李淑娟，劉 寧

(1.河北省張家口市萬全縣中醫(yī)院，河北 萬全 076250；2.河北省秦皇島市港口醫(yī)院，河北 秦皇島 066000)

穴位埋線療法對佐劑性關節(jié)炎大鼠血清IL-1β、IL-2及TNF-α水平的影響

李淑娟1，劉 寧2

(1.河北省張家口市萬全縣中醫(yī)院，河北 萬全 076250；2.河北省秦皇島市港口醫(yī)院，河北 秦皇島 066000)

目的 建立佐劑性關節(jié)炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型，觀察穴位埋線療法對AA大鼠血清IL-1β、IL-2及TNF-α水平的影響。方法 45只大鼠隨機分為空白對照組、模型對照組和穴位埋線療法治療組，d 28處死各組大鼠并分離血清，檢測血清IL-1β、IL-2和TNF-α含量。結果 模型組致炎后血清IL-1β、IL-2及TNF-α含量與空白組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；穴位埋線療法治療組血清IL-1β、IL-2及TNF-α含量與模型組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。結論 穴位埋線療法能明顯抑制細胞因子IL-1β、IL-2及TNF-α的分泌，從而產生抗風濕作用。

穴位埋線療法；類風濕關節(jié)炎；IL-1β；IL-2；TNF-α

類風濕性關節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種常見慢性進行性多關節(jié)病變?yōu)橹鞯淖陨砻庖咝约膊。潢P節(jié)病變多呈現(xiàn)對稱性發(fā)病。RA最常見的侵犯部位為雙手、腕、肘、膝、踝和足關節(jié)，如治療不及時可波及心、肺、眼等結締組織或軟骨和骨組織致使關節(jié)強直及功能障礙，是目前主要致殘性疾病之一[1]。

RA在中醫(yī)學中稱“痹”、“歷節(jié)風”或“頑痹”，“痹”最早見于《內經(jīng)》，在《金匱要略》亦有記載：“歷節(jié)痛、不可屈伸”、“其痛如掣”及“諸肢節(jié)疼痛”等皆言之“歷節(jié)風”。RA發(fā)病機制最先見《素問》：“風寒濕三氣雜至，合而為痹也”?！把ㄎ宦窬€療法”遵從《靈樞》：“久病者，邪氣深，刺此病者，深內而久留之”之意，將羊腸線等埋入穴位以提高機體應激能力的同時對穴位起到持續(xù)性刺激作用。

本研究通過建立佐劑性關節(jié)炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型觀察穴位埋線療法對大鼠血清白細胞介素-1(IL-1β)、白細胞介素-2(IL-2)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平表達的影響，探討穴位埋線療法治療RA的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 清潔級Wistar雄性大鼠45只，體質量200～250 g。河北醫(yī)科大學動物實驗中心提供[許可證號：SCXK(冀)2003-1-003]。不限食水。

1.1.2 主要試劑 弗氏完全佐劑(complete freund’s adjuvant,CFA)，美國Sigma公司生產；卡介苗(10 mg/支)購自上海生物制品研究所；腫瘤壞死因子放射免疫試劑盒為北京北方生物技術研究所產品；大鼠IL-1β ELISA試劑盒、IL-2 ELISA試劑盒及TNF-α試劑盒均為武漢博士德生物工程有限公司產品。

1.1.3 埋線用具 穴位埋線針，止血鉗，羊腸線，一次性注射器，酒精棉球，碘伏，膠布，利多卡因等。

1.2 試驗方法

1.2.1 動物分組 Wistar大鼠45只，隨機分為空白對照組15只，注射0.1 mL生理鹽水；模型對照組15只，注射0.1mL弗氏完全佐劑；穴位埋線治療組15只，注射0.1mL弗氏完全佐劑。RA大鼠模型造模方法[2]：弗氏完全佐劑(卡介苗10 mg·mL-1)每日(0.1 mL/只)注射于大鼠左后足跖皮內。致炎當日開始穴位埋線治療，共計27 d。

1.2.2 埋線穴位 主穴：命門、腎俞、肝俞、脾俞、足三里；配穴：環(huán)跳、委中、三陰交。穴位選取參照上?？萍汲霭嫔绯霭娴摹秾嶒炨樉膶W》。

1.2.3 操作方法 “00”號羊腸線生理鹽水沖洗后剪段(0.3～0.7 cm)消毒備用。乙醚麻醉穴位埋線治療組大鼠后消毒相應穴位，專用埋線針將羊腸線埋植入穴位0.5～0.8 cm深度，穴位無須特殊處理。每9 d重復穴位埋線一次，連續(xù)3次，共計27 d。

1.2.4 檢測方法 在d 28處死各組大鼠，取血5 mL分離血清，酶聯(lián)免疫吸附法測定血清IL-1β、IL-2水平，放射免疫法測定血清TNF-α水平。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結 果

模型組致炎后血清IL-1β、IL-2、TNF-α含量與空白組間差異有統(tǒng)計學意義(t=39.756，P<0.01；t=65.818，P<0.01；t=38.676，P<0.01)；治療組血清IL-1β、IL-2、TNF-α含量與空白組、模型組間差異有統(tǒng)計學意義(t=30.433，P<0.01；t=41.139，P<0.01；t=27.697，P<0.01)(表1)。

表1 各組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-2含量比較

注：與空白組比較*P<0.01；與模型組比較△P<0.01

3 討 論

RA是以關節(jié)滑膜炎為主要特征的慢性自身免疫性疾病[3]，RA滑膜炎持續(xù)性反復發(fā)作可導致關節(jié)內軟骨和骨的破壞，進而出現(xiàn)關節(jié)功能障礙甚至殘疾，血管病變可累計全身各個器官，多種免疫活性細胞及細胞因子、炎癥介質共同參與RA致病過程，IL-1、IL-2及TNF都可作為炎癥因子參與機體免疫應答。有研究認為，大鼠AA模型可以引起遲發(fā)性超敏反應，常小榮等[4]發(fā)現(xiàn)針灸可以降低RA及AA大鼠外周單核細胞和滑膜巨噬細胞分泌IL-1、IL-2及TNF的能力。

穴位埋線療法的主要作用有協(xié)調臟腑、平衡陰陽、疏通經(jīng)絡、調和氣血、補虛瀉實、扶正祛邪，穴位埋線療法對機體功能減退、免疫力低下者治療效果明顯，具有提高機體免疫功能的作用。高德榮等[5]以穴位埋線法為主要方法治療RA 2 039例療效明顯，總有效率為98%。

本研究通過建立AA大鼠模型觀察穴位埋線療法對AA大鼠血清IL-1β、IL-2及TNF-α含量的影響，探討穴位埋線療法對RA的作用機制，研究結果表明，穴位埋線療法能夠明顯降低AA大鼠血清IL-1β、IL-2及TNF-α的水平而產生抗類風濕樣作用。

[1]劉春榮,周世友,何國棟.中西藥治療類風濕性關節(jié)炎研究進展[J].右江醫(yī)學,2013,3:437-441.

[2]黃國均,黃勤挽.醫(yī)藥實驗動物模型制作與運用[M].北京:化學工業(yè)出版社，2007:482-485.

[3]沈杰,楊曉玲,許榮.致炎性細胞因子與類風濕關節(jié)炎的相關性研究[J].浙江預防醫(yī)學,2002.14(7):12.

[4]常小榮,劉梨,艾坤,劉美榮.電針足三里、關元對佐劑性關節(jié)炎大鼠IL-1,IL-2,IL-10,TNF-α的影響[J].中國骨質疏松雜志,2009,02:107-110.

[5]高德榮,高德貴,高露,等.穴位埋線治療類風濕性關節(jié)炎2039例[A].世界針灸學會聯(lián)合會、世界衛(wèi)生組織、中國中醫(yī)科學院、北京市中醫(yī)管理局.世界針灸學會聯(lián)合會成立20周年暨世界針灸學術大會論文摘要匯編[C].世界針灸學會聯(lián)合會、世界衛(wèi)生組織、中國中醫(yī)科學院、北京市中醫(yī)管理局,2007:2.

[責任編輯：李薊龍]

李淑娟(1963-)，女，北京順義人，副主任護師。

R 242

B

10.3969/j.issn.1673-1492.2015.04.020

來稿日期：2015-05-11