徐銘澤等

摘要：目的 探討八角蓮根狀莖不定芽快速培育的方法。方法 采用L9（33）正交法，對根狀莖結(jié)節(jié)進(jìn)行浸泡之后，將根狀莖栽入培養(yǎng)土中，再用對應(yīng)的激素水溶液代替自來水進(jìn)行培養(yǎng)。結(jié)果 八角蓮不定芽快速培育的最佳處理為：選取根狀莖第一節(jié)結(jié)節(jié)，BA1.0mg/L+TDZ0.2mg/L 激素水溶液中浸泡24h，不定芽誘導(dǎo)效果最好，每個(gè)根狀莖誘導(dǎo)的不定芽數(shù)可達(dá)5～7個(gè)。結(jié)論 用激素水溶液對八角蓮根狀莖進(jìn)行浸泡預(yù)處理和澆灌，能顯著提高八角蓮不定芽的產(chǎn)量。

關(guān)鍵詞：八角蓮；根狀莖；不定芽；快速培育；植物激素

中圖分類號： S567.2

文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A 文章編號： 16749944（2015）06002003

1 引言

八角蓮（Dysosma versipellis）為小檗科八角蓮屬植物，別名一把傘、八角七、八角兵盤七[1]，是我國特有的多年生草本植物及傳統(tǒng)的中藥，具有抗癌、抗病毒、保肝、免疫調(diào)節(jié)等作用，在第一批國家珍稀瀕危保護(hù)植物名錄中被列為三級保護(hù)對象[2]。野生八角蓮主要分布于貴州、四川、江西、湖北、湖南、河南、浙江等地，在桂林也有少量分布[3]。八角蓮在自然條件下只進(jìn)行有性生殖，但由種子萌發(fā)到性成熟約需5～6年，繁殖周期長， 繁殖能力低下，生長很緩慢，一般生長數(shù)年方能入藥[4]。近年來，由于人們過度采挖及其生殖機(jī)制的限制，野生八角蓮的分布和數(shù)量急劇減少，野生資源面臨枯竭，嚴(yán)重影響了八角蓮在臨床上的應(yīng)用，因此對八角蓮進(jìn)行離體快繁和栽培研究勢在必行。但八角蓮的組織培養(yǎng)及人工栽培研究均處于起步階段，組織培養(yǎng)獲得完整植株利用的外植體大多為種胚進(jìn)行培育，用葉片、葉柄、種子、根狀莖及根等作為外植體，大多只能誘導(dǎo)愈傷組織[5～8]；在栽培方面，有研究者探索了八角蓮的馴化移栽[9]，解決了從野生到人工的轉(zhuǎn)變過程中的溫控、病蟲害等問題；使用根狀莖進(jìn)行的栽培也基本為有芽栽培[10，11]，但如何對不同結(jié)節(jié)進(jìn)行快速誘導(dǎo)不定芽尚無相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以八角蓮根狀莖為外植體，對其進(jìn)行分節(jié)，采用不同激素配方水溶液浸泡不同時(shí)間后移栽，并用相應(yīng)激素水溶液進(jìn)行灌溉探討八角蓮不定芽的快速培育方法，為八角蓮快繁的研究提供更多的不定芽。

2 材料與方法

2.1 材料

五年生八角蓮購自桂林市六合路藥材市場，培養(yǎng)土（北京市豐臺區(qū)新發(fā)地鴻華園藝園公司），栽培所用花盆為8號盆，口徑24cm。

2.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用三因素三水平的L9（33）正交表，對激素配方，浸泡時(shí)間和結(jié)節(jié)序數(shù)三個(gè)因素分別設(shè)立3個(gè)水平，其中激素配方為：①BA10.0mg/L+GA32.0mg/L；②6-BA1.8mg/LNAA0.2mg/L；③BA1.0mg/L+TDZ0.2mg/L。浸泡時(shí)間為：1.24h；2.48h；3.72h。結(jié)節(jié)序數(shù)按頂芽所在的結(jié)節(jié)為第1結(jié)節(jié)往后的依次為第2第3結(jié)節(jié)，其中①第1結(jié)節(jié)；②第2結(jié)節(jié)；③第3結(jié)節(jié)。

2.3 根狀莖結(jié)節(jié)的預(yù)處理

自來水將根狀莖表面泥土清洗干凈，用潔凈的手術(shù)刀在結(jié)節(jié)交界處垂直將根狀莖切開，切割時(shí)將須根撥至一邊，避免損傷。將八角蓮根狀莖結(jié)節(jié)按L9（33）正交表浸泡在不同激素配比溶液中；對照組采用自來水進(jìn)行浸泡處理。

2.4 根狀莖結(jié)節(jié)的栽種

將所花土按每盆3.2L土壤分裝，深度為20cm。每一處理選擇5 個(gè)根狀莖結(jié)節(jié)，在土深5cm處掩埋，兩顆相鄰根狀莖之間間隔6～7cm，芽頭朝上，根朝下，栽培期避免強(qiáng)光直射。每周澆灌一次激素水，對照組澆自來水；若天氣過于炎熱，則以培養(yǎng)土發(fā)白為澆水的標(biāo)準(zhǔn)。

2.5 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集及統(tǒng)計(jì)

定期觀察生長情況，分別記錄栽種后15d，30d，45d不定芽的萌發(fā)情況，30d時(shí)統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率：萌發(fā)率（%）=（栽種后芽體總數(shù)-栽種前芽體總數(shù)）/每組根狀莖個(gè)數(shù)×100%，對照組計(jì)算方法相同。

3 結(jié)果分析

3.1 激素配比、浸泡時(shí)間以及結(jié)節(jié)順序?qū)Σ欢ㄑ空T導(dǎo)的影響

本實(shí)驗(yàn)通過正交設(shè)計(jì)探討不同激素組合，浸泡時(shí)間及結(jié)節(jié)序數(shù)預(yù)處理對八角蓮根狀莖不定芽誘導(dǎo)的影響，結(jié)果表明，對八角蓮根狀莖結(jié)節(jié)進(jìn)行預(yù)處理，可以顯著提高不定芽的萌發(fā)率，與對照組相比，預(yù)處理組共長出新芽55個(gè)，64.44%的根狀莖都長出新芽體，打破了芽的休眠，其中40%的根狀莖長出的芽都超過2個(gè)，有的甚至多達(dá)5～7個(gè)，是對照2.2%的18.18倍。從表1可見，進(jìn)行極差分析，R1與R2相等，均為140>80（R3），說明結(jié)節(jié)順序和激素配比對根狀莖的萌芽影響效應(yīng)較大，其次是浸泡時(shí)間，三者對根狀莖萌芽的影響為激素配比=結(jié)節(jié)數(shù)>浸泡時(shí)間，而浸泡時(shí)間與八角蓮萌芽率無正相關(guān)關(guān)系，但浸泡時(shí)間越長越容易導(dǎo)致根狀莖結(jié)節(jié)發(fā)生霉變而死亡，浸泡24h霉變數(shù)為0，浸泡48h的霉變數(shù)為2，浸泡72h的霉變數(shù)為4，因此，為了盡可能保存更多的八角蓮根狀莖，浸泡時(shí)間為24h是最優(yōu)選擇。因此根狀莖不定芽誘導(dǎo)最優(yōu)組合為選取第一結(jié)節(jié)，在BA1.0mg/L+TDZ0.2mg/L 激素配方下浸泡24h，誘導(dǎo)效果最好，每個(gè)根狀莖均可誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽，誘導(dǎo)的不定芽數(shù)多的可達(dá)5～7個(gè)。

3.2 須根數(shù)目及結(jié)節(jié)切口大小對八角蓮根狀莖不定芽培育的影響

根在植物的水分營養(yǎng)運(yùn)輸上有著不可或缺的作用，而根系分泌物對植物營養(yǎng)有調(diào)節(jié)作用[12]。同一植株和不同植株八角蓮根狀莖結(jié)節(jié)須根數(shù)目不一，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在根狀莖不定芽培育過程中，68.75%的未萌芽根狀莖均處于少根（須根≤2條）狀態(tài)，說明須根數(shù)量的多少與根狀莖不定芽的萌發(fā)有相關(guān)性，與須根數(shù)目少的根狀莖相比，須根數(shù)目多的根狀莖，不定芽誘導(dǎo)較容易（圖1，圖2）。

對八角蓮根狀莖結(jié)節(jié)切割進(jìn)行不同預(yù)處理，結(jié)果表明切口直徑大于5mm的根狀莖發(fā)生霉?fàn)€的概率較高，占霉變根狀莖結(jié)節(jié)總數(shù)的72.73%，霉?fàn)€發(fā)生的部位均位于切口處，而后開始蔓延，說明切口的大小與霉?fàn)€的發(fā)生呈一定程度的正相關(guān)，切口越大則霉變的概率越大。因此為了減少霉變率，在對八角蓮根狀莖進(jìn)行切割時(shí)，應(yīng)選擇切口面積最小的地方進(jìn)行切割。

4 討論

八角蓮是我國獨(dú)有的具有極高藥用價(jià)值的珍貴植物，一般生長數(shù)年才可入藥，八角蓮根狀莖先端結(jié)節(jié)每年可形成 1個(gè)幼芽第2、3節(jié)上有芽苞，當(dāng)受外界創(chuàng)傷或人為切割，可促使其節(jié)上芽苞萌發(fā)，長出新苗。而其后的結(jié)節(jié)則逐漸老化，再生能力很弱。因此可利用八角蓮先端的1、2、3節(jié)進(jìn)行無性繁殖[13]。本實(shí)驗(yàn)通過正交設(shè)計(jì)，對八角蓮根狀不定芽的培育進(jìn)行探究，目前實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示最適合八角蓮不定芽快速培育的處理為根狀莖第一結(jié)節(jié)在BA1.0mg/L+TDZ0.2mg/L激素配方下浸泡24h，并用此配方代替水進(jìn)行澆灌，可使單個(gè)根狀莖萌發(fā)5～7個(gè)芽體。之后我們將培育所得芽體進(jìn)行了切割，并進(jìn)行單個(gè)的栽培，獲得了一定數(shù)量的八角蓮植株，為八角蓮的人工栽培及利用八角蓮不定芽進(jìn)行離體快繁提供新的思路與技術(shù)支持。

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