梁少蘭，杜作義，李自成，靳 文

(廣東省第二人民醫(yī)院 心血管內二科，廣東 廣州 510371)

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阿司匹林抑制冠心病患者外周血單核細胞脂肪酸合酶表達

梁少蘭*，杜作義，李自成，靳 文

(廣東省第二人民醫(yī)院 心血管內二科，廣東 廣州 510371)

脂肪酸合酶(fatty acid synthase，F(xiàn)ASN)是催化乙酰輔酶A和丙二酰輔酶A合成內源性長鏈脂肪酸的關鍵酶[1]，單核巨噬細胞通過表面的CD36受體攝取氧化型低密度脂蛋白，在FASN的作用下形成泡沫細胞，干擾FASN基因可以顯著減少泡沫細胞的生成。本研究探討了阿司匹林對單核細胞脂肪酸合酶的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 臨床病例資料:收集2013年3月至2014年5月本院診治的冠心病患者46例，其中男23例，女23例，年齡56～82歲，平均(68.4±11.2)歲。排除各種急、慢性炎性反應和服用維生素E等抗感染及抗氧化作用的藥物者。另取本院同期健康體檢者40例作為正常對照組，其中男20例，女20例，年齡54～80歲，平均(68.1±9.7)歲。本研究符合廣東省第二人民醫(yī)院倫理委員會的各項規(guī)定, 受試者簽署知情同意書。

1.1.2 實驗試劑:Percoll單核細胞分離液(天津灝洋生物制品科技有限責任公司)；熒光定量PCR檢測試劑盒(大連寶生物科技有限公司)；PCR引物(上海生工生物科技技術有限公司)；FASN、白介素- 6(IL- 6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)檢測試劑盒(北京四正柏生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 單核細胞的分離及處理:取受試者10 mL靜脈血加入到10 mL單個核細胞分離液中，1 500×g離心20 min，吸取中間單核細胞層，將單核細胞培養(yǎng)于5% CO2，3 7℃條件下。實驗分為：陰性對照、1、2和4 μmol/L阿司匹林司4組(每組46例)，每組調整上述收集的單核細胞濃度為106個細胞/mL，加入不同濃度的阿司匹林作用細胞12 h，檢測相關指標的變化，每個實驗重復3次。

1.2.2 熒光定量PCR檢測FASN基因的表達:調整上述四組(每組46例)收集的單核細胞密度為106個細胞/mL，按試劑盒說明書擴增FASN基因，引物序列為5′-TGCGGTTATG GCAATTGCGAAGC-3′(sence)和5′-CTTCAAATTCGGATATG CTGGAAT-3′(antisence)，GAPDH基因作為內對照，F(xiàn)ASN基因的表達量使用2-△△Ct評估。每個實驗重復3次。

1.2.3 FASN、IL- 6和TNF-α水平的測定:取單核細胞分離時的血漿400 μL，-70 ℃冰箱凍存待測。收集陰性對照、1、2和4 μmol/L阿司匹林4組(每組46例)處理單核細胞12 h后的培養(yǎng)液上清，使用試劑盒ELISA法檢測FASN、IL- 6和TNF-α表達水平。每個實驗重復3次。

1.3 統(tǒng)計學分析:使用SPSS16.0進行統(tǒng)計分析，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗，多組比較使用方差分析，連續(xù)性的變量之間的相關性使用pearson 相關分析。

2 結果

2.1 健康對照和冠心病患者單核細胞FASN表達及其與IL- 6和TNF-α表達水平的相關性分析:冠心病組FASNmRNA和蛋白表達量以及IL- 6和TNF-α表達水平均顯著高于健康對照組(P<0.01)。相關分析顯示冠心病組FASN表達與患者血漿中IL- 6和TNF-α水平呈顯著正相關(P<0.05)(表1)。

2.2 阿司匹林對單核細胞FASN表達的影響:4組之間FASNmRNA和蛋白表達量以及IL- 6、TNF-α水平均顯著性差異(P<0.05)(表2)。

表1 冠心病患者和對照組單核細胞FASN表達的比較Table 1 Comparision of FASN Expression between CHD and control group(±s)

*P<0.01 compared with control.

表2 阿司匹林對單核細胞FASN表達的影響Table 2 Effects of aspirin on FASN expression(±s, n=46)

*P<0.05;#P<0.01 compared with control；▲P<0.05，▲▲P<0.01 compared with 1 μmol/L aspirin；△P<0.05 compared with 2 μmol/L aspirin.

3 討論

脂肪酸合酶(FASN)可以促進單核巨噬細胞對氧化型低密度脂蛋白的攝取，抑制膽固醇流出單核巨噬細胞，借此參與到粥樣斑塊的形成過程中[2]。本研究的觀察顯示了冠心病組單核細胞的FASN基因的表達量顯著高于健康對照組，說明了冠心病患者單核細胞FASN處于高表達狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)阿司匹林在動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的各個環(huán)節(jié)都有干預作用[3]，本研究的結果顯示阿司匹林可以顯著減低FASN的表達，同時IL- 6和TNF-α表達水平也相應減低。說明了以FASN為靶向的治療可以起到干預冠心病進展的作用。

本研究為阿司匹林對冠心病的治療提供了一種可能的作用機制。但其具體的作用機制和臨床療效還有待進一步研究。

[1] 陳惠, 蔣合眾, 魏國清, 等. 脂肪酸合酶抑制劑的減肥作用研究進展[J]. 中華中醫(yī)藥學刊, 2014, 32:1026- 1028.

[2] 盧環(huán)宇, 韋夢影, 張更, 等. 脂肪酸合酶與脂肪酸代謝及細胞因子的關系[J]. 細胞與分子免疫學雜志, 2012, 28:1226- 1228.

[3] Gukop P, Gutman N, Bilkhu R,etal. Who might benefit from early aspirin after coronary artery surgery? [J] Interact Cardiovasc Thorac Surg, 2014, 19:505- 511.

2015- 03- 27

2015- 06- 30

1001-6325(2015)11-1544-02

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*通信作者(corresponding author)：shallen_liang@sohu.com