李昕++管世鶴

摘要：探討丙型肝炎患者體內(nèi)HCV-RNA、HCV-Ab、ALT和TP間的相互關(guān)系。采用ELISA檢測(cè)708例HCV-Ab陽(yáng)性的丙型肝炎疑似患者，以RT-PCR檢測(cè)血清HCV-RNA載量，全自動(dòng)生化儀定量檢測(cè)ALT和TP。HCV-Ab表達(dá)水平與HCV-RNA載量有關(guān)，HCV-RNA載量與ALT異常率呈正相關(guān)性，但HCV-RNA載量與ALT含量無(wú)相關(guān)性，與TP含量亦無(wú)相關(guān)性。708例HCV-Ab陽(yáng)性患者中男性多于女性，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；40歲以上患者比例多于40歲以下患者比例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HCV-RNA與HCV-Ab、ALT具有一定相關(guān)性，丙型肝炎以40歲以上男性患者多見(jiàn)，應(yīng)引起臨床重視。

關(guān)鍵詞：HCV-RNA；HCV-Ab；ALT；TP；相關(guān)性

中圖分類號(hào)：R51263文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1672-1098（2015）01-0078-05

丙型病毒性肝炎，是一種由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染引起的病毒性肝炎。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球HCV的感染率約為3%，約18億人感染HCV，每年新發(fā)丙型肝炎病例約35萬(wàn)例，呈現(xiàn)全球流行趨勢(shì)。其中50%～85%感染者發(fā)展為慢性丙型肝炎，lO%～30%發(fā)展為肝硬化，肝硬化患者中約3%～10%可演變?yōu)楦渭?xì)胞癌[1]。近年來(lái)HCV感染人數(shù)持續(xù)上升，成為日趨嚴(yán)重的社會(huì)和公共衛(wèi)生問(wèn)題。臨床實(shí)驗(yàn)室多采用實(shí)時(shí)熒光（RT-PCR）法檢測(cè)血液中的HCV-RNA用于HCV感染診斷、丙型肝炎患者抗病毒藥物療效監(jiān)測(cè)及血液篩查[2]。本研究對(duì)本院2011～2013年疑似丙肝患者的HCV-RNA、HCV-Ab、ALT及TP監(jiān)測(cè)指標(biāo)進(jìn)行分析，對(duì)其相關(guān)性進(jìn)行研究，探討其在丙型肝炎診斷和治療療效方面的臨床意義。

1對(duì)象及方法

1.1對(duì)象

選取本院2011～2013年度共708例住院及門診患者HCV-Ab陽(yáng)性、伴隨典型臨床表現(xiàn)并已排除其他肝炎的可疑丙型肝炎患者血樣。其中男444例、女264例，男性年齡1～95歲，平均年齡455歲，女性年齡10～73歲，平均年齡451歲。

1.2試劑與儀器

1） 丙型肝炎病毒核酸擴(kuò)增（PCR）熒光定量檢測(cè)試劑：上?？迫A生物工程有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為20121206、20131201。 儀器采用羅氏Light Cycler480熒光定量PCR儀，Agilent Technologies擴(kuò)增儀。

2） 丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒（ELISA）：廣州中山生物工程有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為20121205、20131203。儀器采用科華KHB ST-360酶標(biāo)儀。

3） 谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和總蛋白（TP）試劑：SIEMENS有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為20121117、20131201。儀器采用德國(guó)SIEMENS Dimension RxL Max全自動(dòng)生化分析儀。

1.3方法

1） HCV-RNA檢測(cè)。采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法，由PCR實(shí)驗(yàn)室人員嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行熒光定量檢測(cè)，在實(shí)驗(yàn)中設(shè)置陰性對(duì)照、強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照、弱陽(yáng)性對(duì)照以及4個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品（2×104～2×107），HCV-RNA值<10×103 IU/mL為檢測(cè)下限（不同HCV-RNA檢測(cè)方法可用IU/mL和copy/mL兩種單位，換算公式：IU/mL=0854×copy/mL+0538）。本實(shí)驗(yàn)選用試劑盒采用定量單位為IU/mL。

2） HCV-Ab檢測(cè)。采用ELISA法，由實(shí)驗(yàn)室人員嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行定性檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)中設(shè)置一孔陰性對(duì)照、一孔空白對(duì)照及一孔陽(yáng)性對(duì)照。酶標(biāo)儀采用450 nm/630 nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)吸光度（A）。試劑盒陰性對(duì)照A值≤01，陽(yáng)性對(duì)照A值≥06，臨界值（Cut-off值）計(jì)算：Cut-off值=015+陰性對(duì)照A值均值。通過(guò)與陰性對(duì)照、空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照的Cutoff值比較判斷樣本A值

3） ALT檢測(cè)。采用SIEMENS Dimension RxL Max全自動(dòng)生化分析儀的酶速率法， ALT<40U/L為正常合格。

4） TP檢測(cè)。采用SIEMENS Dimension RxL Max全自動(dòng)生化分析儀的雙縮脲比色法，TP<80g/L為正常合格。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS130統(tǒng)計(jì)軟件包分析，均值比較用t檢驗(yàn)，以P<005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

1） 708例HCV-Ab陽(yáng)性患者HCV-RNA 的檢測(cè)結(jié)果：708例HCV-Ab陽(yáng)性患者中，HCV-RNA值10×103者為504例，HCV-RNA陽(yáng)性率為712%。HCV-RNA值<10×103者為204例。504例HCV-RNA值10×103者中數(shù)量級(jí)107為42例、106為174例、105為156例、104為90例、103為42例，經(jīng)統(tǒng)計(jì)計(jì)算兩種檢測(cè)方法的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=39723，P=0005<005）。

2） 708例HCV-Ab陽(yáng)性患者的HCV-RNA含量與ALT、TP平均值之間的關(guān)系如表1～表2所示，在708例HCV-Ab陽(yáng)性患者中ALT異常人數(shù)所占百分比隨著HCV-RNA載量的增加呈依次遞增的趨勢(shì)，與HCV-RNA成正相關(guān)性（r=0837，P=001<005）， 但HCV-RNA載量與ALT平均值不構(gòu)成正相關(guān)性（r=0112， P=060>005）。708例HCV-Ab陽(yáng)性患者中HCV-RNA載量與TP異常的人數(shù)所占百分比未有相關(guān)性（r=-0233，P=173>005），且隨著HCV-RNA載量的增加，相應(yīng)的TP平均值呈在正常范圍值內(nèi)的負(fù)相關(guān)（r=-0827，P=000），不同HCV-RNA載量的標(biāo)本的TP平均值變化較平穩(wěn)。

表1708例HCV-Ab陽(yáng)性患者的HCV-RNA載量與ALT、TP的平均值

HCV-RNA/（IU/mL）HCV-AbALT平均值/（U/L）TP平均值/（g/L）

107陽(yáng)性56505762

106陽(yáng)性69736022

105陽(yáng)性49816382

104陽(yáng)性55446409

103陽(yáng)性49436631

<103陽(yáng)性67916576

注：應(yīng)用SPSS130統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)分析，HCV-RNA載量與ALT平均值比較，r=0112， P=060>005； HCV-RNA載量與TP平均值比較，r=-0827， P=000。

3） 708例HCV-Ab陽(yáng)性患者的HCV-RNA載量與性別、年齡之間的相關(guān)性分析如表3所示，708例HCV-Ab陽(yáng)性患者的HCV-RNA載量與平均年齡之間并無(wú)明顯關(guān)系，且隨著HCV-RNA載量的增加，男性所占比例、女性所占比例及40歲以上患者所占比例、40歲以下患者所占比例未呈規(guī)律性變化。但在總體HCV-Ab陽(yáng)性患者中，男性患者的比例627%要大于女性患者的比例373%，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）；40歲以上患者的比例為692%高于40歲以下患者的比例308%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。其中40歲以上男性患者人數(shù)為392人，所占比例為5537%。

表2708例HCV-Ab陽(yáng)性患者的HCV-RNA載量與ALT、TP異常人數(shù)百分率

HCV-RNA/（IU/mL）HCV-AbALT異常/例ALT正常/例TP異常/例TP正常/例

107陽(yáng)性30（71.4%）12（28.6%）0（0.00%）42（100.0%）

106陽(yáng)性102（58.6%）72（41.4%）0（0.00%）174（100.0%）

105陽(yáng)性75（48.1%）81（51.9%）15（9.60%）141（90.4%）

104陽(yáng)性43（47.8%）47（52.2%）12（13.3%）78（86.7%）

103陽(yáng)性12（28.6%）30（71.4%）6（14.3%）36（85.7%）

<103陽(yáng)性42（20.6%）162（79.4%）12（5.90%）192（94.1%）

合計(jì)陽(yáng)性304（42.9%）404（57.1%）45（6.35%）663（93.7%）

注：應(yīng)用SPSS130統(tǒng)計(jì)軟件兩分量間的關(guān)聯(lián)統(tǒng)計(jì)分析，HCV-RNA載量與ALT異常的人數(shù)所占百分比比較，r=0837，P=001<005；HCV-RNA載量與TP異常的人數(shù)所占百分比比較，r=-0233，P=173>005。

表3236例HCV-Ab陽(yáng)性患者的HCV-RNA載量與性別、年齡之間的關(guān)系

HCV-RNA/（IU/mL）平均年齡/歲男性/例女性/例≥40歲/例<40歲/例

10735.0024（57.1%）18（42.9%）30（71.4%）12（28.6%）

10646.50132（75.9%）42（24.1%）125（71.8%）49（28.2%）

10548.3184（53.9%）72（46.1%）116（74.4%）40（25.6%）

10438.3154（60.0%）36（40.0%）51（56.7%）39（43.3%）

10343.1424（57.1%）18（42.9%）30（71.4%）12（28.6%）

<10342.77126（61.8%）78（38.2%）138（67.6%）66（32.4%）

合計(jì)45.29444（62.7%）264（37.3%）490（69.2%）218（30.8%）

注： 應(yīng)用SPSS130統(tǒng)計(jì)軟件兩分量間的關(guān)聯(lián)統(tǒng)計(jì)分析， 男性患者比例與女性患者比例比較， r=-0986，P=050>005； 40歲以上患者比例與40歲以下患者比例比較，r=0493，P=003<005。

3討論

1） HCV是丙型肝炎的病因，目前所用實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要為病原抗原檢測(cè)、病原抗體檢測(cè)和HCV-RNA檢測(cè)。由于采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法檢測(cè)HCV-RNA可以縮短檢測(cè)窗口期（最少可至22天）[3]，所以血液中HCV-RNA的實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)，已成為HCV感染診斷、丙型肝炎患者抗病毒藥物治療療效監(jiān)測(cè)及血液篩查的重要手段。本研究708例HCV-Ab陽(yáng)性患者中有204例HCV-RNA值為陰性，分析原因如下：①HCV-Ab假陽(yáng)性，可能與高球蛋白血癥[4]或試劑盒包被抗原不純[5]等因素導(dǎo)致；②HCV感染后的病毒血癥分為持續(xù)、一過(guò)和間隙三種時(shí)間模式[6]。故HCV-RNA出現(xiàn)間隙陰性，或是患者處于疾病恢復(fù)期，病毒量下降導(dǎo)致HCV-RNA陰性，而HCV-Ab陽(yáng)性持續(xù)存在；③因?qū)崟r(shí)熒光RT-PCR法提取HCV-RNA過(guò)程較復(fù)雜，易被RNA酶降解，從而影響低載量的HCV-RNA的檢測(cè)[7]；④因核酸的穩(wěn)定性較抗體低，故HCV-RNA不穩(wěn)定，導(dǎo)致HCV-RNA檢出值不穩(wěn)定[8]，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；⑤抗病毒治療導(dǎo)致干擾和抑制了患者體內(nèi)HCV-RNA的復(fù)制，使得血清中HCV-RNA的載量低于檢測(cè)下限[9]。

2） 由表1、表2看出，隨著HCV-RNA值的升高ALT的平均值未呈比例升高，但ALT異常人數(shù)所占百分比升高，與HCV-RNA值呈正相關(guān)（r=0837，P<005），提示肝細(xì)胞發(fā)生損傷，但不能反映肝臟的損傷程度[10]。但據(jù)澳大利亞的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)調(diào)查研究證明HCV-RNA和ALT的水平動(dòng)態(tài)變化在感染的前三至五個(gè)月有相互影響作用，在感染的早期治療有重要的作用[11]。故在以后的研究中需進(jìn)一步收集臨床資料驗(yàn)證丙型肝炎早期感染階段的指標(biāo)動(dòng)態(tài)變化的影響意義。endprint

3） 急慢性肝病會(huì)造成總蛋白偏高，但在708例HCV-Ab陽(yáng)性患者中，TP平均值變化較平穩(wěn)，且都在正常范圍內(nèi)，TP異常較集中在HCV-RNA值為103～105范圍內(nèi)，說(shuō)明TP異常常伴隨低HCV-RNA含量時(shí)存在，可能與丙型肝炎早期肝細(xì)胞纖維化、炎癥和代謝失常有關(guān)。

4） 在本研究中，708例HCV-Ab陽(yáng)性患者的HCV-RNA的含量與平均年齡、性別之間有一定聯(lián)系。在總體HCV-Ab陽(yáng)性患者中，男性患者的比例要大于女性患者，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。據(jù)國(guó)外報(bào)道稱女性獻(xiàn)血者的丙肝感染率遠(yuǎn)低于男性獻(xiàn)血者[12]，故考慮在以后的研究中增大標(biāo)本量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)研究；40歲以上患者的比例要大于40歲以下患者的比例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。本研究數(shù)據(jù)表明，丙型肝炎患者以40歲以上男性居多，可能由于年齡大機(jī)體老化導(dǎo)致機(jī)體免疫力下降或因40歲以上男性社會(huì)壓力大及飲酒、吸煙等不良生活習(xí)慣或合并其他疾病并發(fā)癥致使機(jī)體抵抗力下降易受病毒侵害[13]。據(jù)美國(guó)全國(guó)健康和營(yíng)養(yǎng)檢查調(diào)查顯示：40歲以上成年人的丙型感染率明顯增高，且273%的40歲以上丙肝患者中有過(guò)量飲酒史，酒精對(duì)于HCV感染具有乘法效應(yīng)[14]。

綜上所述，RT-PCR檢測(cè)血液中的HCV-RNA由于其窗口期短、定量監(jiān)測(cè)病毒復(fù)制量，較好地應(yīng)用于HCV的診斷，藥物治療療效監(jiān)測(cè)，但不能確切反映病理性肝損傷。ELISA法檢測(cè)HCV-Ab由于其操作簡(jiǎn)單、成本經(jīng)濟(jì)、檢出率高等特點(diǎn)用于大規(guī)模的人群篩查指標(biāo)，但其窗口期長(zhǎng)且易出現(xiàn)假陽(yáng)性。ALT和TP在丙肝感染的過(guò)程中一定程度上反映了肝臟的損傷情況，與丙肝的感染階段有一定關(guān)聯(lián)。因此需結(jié)合HCV-RNA、HCV-Ab、ALT和TP對(duì)丙型肝炎患者進(jìn)行病情的診斷、檢測(cè)和治療。本研究中丙型肝炎以40歲以上男性患者多見(jiàn)，故應(yīng)增加臨床重視度。

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（責(zé)任編輯：何學(xué)華）endprint