(guī)的要求，控制雛鴨肝炎病的措施是嚴(yán)格的檢疫、凈化和飼養(yǎng)管理工作，然而由于檢疫上的諸多困難。在當(dāng)前發(fā)病率增高的情況下，本研究采用分離到的雛鴨肝炎病毒制備的滅活抗原，免疫健康的產(chǎn)蛋雞，制備卵黃抗體粉添加到飼料中，取得較好的免疫效果。

1 材料

菌株從吉林雙遼鴨場(chǎng)等數(shù)家鴨場(chǎng)分離鑒定的雛鴨肝炎病毒。各種試劑和儀器由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院生物制藥實(shí)驗(yàn)室制備和保存。

2 方法

2.1 抗雛鴨病毒性肝炎卵黃抗體干燥粉末制備與檢驗(yàn)[2]

2.1.1 卵黃抗體粉末制備 將雞蛋用自來(lái)水沖洗污物后，用0.05%百毒殺浸泡3～5min，再用75%酒精浸泡擦一遍，晾干，在無(wú)菌條件下將高免蛋打破，倒入蛋清分離器中分離蛋清，把留下的蛋黃倒入滅菌的組織搗碎機(jī)中高速攪拌2～3min制成勻漿，用雙層滅菌紗布過(guò)濾，進(jìn)行50℃減壓真空干燥，將干燥的卵黃無(wú)菌粉碎分裝于250ml中性瓶中密封，于4℃保存。

2.1.2 卵黃抗體粉末檢驗(yàn) 按無(wú)菌檢驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行。蛋雞的免疫與卵黃抗體效價(jià)已經(jīng)做完并發(fā)表核心期刊上

2.1.3 安全檢驗(yàn) 隨機(jī)選取2日齡健康雛鴨40只，隨機(jī)分成4組，第一組每只飼喂卵黃抗體粉末0.5g，第二組每只飼喂卵黃抗體粉末1g，第三組每只飼喂卵黃抗體粉末1.5g，連續(xù)服用3d，第四組作為空白對(duì)照，相同條件隔離飼養(yǎng)10d記錄結(jié)果。

2.2 抗雛鴨病毒性肝炎卵黃抗體飼料添加劑免疫試驗(yàn)[3]

2.2.1 預(yù)防添加量試驗(yàn) 選1日齡健康、體重相當(dāng)?shù)娜怆r雞100只，隨機(jī)分成5組，1～4組為試驗(yàn)組，第5組為對(duì)照組。對(duì)4個(gè)試驗(yàn)組每1kg基礎(chǔ)日糧中依次分別添加10g、20g、30g、40g的抗雛鴨病毒性肝炎卵黃抗體粉，對(duì)照組不添加。各組分開隔離喂養(yǎng)，連續(xù)飼喂3d。然后每只試驗(yàn)雛鴨連同對(duì)照雛鴨各肌肉注射DVH標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒，隔離飼養(yǎng)在吉林正業(yè)股份責(zé)任公司提供的負(fù)壓過(guò)濾消毒免疫室內(nèi)，飼養(yǎng)觀察20d，記錄結(jié)果。

2.2.2 治療添加量試驗(yàn) 選1日齡健康、體重相當(dāng)?shù)娜怆r鴨100只，隨機(jī)分成5組，1～4組為試驗(yàn)組。每組試驗(yàn)雛鴨各肌肉注射DVH標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株，隔離飼養(yǎng)在吉林正業(yè)股份責(zé)任公司提供負(fù)壓過(guò)濾消毒免疫室內(nèi)3d，待100%左右雛雞發(fā)病時(shí)，4個(gè)試驗(yàn)組每kg基礎(chǔ)日糧中分別飼喂添加40g、50g、60g、70g的抗雛鴨病毒性肝炎卵黃抗體粉飼料飼喂3d之后，繼續(xù)用無(wú)抗體飼料飼喂10d。第5組為強(qiáng)毒攻毒對(duì)照組。觀察記錄各組試驗(yàn)雛鴨的變化。

2.2.3 小區(qū)域試驗(yàn) 對(duì)雙遼鴨場(chǎng)不同飼養(yǎng)批次共計(jì)1 000雛鴨從3日齡開始，在基礎(chǔ)日糧飼料里添加30g/kg的抗雛鴨肝炎病毒卵黃抗體粉末，飼喂3d，同未添加組同條件飼養(yǎng)50d統(tǒng)計(jì)發(fā)病率、飼養(yǎng)成本。

3 結(jié)果與分析

3.1 DVH卵黃抗體干燥粉末檢驗(yàn)結(jié)果

制備的卵黃抗體粉末雖然污染少量的細(xì)菌，但均沒有致病性；四種劑量的雛雞飼喂試驗(yàn)均安全；卵黃抗體經(jīng)過(guò)干燥脫水后卵黃抗體效價(jià)高達(dá)到1∶4048倍數(shù)。證明低溫減壓干燥處理沒有影響卵黃抗體效價(jià)，而且達(dá)到較好的濃縮目的，便于卵黃抗體4℃長(zhǎng)期保存與應(yīng)用。

3.2 卵黃抗體預(yù)防添加量試驗(yàn)結(jié)果

從表1可知：預(yù)防免疫卵黃抗體添加量為3%、4%時(shí)，攻毒保護(hù)率均為85.00%；治療時(shí)卵黃抗體添加量為5%，6%，7%時(shí)，治愈率分別為 65%，75%，65%。可知研制的雛鴨肝炎病毒卵黃抗體具有較好的免疫特異性。攻毒后對(duì)照組雛鴨全部死亡，死亡雛鴨都有典型的雛鴨病毒肝炎癥狀[1]，故抗雛鴨病毒性肝炎卵黃抗體預(yù)防添加量為3%時(shí)和治療量5%時(shí)比較合適。

表1 卵黃抗體粉飼料添加劑免疫試驗(yàn)結(jié)果

3.3 小區(qū)域試驗(yàn)結(jié)果

卵黃抗體飼料添加組較同期普通飼養(yǎng)組總發(fā)病率降低11%，抗生素用量降低12.3%，增重率提高7.7%。證明抗雛鴨病毒性肝炎卵黃抗體粉末的添加，較好的控制了疾病的發(fā)生，而且其他疾病的發(fā)生率也就隨之降低，總體經(jīng)濟(jì)效益顯著提高9%。

4 討論

卵黃抗體[3]（IgY）是禽類B淋巴細(xì)胞在抗原物質(zhì)刺激下所產(chǎn)生并沉積在卵黃中的能與抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的一種免疫球蛋白，是禽類在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成的用于提高抵抗力的物質(zhì)。卵黃抗體作為綠色藥物，是較理想的抗生素替代品。由于雛鴨消化系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，消化酶對(duì)IgY消化作用較弱，故可將一定量的針對(duì)某些疾病的 IgY 添加到飼料或飲用水中，一部分可經(jīng)小腸吸收，起到被動(dòng)免疫作用。本試驗(yàn)研究證明小劑量的卵黃抗體添加劑可以起到預(yù)防作用，而大劑量的在發(fā)病初期還有治療作用。卵黃抗體無(wú)污染，無(wú)殘留，對(duì)機(jī)體不會(huì)產(chǎn)生危害，是一種良好的飼料添加劑。由于雛鴨病毒性肝炎是一種高度致死性急性傳染病。尤其是3～20日齡的雛鴨以發(fā)病急，死亡快特點(diǎn)，而且疫苗接種不能很好控制，使用其卵黃抗體飼料添加劑能夠有效地降低家雛鴨發(fā)病率與死亡率，提高生產(chǎn)性能，增加養(yǎng)鴨戶的經(jīng)濟(jì)效益。但卵黃抗體作為添加劑進(jìn)行大規(guī)模的應(yīng)用還存在一定的問題[4]，如特異性毒株的選擇問題，卵黃抗體的穩(wěn)定性保護(hù)和貯存、污染防治等問題，針對(duì)各種疾病的卵黃抗體的開發(fā)研制，還需要更多專家努力。但可預(yù)見，卵黃抗體在飼料添加劑中的應(yīng)用具有廣闊的前景[4]。

5 結(jié)論

抗雛鴨病毒性肝炎病卵黃抗體效價(jià)到達(dá)1：320倍以上時(shí)，制成卵黃抗體干燥粉末，預(yù)防添加量為3%時(shí)，攻毒保護(hù)率可達(dá)85%，治療添加量為5%時(shí)，治愈率可達(dá)65%以上。卵黃抗體添加組比同期普通飼養(yǎng)組總發(fā)病率降低7%，抗生素用量降低 12%，增重率提高9 %。

[1] 【美】B.W卡爾尼克.禽病學(xué)（第十版）[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1999：92-152.

[2] 劉海生，楊增岐，張淑霞等.抗仔豬大腸埃希菌病高免卵黃抗體粉的研制[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，30（9）：15-19.

[3] 韓水仲，田澤華，趙津子等.卵黃抗體在飼料添加劑中的應(yīng)用[J].中國(guó)飼料，2010，（15）：3-7.

[4] 武桂梅，王振輝，張桂榮，等.抗雞白痢沙門氏桿菌病卵黃抗體粉飼料添加劑的研制[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)科技版，2013，（1）：66-107.

吉林省教育廳“十二五”科研項(xiàng)目：吉教科合字[201]

張桂榮（1962—），女，吉林省公主嶺市人，碩士，副教授，主要從事動(dòng)物藥理學(xué)和動(dòng)物傳染病實(shí)驗(yàn)教學(xué)工作。

王振輝（1964—），男，吉林省伊通縣人，碩士，教授，主要從事生物藥物教學(xué)、研究工作。