黃宇，楊年，周飛

(四川省人民醫(yī)院城東病區(qū) 婦產(chǎn)科，四川 成都 610041)

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大劑量二甲雙胍對(duì)卵巢癌患者血清HE4、LPA與Tr的影響研究

黃宇，楊年，周飛

(四川省人民醫(yī)院城東病區(qū) 婦產(chǎn)科，四川 成都 610041)

目的 探討大劑量二甲雙胍對(duì)卵巢癌患者血清人附睪分泌蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)、溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid，LPA)與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell，Treg)的影響。方法 選取已確診為單側(cè)卵巢癌患者80例，根據(jù)單次二甲雙胍服用劑量分為4組：A組：0.85克/次，B組：0.5 克/次，C組：0.25 克/次；D組：僅常規(guī)治療。4組均給予手術(shù)及常規(guī)化療，配合3次/天口服二甲雙胍，連續(xù)2周，治療前后檢測(cè)各組患者血清HE4、LPA、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)、白細(xì)胞介素-10(interleukin-10，IL-10)含量，以及CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分比。結(jié)果 分別與C、B、D組相比較，A組患者的療效更好，表現(xiàn)為：血清HE4含量明顯下降(P<0.05)；血清LPA含量明顯降低(P<0.05)；血液CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分比明顯下降(P<0.05)；血清TGF-β1、IL-10含量明顯下降(P<0.05)。結(jié)論 大劑量的二甲雙胍能夠降低卵巢癌患者血清HE4、LPA含量，減少調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分比及其相關(guān)細(xì)胞因子含量，對(duì)抑制癌細(xì)胞的增殖浸潤(rùn)起到積極作用。

二甲雙胍；卵巢癌；人附睪分泌蛋白4；溶血磷脂酸；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于宮頸癌及宮體癌，但其死亡率卻居于首位[1]。 卵巢癌多發(fā)生于50歲以上婦女，在發(fā)達(dá)國(guó)家(除日本外)其發(fā)病率為9～17/10萬(wàn)[2]，在所用生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中占23%，病死率高達(dá)47%，而我國(guó)卵巢癌的發(fā)病率為7.1/10萬(wàn)，并有逐年上升的趨勢(shì)。因此，早期采用合理的治療方法尤為重要。二甲雙胍是一種傳統(tǒng)的降糖藥物，近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍還具有抗卵巢癌等抗腫瘤的作用，其可以降低卵巢癌發(fā)病率、提高患者生存率[3]。體外研究亦表明，二甲雙胍能抑制卵巢癌細(xì)胞SKOV3的增殖并誘導(dǎo)其凋亡[4]。近年來(lái)有體外研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)二甲雙胍對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有一定程度的抑制作用，并可顯著增強(qiáng)化療藥物的抗腫瘤作用[5]。然而，目前關(guān)于二甲雙胍應(yīng)用于卵巢癌的臨床研究較少。因此，本研究對(duì)采用二甲雙胍配和治療的卵巢癌患者進(jìn)行研究，觀察其血清人附睪分泌蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)、溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid，LPA)與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell，T)及相關(guān)因子變化，探討二甲雙胍對(duì)卵巢癌的治療作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集四川省人民醫(yī)院城東病區(qū)2013年1月～2015年5月的確診為單側(cè)卵巢癌擬行手術(shù)治療的患者80例，年齡在30～82歲，平均年齡(58.2±7.4)歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)：診斷依據(jù)根據(jù)2012卵巢癌包括輸卵管癌和原發(fā)腹膜癌臨床實(shí)踐指南第2版[6]并經(jīng)術(shù)后病理學(xué)檢查確診，腫瘤分期為Ⅰ-Ⅱ期；排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有糖尿?。虎诤喜⑵渌麗盒阅[瘤；③合并嚴(yán)重的心腦血管疾?。虎芨?、腎功能衰竭；⑤非首次發(fā)病，經(jīng)過(guò)手術(shù)、化療、放療等治療的畫著；⑥不能耐受二甲雙胍。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：將患者隨機(jī)分為A組、B組、C組、D組，各20例。所有患者均經(jīng)腹腔鏡行手術(shù)切除患側(cè)卵巢及周圍淋巴結(jié)，術(shù)后配合TP化療方案(術(shù)后第1天靜滴泰素220 mg溶于500 mL 50 g/L葡萄糖注射液，第2天將順鉑80 mg溶于2000 mL 0.9%氯化鈉注射液進(jìn)行腹腔灌注)聯(lián)合治療，常規(guī)水化、解毒、止吐、維持電解質(zhì)平衡。A、B、C 3組患者在術(shù)后常規(guī)治療的基礎(chǔ)上加用鹽酸二甲雙胍片(中美上海施貴寶制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字J20080067)3次/天，口服治療，連續(xù)服用2周，單次劑量：A組：0.85 g/次，B組：0.5 g/次，C組：0.25 g/次；D組作為對(duì)照組。

1.2.2 血清指標(biāo)采集：服用二甲雙胍治療前后，所有研究對(duì)象均采集空腹12 h后靜脈血10 mL，其中5 mL分離血清，選用HE4、LPA、TGF-β1、IL-10檢測(cè)試劑盒、試劑盒(鄭州安賽生物科技有限公司)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明，采用F.A.M.E.16/30全自動(dòng)酶標(biāo)儀(瑞士哈美頓公司)，通過(guò)酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)血清中HE4、LPA、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、IL-10含量；剩余5 mL靜脈血加入肝素抗凝，分離淋巴細(xì)胞，采用流式細(xì)胞分析儀(BD FACSCanto II)分析CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞所占百分比。

2 結(jié)果

2.1 治療前后各組患者血清HE4含量比較 與治療前比較，各組血清HE4含量均明顯下降(P<0.05)，治療后，各組血清HE4含量?jī)蓛杀容^，A組

表1 治療前后各組患者血清HE4含量比較， μmol/L)Tab.1 Comparison of HE4 of two groups beford and after ±s， μmol/L)

*P<0.05，與治療前比較，compared with before treatment；，#P<0.05，與D組比較，compared with D group after treatment；△P<0.05，治療后與A組比較，compared with A group after treatment；▲P<0.05，治療后與B組比較，compared with B group after treatment

2.2 治療前后各組患者血清LPA含量比較 與治療前比較，各組血清LPA含量均明顯下降(P<0.05)；治療后，各組血清LPA含量?jī)蓛杀容^，A組

表2 治療前后各組患者血清LPA含量比較， μmol/L)Tab.2 Comparison of LPA of two groups before and after ±s， μmol/L)

*P<0.05，與治療前比較，compared with before treatment；#P<0.05，與D組比較，compared with D group after treatment；△P<0.05，治療后與A組比較，compared with A group after treatment；▲P<0.05，治療后與B組比較，compared with B group after treatment

2.3 治療前后各組患者血液CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分比比較 與治療前比較，各組血液CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分比均明顯下降(P<0.05)，治療后，各組血液CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分比兩兩比較，A組

組別例數(shù)治療前 治療后A組206.48±0.863.11±0.43*#▲B組206.50±0.914.03±0.56*#△C組206.52±0.934.72±0.53*#△▲D組206.47±0.885.36±0.68*△▲F—0.01259.889P—0.9810.000

*P<0.05，與治療前比較，compared with before treatment；#P<0.05，與D組比較，compared with D group after treatment；△P<0.05，治療后與A組比較，compared with A group after treatment；▲P<0.05，治療后與B組比較，compared with B group after treatment

2.4 治療前后各組患者血清TGF-β1、IL-10含量比較 與治療前比較，各組血清TGF-β1、IL-10含量均明顯下降(P<0.05)，治療后，各組中血清TGF-β1、IL-10含量?jī)蓛杀容^，A組

組別例數(shù)TGF-β1(pg/mL)治療前治療后IL-10(ng/mL)治療前治療后A組20256.64±36.27128.64±15.78*#▲28.05±4.8617.54±2.45*#△B組20249.34±32.67146.36±21.65*△▲28.76±4.5419.16±2.78*#△C組20262.45±37.23164.76±24.87*#△▲27.67±3.2220.98±2.15*#△▲D組20254.66±29.46183.79±26.85*△▲27.99±3.6721.77±3.65*△▲F—0.50621.9130.2489.071P—0.5130.0000.7850.001

*P<0.05，與治療前比較，compared with before treatment；#P<0.05，與D組比較，compared with D group after treatment；△P<0.05，治療后與A組比較，compared with A group after treatment；▲P<0.05，治療后與B組比較，compared with B group after treatment

3 討論

卵巢癌屬于女性生殖器官常見惡性腫瘤，常發(fā)于圍絕經(jīng)期婦女，其發(fā)病原因尚不明確，其可能與內(nèi)分泌、免疫功能、精神及遺傳等因素有關(guān)，該病發(fā)病率高，預(yù)后差且死亡率高，對(duì)患者的生命安全帶來(lái)嚴(yán)重威脅[7]。二甲雙胍是糖尿病一線降糖藥物，其降糖效果只作用于糖代謝異?；颊撸鴮?duì)健康人群血糖無(wú)影響。多項(xiàng)研究顯示[8-10]，二甲雙胍能夠降低糖尿病患者結(jié)直腸癌、胰腺癌、膀胱癌等惡性腫瘤的發(fā)病率，死亡率也隨之降低。許多學(xué)者認(rèn)為[11]，這與二甲雙胍激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的信號(hào)通路有關(guān)，可以促進(jìn)抑癌基因LKB1的表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，同時(shí)還可以減少腫瘤細(xì)胞內(nèi)源性脂肪酸的合成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡；二甲雙胍還具有誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯的作用，研究發(fā)現(xiàn)[12]，二甲雙胍能夠增加A 2780/DDP對(duì)順鉑的敏感性以及A 2780/TAX對(duì)紫杉醇的敏感性，二甲雙胍可通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路降低P-gp的表達(dá)。在本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)檢測(cè)卵巢癌患者經(jīng)不同劑量二甲雙胍治療后血清HE4、LPA與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及相關(guān)因子的水平，探討二甲雙胍對(duì)卵巢癌的影響。

HE4屬于酸性蛋白質(zhì)，是新發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物，研究發(fā)現(xiàn)，HE4在正常的卵巢組織中較少表達(dá)，而在卵巢癌組織中呈高度表達(dá)，其表達(dá)量和外周血清含量隨卵巢癌惡性程度的增高而增高[13]，而且在肺癌、腎癌等其他惡性腫瘤中的表達(dá)未見明顯升高，是診斷卵巢癌特異性和敏感性較高的指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，各組血清HE4含量與治療前比較均明顯下降(P<0.05)，治療后，各組血清HE4含量比較，A組

LPA是細(xì)胞間磷脂類信號(hào)分子，可以與G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。資料顯示，LPA 作為細(xì)胞間“多功能磷脂信使”，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)卵巢癌細(xì)胞可以產(chǎn)生LPA，反過(guò)來(lái)LPA 又可促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)新生血管生成等[14]，卵巢癌上皮存在大量的LPA受體，卵巢癌患者血液和腹水內(nèi)LPA含量均升高，2者結(jié)合，促進(jìn)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)與增殖，同時(shí)提高癌細(xì)胞的耐藥性。本研究結(jié)果顯示，各組血清LPA含量與治療前比較均明顯下降(P<0.05)，治療后，各組血清LPA含量比較，A組

近年來(lái)，隨著免疫學(xué)的發(fā)展，人們認(rèn)為惡性腫瘤的產(chǎn)生于免疫失調(diào)關(guān)系密切。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一組具有免疫調(diào)控作用的細(xì)胞群，對(duì)其他免疫細(xì)胞的功能具有抑制作用。研究發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對(duì)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)起到抑制作用[15]，在卵巢癌患者的外周血中，CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分比明顯升高[16]，其分泌合成的TGF-β1、IL-10含量也明顯升高，TGF-β1能夠刺激調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)化，IL-10對(duì)自然殺傷(NK)細(xì)胞及其細(xì)胞因子的產(chǎn)生器抑制作用，從而下調(diào)機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫能力。本研究結(jié)果顯示，各組血液CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分比、血清TGF-β1、IL-10含量均明顯下降(P<0.05)，治療后，各組血液CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分比、血清TGF-β1、IL-10含量比較，A組

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)80例單側(cè)卵巢癌患者治療前后血清HE4、LPA含量、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分比及其相關(guān)細(xì)胞因子含量的分析，證實(shí)了大劑量的二甲雙胍能夠?qū)σ种坡殉舶┗颊甙┘?xì)胞的增殖浸潤(rùn)起到積極作用。在下一步研究中，將研究二甲雙胍不良反應(yīng)的影響因素，為二甲雙胍更好的應(yīng)用于卵巢癌的治療奠定基礎(chǔ)。

[1] 劉云.人附睪蛋白4在卵巢癌中的研究進(jìn)展[D].蚌埠醫(yī)學(xué)院, 2014.

[2] 李紅霞.卵巢癌規(guī)范化治療的幾個(gè)問(wèn)題[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué), 2005, 33(1)：1-3.

[3] 朱杰, 孫紅.二甲雙胍與卵巢癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J].國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志, 2014, 41(1)：52-56.

[4] 張貝貝.二甲雙胍在卵巢癌細(xì)胞SKOV3體外增殖及凋亡中的作用[D].吉林大學(xué)， 2013.

[5] 張濤.二甲雙胍對(duì)膀胱癌的抑制作用及其機(jī)制研究[D].山東大學(xué)，2014.

[6] 林仲秋, 李晶.NCCN《2012卵巢癌包括輸卵管癌和原發(fā)腹膜癌臨床實(shí)踐指南第2版》解讀[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志, 2012, 39(3)：163-165.

[7] 王立成.化療聯(lián)合康艾注射液治療晚期卵巢癌的效果觀察[J].中國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理， 2015(3)：84-86.

[8] 張艷飛.二甲雙胍對(duì)2型糖尿病合并結(jié)直腸癌患者預(yù)后的影響及其機(jī)制[D].南方醫(yī)科大學(xué), 2013.

[9] 任艷飛.2型糖尿病及二甲雙胍治療對(duì)惡性腫瘤患者病死率的影響[J].中國(guó)糖尿病雜志, 2012,4(6)：384.

[10] 周小智.AGEs對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW-480增殖的影響及二甲雙胍干預(yù)作用的研究[D].南方醫(yī)科大學(xué), 2010.

[11] 陳兆煜, 王連唐, 陳雁揚(yáng).二甲雙胍通過(guò)激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的抗腫瘤機(jī)制[J].中國(guó)肺癌雜志, 2013, 16(8)：427-432.

[12] 彭錚, 史惠蓉, 謝婭，等.二甲雙胍通過(guò)核因子-κB信號(hào)通路抑制p-糖蛋白逆轉(zhuǎn)卵巢癌細(xì)胞耐藥性的研究[J].中國(guó)婦幼保健, 2015, 30(8)：1247-1250.

[13] 王丹丹, 李燕華, 張競(jìng).卵巢癌組織中HE4表達(dá)及與其臨床病理因素的關(guān)系[J].實(shí)用癌癥雜志, 2012, 27(6)：578-582.

[14] 丁峰, 鈕彬.卵巢癌患者溶血磷脂酸和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子檢測(cè)的臨床意義[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志, 2013, 30(9)：775-777.

[15] 盧曉婷, 劉俊田.CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在腫瘤免疫及化療方面的研究進(jìn)展[J].中國(guó)腫瘤臨床, 2008, 35(11)：656-658.

[16] 嚴(yán)波, 燕善軍.惡性腫瘤患者腹水及外周血中CD4+CD25+CD127low調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)及其意義[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志, 2010, 26(9)：1570-1572..

(編校：王冬梅)

Effect of high dose metformin on serum HE4, LPA and regulatory T cells in patients with ovarian cancer

HUANG Yu, YANG Nian, ZHOU Fei

(Department of Obstetrics and Gynecology, East SiChuan Province People’s Hospital Ward, Chengdu 610041, China)

ObjectiveTo analysis the effect of high dose metformin on serum HE4, LPA and regulatory T cells in patients with ovarian cancer.Methods80 cases of unilateral ovarian cancer patients were given surgery and conventional chemotherapy,were divided into four groups according to single metformin dose: (group A: 0.25g each time, B group: 0.25g each time, group C: 0.25g each time; group D: conventional treatment only)and three times a day oral administration of metformin and two weeks in a row, before and after the treatment of detection each serum HE4, LPA, transformation growth factor beta 1 (TGF - beta 1), interleukin - 10 (IL-10) content, and CD4+CD25+CD127 regulating T cell percentage.ResultsCompared with B, C, and D group, the efficacy of patients in group A was better, as follows: Serum HE4 content decreased significantly (P<0.05); serum LPA content decreased significantly (P<0.05); blood CD4+CD25+CD127 regulatory T cell percentage decreased significantly (P<0.05); serum TGF beta 1, IL-10 content decreased significantly (P<0.05).The results were statistically significant.ConclusionHigh dose of metformin can reduce serum HE4, LPA content, reduce the adjusting the percentage of T cells and related cytokines in patients with ovarian cancer, and play a positive role in inhibit cancer cell proliferation and invasion.

metformin; ovarian cancer; HE4; LPA; regulatory T cells

黃宇，男，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：婦科腫瘤和婦科內(nèi)鏡，E-mail：sichuanhyu@163.com。

R737.31

A

1005-1678(2015)07-0076-03