周 飛

(河南省濟(jì)源市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南濟(jì)源 454650)

一例豬沙門氏桿菌病的診斷和防治

周 飛

(河南省濟(jì)源市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南濟(jì)源 454650)

豬沙門氏菌病又稱仔豬副傷寒,是由豬霍亂和豬傷寒沙門氏桿菌引起的仔豬腹瀉性傳染病。本病多發(fā)生于1～4月齡的仔豬,4月齡以上的仔豬很少發(fā)生此病。該病一年四季均有發(fā)生,但冬春季節(jié)發(fā)病較多,一般呈散發(fā)性或地方流行性,在多雨潮濕氣候多變季節(jié)發(fā)病較多。主要經(jīng)消化道傳播,交配或人工授精也可以傳播本病,根據(jù)臨床診斷剖檢特點可分為急性型、亞急性型和慢性型［1］。為了進(jìn)一步做該病的防治工作,作者對送檢的疑似豬沙門氏菌病的豬,進(jìn)行病原菌的分離鑒定、生化試驗、動物試驗和藥敏試驗等。

豬沙門氏桿菌病;診斷;防治

1 材料與方法

1.1 試驗地點、時間

本試驗研究于2014年3月至5月間在河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院傳染病實驗室進(jìn)行。

1.2 實驗動物

試驗用健康小白鼠由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院動物房提供。

1.3 主要試劑、藥品

1.3.1 主要試劑 甲基紅（M-R）試劑、二乙酰（V-P）試劑、吲哚試劑、硝酸鹽還原試劑、溴甲酚紫酒精溶液、a-萘酚酒精溶液、氫氧化鉀、檸檬酸鈉、硫酸鎂、溴麝香草酚藍(lán)酒精溶液、對位氨基苯磺酸、醋酸溶液、a-萘胺、酚紅溶液等。

1.3.2 主要培養(yǎng)基 伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基、由杭州天和微生物制劑有限公司提供；鮮血瓊脂培養(yǎng)基，由鄭州安圖綠科生物工程有限公司生產(chǎn)；普通肉湯，以上培養(yǎng)基均的按常規(guī)方法配制。糖類生化管、硫化氫生化管、枸櫞酸鹽生化管，由杭州天和微生物試劑有限公司提供。

1.3.3 主要藥敏紙片 標(biāo)準(zhǔn)藥敏紙片均在有效期內(nèi)，由北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司提供。

1.4 主要儀器設(shè)備

電熱恒溫隔水式培養(yǎng)箱（PYX-DHS-BS-II），上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠生產(chǎn)；超凈工作臺，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司生產(chǎn)；冰箱、電爐、高壓鍋、天平、燒杯、培養(yǎng)皿、量筒等由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)傳染病實驗室提供。

1.5 操作過程和方法

1.5.1 常規(guī)觀察法（包括臨床觀察和剖檢變化）。

1.5.2 染色鏡檢與形態(tài)觀察 在無菌條件下，分別取病死豬的心、肝、脾、肺等病變部位，做一組織抹片，經(jīng)革蘭氏染色，鏡檢觀察。

1.5.3 病原菌的分離和培養(yǎng) 在無菌條件下，取病死豬的心、肝、脾、肺等，無菌剪取組織塊，置于溫箱37℃培養(yǎng)18～24h。經(jīng)顯微鏡初步選取目的菌，按常規(guī)操作在血液瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、伊紅美蘭瓊脂平板上劃線37℃培養(yǎng)18～22h后觀察培養(yǎng)特性，并選取典型疑似菌落，接種于普通肉湯中，經(jīng)37℃培養(yǎng)18～24h后無雜菌生長者，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.4 細(xì)菌的生化試驗 取經(jīng)過純化的分離菌株，分別接種于蔗糖、山梨醇、葡萄糖、甘露糖、乳糖、麥芽糖、枸櫞酸鹽、硫化氫、硝酸鹽還原等生化管中，37℃培養(yǎng)18～24h后，觀察其生化反應(yīng)的特性。

1.5.5 致病性試驗 取純化鑒定后的菌株，接種于普通肉湯培養(yǎng)基中，經(jīng)18～24h培養(yǎng)，取培養(yǎng)物腹腔注射于體重15～17g的健康小白鼠，試驗分兩組，每組4只小鼠，每只接種0.2 ml，同時每組設(shè)對照2只，對照組腹腔注射滅菌過的鹽水0.2 ml。觀察發(fā)病和死亡情況、剖檢變化，并對小白鼠的肝臟進(jìn)行病原菌的再分離。

1.5.6 藥敏試驗 采用紙片擴(kuò)散法。將上述經(jīng)過分離鑒定的純菌株采用常規(guī)藥敏片法進(jìn)行藥敏試驗，即將其接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板上，取無菌生理鹽水0.1ml滴入平板中，涂布均勻，加入藥敏紙片，置37℃培養(yǎng)24h，觀察抑菌圈的大小并記錄結(jié)果，判斷標(biāo)準(zhǔn)是直徑在10mm以下的為耐藥，直徑在10～15mm的為中度敏感，直徑在大于15mm的為高度敏感。

2 結(jié)果

2.1 臨床檢察結(jié)果

2.1.1 臨床觀察 發(fā)病豬均在2月齡左右，病豬主要表現(xiàn)為：病初部分仔豬便秘，接著下痢，糞便呈灰白色，后腹瀉呈淡綠色，惡臭，混有血液、壞死組織或纖維碎片，便秘與下痢交替反復(fù)，食欲減退，體溫升高至40.5～41.5℃，呈稽留熱，畏寒、喜鉆墊草或擠在一起。病豬消瘦、呼吸困難、精神沉郁、食欲減少、被毛粗亂、皮膚蒼白、眼角有粘性或膿性分泌物，有惡臭，一周后豬耳朵未端、腹部等出現(xiàn)紫斑。病程多數(shù)為2～3周，部分癥狀較輕仔豬病程更長，表現(xiàn)出生長發(fā)育不良，被毛粗亂、污穢、偶有下痢，其中部分病情惡化死亡，病死率25～50%。

2.1.2 剖檢變化 剖檢病死豬3頭，均可見病豬尸軀消瘦，肺臟可見點狀出血；脾臟增生性腫大呈暗藍(lán)色，切面隆起呈藍(lán)色、堅硬似橡皮；肝臟出血呈紅色，有出血點；胃底部和幽門部黏膜增厚紅腫、有小出血點；腸系膜淋巴結(jié)索狀腫脹充血，各臟器漿膜、膀胱粘膜以及腎臟皮質(zhì)有出血點；十二指腸粘膜充血，大腸黏膜有卡他性炎癥，盲腸、結(jié)腸的腸壁增厚，有淺平潰瘍和壞死，其中一頭病豬腸道黏膜表面上覆蓋一層彌漫性壞死性物質(zhì)（假膜），呈淡綠色糠麩樣，剝開見底部紅色，邊緣有不規(guī)則的潰瘍面，周圍呈堤狀隆起，這是典型的副傷寒濾泡潰瘍。

2.2 實驗室診斷結(jié)果

2.2.1 直接涂片染色鏡檢和細(xì)菌形態(tài)觀察 取具有典型病變的病死豬的肝、脾、肺等病變組織涂片、干燥、固定，革蘭氏染色鏡檢，可見到呈革蘭氏陰性的小桿菌，無芽孢，無莢膜，多單個存在。

2.2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果 該菌經(jīng)37℃培養(yǎng)24h后，在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長良好，形成中等大小、圓形、表面光滑、無色半透明、濕潤、邊緣整齊的粘液型菌落。肉湯中生長旺盛，均勻混濁。在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成無色、圓形、光滑、濕潤、邊緣整齊、微隆起半透明菌落。在伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基上形成無色、圓形、光滑、濕潤、邊緣整齊的半透明菌落。在SS瓊脂培養(yǎng)基上形成淡黃色、圓形、光滑、濕潤的小菌落。三糖鐵瓊脂斜面：斜面為紅色，底部變黃色并產(chǎn)氣。

2.2.3 致病性試驗結(jié)果 接種分離菌的8只小鼠均在24h后，出現(xiàn)精神萎靡、食欲不振。48h后有死亡，取死亡小鼠進(jìn)行剖檢，可見其肝臟有出血、白色壞死，心臟有出血點，腹腔積液，并可從肝臟、心血、腹水中分離到與原分離菌染色特征、生化特征一致的細(xì)菌。接種生理鹽水的對照組小鼠全部健活。

2.2.4 藥敏試驗結(jié)果 將分離鑒定的純菌株采用常規(guī)紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗，結(jié)果如表1。

表1 沙門氏菌藥敏試驗結(jié)果

3 分析與討論

（1）根據(jù)本次發(fā)病情況、臨床癥狀觀察、病理剖檢變化以及實驗室檢測結(jié)果，可確診該豬場本次疫情主要是豬沙門氏菌病，病原菌為豬霍亂沙門氏桿菌。

（2）病因分析：根據(jù)該場發(fā)病情況，半月前從外地購買仔豬，突然發(fā)病，整窩發(fā)病，死前沒有任何癥狀，治療不當(dāng)，部分豬形成僵豬，原因有：

外地購豬，仔豬經(jīng)過長途運(yùn)輸、饑餓、疲勞、驅(qū)趕等各種應(yīng)激反應(yīng)，再加上飼喂不及時，日喂量不足等，豬抵抗力降低，加之這些豬未經(jīng)仔豬副傷寒免疫，病豬也沒有及時隔離，通過飲水，用具等在短短的幾天內(nèi)波及全群，呈暴發(fā)性流行。沒有堅持自繁自養(yǎng)的原則，仔豬是從農(nóng)村鄉(xiāng)鎮(zhèn)豬市收購而來，豬群生長狀況、免疫情況參差不齊，有些豬未注射仔豬副傷寒疫苗，并且沒有采取隔離、消毒等防疫措施，帶進(jìn)病原。

飼養(yǎng)管理粗放，圈舍簡陋，衛(wèi)生條件差，并且圈舍擁擠，陰暗潮濕；防疫措施不力，消毒不嚴(yán)，病豬沒有及時隔離，通過飲水、用具等很快波及全群。

治療不當(dāng)，病初按病毒病治療，沒有明顯效果，以致延誤病情。懷疑傷寒后雖然加入一定抗生素，但給藥途徑不對，未做藥敏試驗，造成部分豬治療不力，形成僵豬長期排毒。

（3）豬沙門氏菌病發(fā)病原因復(fù)雜，要做該病的預(yù)防工作需要從多方面做起：

本病是由于仔豬的飼養(yǎng)管理和衛(wèi)生條件不良促進(jìn)發(fā)生和傳播的，因此，預(yù)防本病的根本措施是認(rèn)真貫徹“預(yù)防為主，防重于治”的方針。首先應(yīng)該改善飼養(yǎng)管理和衛(wèi)生條件，增強(qiáng)仔豬抵抗力，飼養(yǎng)用具和食槽經(jīng)常洗刷，圈舍要清潔，經(jīng)常保持干燥，及時清除糞便，用消毒藥品對圈舍進(jìn)行消毒。嚴(yán)把引種關(guān)、防止購進(jìn)帶毒后備種豬。豬場在向外引進(jìn)種豬時，應(yīng)先詳細(xì)了解種豬來源場的情況，尤其是疫病史的調(diào)查。引進(jìn)后要進(jìn)行隔離觀察和豬瘟等疫病的檢查。經(jīng)證實完全健康方可進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)合群。最好是本場能培育無豬瘟帶毒和其他繁殖障礙疫病的種豬。

制定科學(xué)合理且符合本場的免疫程序，在注射疫苗前后3d，在豬群的飲水中添加維生素和微量元素，能產(chǎn)生較好的免疫應(yīng)答，提高豬群抗體的免疫力。但是在疫苗免疫注射的前后一周內(nèi)最好不要使用抗生素等藥物。定期進(jìn)行免疫效果監(jiān)測，常規(guī)免疫監(jiān)測種豬每年兩次，肉豬每季度一次，以便掌握本場的實際情況。抓好日常預(yù)防工作，本病一年四季均有發(fā)生，在多雨潮濕氣候多變季節(jié)發(fā)病較多，平時要加強(qiáng)疫病的防控工作，提前做好預(yù)防十分重要。疫苗預(yù)防，在本病常發(fā)區(qū)內(nèi)，可對1月齡以上哺乳或斷奶仔豬，用仔豬副傷寒凍干弱毒菌苗預(yù)防，用20%氫氧化鋁生理鹽水稀釋，肌肉注射lml，免疫期9個月；口服時，按瓶簽說明，服用前用冷開水稀釋成每頭分5～10ml，摻入料中喂服?；?qū)⒚恳活^份疫苗稀釋于1～10ml冷開水中灌服。藥物預(yù)防，平常可定期對未發(fā)病的豬居中可在飼料中添加抗生素類藥物預(yù)防，飼喂添加抗生素的飼料時要注意抗菌藥株的出現(xiàn)。無論采用哪種方法，都必須堅持改善飼養(yǎng)管理及衛(wèi)生條件相結(jié)合，才能收到滿意的效果。

加強(qiáng)豬場的消毒工作，常規(guī)消毒為每周1～2次，保證做到立體消毒，應(yīng)先從上空再到豬群再到地面，并定期更換消毒藥，發(fā)生疫情時酌情增強(qiáng)消毒次數(shù)。真正做到全進(jìn)全出，對空置欄要進(jìn)行徹底消毒，產(chǎn)房、保育舍最好進(jìn)行熏蒸消毒。凈化豬場，病死豬要嚴(yán)格處理，不能隨便亂扔。對流產(chǎn)、早產(chǎn)、產(chǎn)畸形死胎的母豬進(jìn)行跟蹤，發(fā)現(xiàn)是帶毒豬應(yīng)及時淘汰。

發(fā)現(xiàn)本病后應(yīng)立即隔離治療，在治療時要考慮在發(fā)病過程中機(jī)體受損較重，不能在治療取得一定療效后立即停藥（這在農(nóng)村較常見），而應(yīng)持續(xù)用藥4～7d，以避免病情發(fā)生反復(fù)而導(dǎo)致不必要的死亡。在治療過程中要加強(qiáng)護(hù)理與增加營養(yǎng)，以提高仔豬的抗病力，有利于康復(fù)。要對同群豬進(jìn)行藥物預(yù)防，堅持自繁自養(yǎng)的原則，防止長途運(yùn)輸、饑餓、疲勞、驅(qū)趕、防疫等各種應(yīng)激因素的發(fā)生。如果不能避免，盡量不要讓各種應(yīng)激因素累加。

（4）治療：對發(fā)病豬群注射阿米卡星30mg/kg，維生素C 2ml/頭，樟腦磺酸納2ml/頭，5%葡萄糖生理鹽水150ml/頭，混合1次靜脈注射，對嚴(yán)重病例靜注2次，以后肌肉注射阿米卡星30mg/kg或氨芐青霉素25mg/kg交替使用，8 h注射1次，連用3d。3d后豬群明顯好轉(zhuǎn)。

[1] 陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：119-127.

[2] 謝正，吳挹芳.現(xiàn)代微生物培養(yǎng)基和試劑手冊[M].福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1994：1501-1571.

[3] 徐迪誠，蔡妙英.革蘭陰性桿菌新編碼鑒定手冊[M].哈爾濱：黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社，1994：1637-1643.