安 宇，唐耘熳，譚樹林，黃建林，熊國兵，李 俊

(1.四川省醫(yī)學科學院·四川省人民醫(yī)院 a.泌尿外科，b.小兒外科，四川 成都 610072；2.四川省德昌縣中醫(yī)院泌尿外科，四川 德昌 615500)

表皮生長因子及其受體在尿道型陰莖彎曲畸形陰莖皮膚及纖維短縮尿道中的表達特征分析

安 宇1a，唐耘熳1b，譚樹林2，黃建林1a，熊國兵1a，李 俊1a

(1.四川省醫(yī)學科學院·四川省人民醫(yī)院 a.泌尿外科，b.小兒外科，四川 成都 610072；2.四川省德昌縣中醫(yī)院泌尿外科，四川 德昌 615500)

目的 探討尿道型陰莖彎曲畸形陰莖皮膚及纖維短縮尿道組織中表皮生長因子(EGF)及其受體(EGFR)的表達特征。方法 收集25例接受手術治療的尿道型陰莖彎曲患者陰莖背側、腹側皮膚和纖維短縮尿道組織(尿道型陰莖彎曲組)，以包皮過長患者18例作為正常對照組，收集包皮環(huán)切術中正常陰莖背側、腹側包皮組織。組織標本經免疫組化LSAB法染色后檢測EGF、EGFR表達特征。結果 正常陰莖包皮及尿道型陰莖彎曲組織EGF、EGFR均存在陽性表達。尿道型陰莖彎曲背側、腹側包皮EGF及EGFR表達與正常對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P> 0.05)。尿道型陰莖彎曲自身背側、腹側包皮EGF及EGFR表達差異均無統(tǒng)計學意義(P> 0.05)；重度彎曲纖維短縮尿道與輕中度彎曲比較，EGFR表達顯著減低(P< 0.05)，EGF表達差異無統(tǒng)計學意義(P> 0.05)。結論 尿道型陰莖彎曲畸形陰莖皮膚及纖維短縮尿道組織中EGF和EGFR表達無顯著減少，重度彎曲纖維短縮尿道EGFR表達存在缺陷。

陰莖彎曲；表皮生長因子；表皮生長因子受體

先天性單純性陰莖彎曲畸形分為Ⅰ型皮膚型、Ⅱ型筋膜型、Ⅲ型海綿體型和Ⅳ型尿道型，尿道型陰莖彎曲屬于其中少見類型，約占7%，病因至今尚不明確，其臨床表現(xiàn)為尿道外口正位開口于陰莖頭，遠段尿道發(fā)育缺陷，呈特征性的纖維短縮尿道，并牽引陰莖向腹側彎曲[1，2]。人類表皮生長因子(epidermal growth factand，EGF)、表皮生長因子受體(epidermal growth factand receptand，EGFR)在上皮組織表面細胞均豐富表達，在泌尿生殖道上皮細胞的增殖分化和再生愈合過程中發(fā)揮著重要的調控作用。本研究以正常陰莖包皮組織為對照，觀察尿道型陰莖彎曲陰莖背、腹側皮膚EGF/ EGFR的表達規(guī)律；以自身為對照，觀察彎曲畸形發(fā)育不平衡的背、腹側皮膚EGF/ EGFR的表達是否存在差異；并觀察纖維短縮尿道EGF/ EGFR的表達特征，為手術治療尿道型陰莖彎曲提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 四川省人民醫(yī)院2005年8月至2014年10月診治的尿道型陰莖彎曲患者 25例，年齡2.4～18歲，平均年齡6.6歲。經人工勃起試驗致陰莖勃起后測量陰莖長度及彎曲角度[1]，陰莖長度2.2～7.1 cm，平均 4.1 cm。其中，彎曲30～45°11例，彎曲≥45° 14例。術中收集陰莖背側、腹側皮膚和纖維短縮尿道組織。同期陰莖正常包皮過長患者18例為對照，年齡3.9～12.4歲，平均年齡6.3歲，行包皮環(huán)切術，收集正常陰莖背、腹側包皮，未收集正常尿道組織。

1.2 方法 ①主要試劑及材料：一抗為兔抗EGF多體，兔抗EGFR單體，二抗為生物素標記羊抗兔IgG，三抗為辣根酶標記鏈霉卵白素。OLYMPUS雙目光學顯微鏡、Nikon顯微圖像采集系統(tǒng)。圖象分析軟件Image-Pro Plus 5.0。②免疫組織化學染色：組織標本采用免疫組化LSAB法染色(AEC顯色)并觀察EGF/ EGFR的表達特征[3]。陰性對照為PBS代替一抗染色的標本，陽性對照為中分化胃癌(EGF)和中分化結腸癌(EGFR)。EGF/ EGFR陽性染色判定標準為細胞漿中出現(xiàn)紅染顆粒，陽性表達結果以積分光密度(integrated optical density，IOD)表示。

1.3 統(tǒng)計學方法 運用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以均數(shù)±標準差表示，組間比較采用t檢驗。P< 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

陰性對照正常陰莖包皮及尿道型陰莖彎曲陰莖皮膚的各層組織中見細胞漿藍染，無細胞漿中紅色顆粒表達。陽性對照中分化胃癌標本EGF表達見細胞漿紅染，中分化結腸癌標本EGFR表達見細胞漿紅染。EGF和EGFR在正常陰莖包皮、尿道型陰莖彎曲全部標本的上皮組織全層細胞中均見陽性表達(圖1、圖2)。EGF和EGFR表達IOD值見表1。尿道型陰莖彎曲背側、腹側包皮EGF及EGFR表達與正常對照比較差異均無統(tǒng)計學意義(P> 0.05)。尿道型陰莖彎曲自身背側、腹側包皮EGF及EGFR表達差異均無統(tǒng)計學意義(P> 0.05)。重度彎曲纖維短縮尿道與輕中度彎曲比較，EGFR表達顯著減低(P< 0.05)，EGF表達差異無統(tǒng)計學意義(P> 0.05)。

表1 正常陰莖包皮、尿道型陰莖彎曲 EGF和EGFR表達IOD值

組別nhs-CRP(mg/L)治療前治療后2周TC(mmol/L)治療前治療后2周LDL-C(mmol/L)治療前治療后2周A組5015.32±0.953.67±0.54*5.67±1.243.10±0.89*4.07±0.981.50±0.35*B組5015.67±0.781.66±0.60*△#5.51±1.352.28±0.85*△#4.12±0.852.29±0.46*△#C組5014.98±0.567.89±0.88*5.49±1.413.93±0.73*4.11±0.892.68±0.56*D組5015.49±0.628.53±0.59*5.55±1.223.89±0.83*4.74±0.782.43±0.35*

圖1 組織標本免疫組化EGF表達觀察(AEC×400，箭頭示陽性細胞) a：正常包皮皮膚，陰性對照；b：尿道型陰莖彎曲皮膚，陰性對照；c：中分化胃癌EGF，陽性對照；d：正常陰莖背側包皮；e：正常陰莖腹側包皮；f：陰莖彎曲背側包皮；g：陰莖彎曲腹側皮膚；h：陰莖彎曲纖維尿道

圖2 組織標本免疫組化EGFR觀察(AEC×400，箭頭示陽性細胞) a：中分化結腸癌EGFR，陽性對照；b：正常陰莖背側包皮；c：正常陰莖腹側包皮；d：陰莖彎曲背側包皮；e：陰莖彎曲腹側皮膚；f：陰莖彎曲纖維尿道

3 討論

3.1 尿道型陰莖彎曲陰莖背、腹側皮膚和纖維短縮尿道EGF/EGFR分布規(guī)律 胚胎研究表明，胚胎期陰莖由彎曲狀態(tài)逐漸伸直，尿道溝卷管融合形成尿道[3，4]。若雄激素生成缺乏和作用不足，均可能導致靶組織和器官雄性化不足，陰莖和尿道發(fā)育停滯，從而出現(xiàn)不同類型的尿道下裂和陰莖彎曲等畸形[5，6]。Gupta等[7～9]體外培養(yǎng)和動物研究證明，EGF(EGFR)可調節(jié)性腺類固醇(雄激素)生成，反之雄激素可刺激EGF產生和EGFR成熟。EGF(EGFR)與雄激素的相互調節(jié)作用可誘導和促進雄性胎鼠中腎管分化。若胚胎期生殖管道雄激素生成和作用不足，阻斷性腺激素與EGF(EGFR)相互作用，機體內環(huán)境平衡破壞和內分泌紊亂均可能導致外生殖器發(fā)育畸形的發(fā)生。我們的研究結果提示，尿道型陰莖彎曲畸形的發(fā)生可能與皮膚、筋膜組織及尿道層面的EGF(EGFR)因素無關。分層分析發(fā)現(xiàn)，與輕中度彎曲相比，重度彎曲纖維短縮尿道EGFR表達顯著減低，而EGF表達差異無統(tǒng)計學意義，這表明彎曲畸形的程度越嚴重，EGFR表達缺陷越顯著，受體功能缺失越明顯。

3.2 尿道型陰莖彎曲EGF/EGFR表達特征對手術修復重建材料選擇的啟示 胃腸、呼吸、泌尿生殖道及角膜等上皮組織的表面細胞EGF/EGFR豐富表達，EGF(EGFR)既作用于組織的正常再生，調節(jié)表皮細胞增分化，又促進組織的創(chuàng)傷修復，刺激肉芽組織新生[10]。手術治療尿道型陰莖彎曲，原則上應充分游離并切除纖維性的尿道及其深面的攣縮纖維，解除限制后以充分矯正彎曲畸形，根據(jù)新尿道口位置裁選適宜的自身材料并重建尿道[11，12]。若發(fā)育缺陷的尿道組織保留過多，不僅彎曲畸形糾正不完全，而且術后短期內因殘存尿道端生長潛力和愈合能力欠佳而易發(fā)生吻合口尿瘺和尿道狹窄；但是若尿道周圍纖維組織游離過多不僅會造成陰莖腹側創(chuàng)面加大，循環(huán)損傷加重，而且需要重建的新尿道更長，自身材料選擇有限，皮瓣缺血壞死概率增加，組織修復及創(chuàng)傷愈合能力下降，尿瘺、尿道狹窄等并發(fā)癥更加難以避免。因而術者精細的手術操作和豐富的手術經驗都十分重要，需權衡利弊施治[13，14]。我們的體會是：①對于輕中度彎曲，皮膚及纖維短縮尿道EGF和EGFR并無顯著減少，適當保留近端部分發(fā)育尚好的纖維短縮尿道可能是合理的，這樣可以縮短重建尿道的長度，減少并發(fā)癥的發(fā)生。②對于重度彎曲，纖維短縮尿道EGFR表達存在缺陷，纖維性和菲薄尿道的保留不能過于積極，應考慮予以充分切除，以免殘留的纖維束引起下彎糾正不全和復發(fā)，避免尿道殘端吻合口愈合不良。③選擇相對健康、容易獲取、生長潛力和創(chuàng)傷修復能力較好的自身組織替代重建尿道。陰莖背側包皮較腹側材料充足，且EGF和EGFR表達與正常陰莖包皮無顯著性差異，因而背側帶蒂包皮瓣成為合適的材料。

尿道型陰莖彎曲病例少見，標本取材也相當不易，我們的研究樣本例數(shù)相對有限，大樣本的研究結果可能更能準確揭示EGF和EGFR的表達特征。同時，研究還不能擴展到各型彎曲畸形間相互比較，就目前技術及倫理限制下，這個問題尚難以解決。

[1] 唐耘熳，黃進，陳紹基，等.小兒先天性無尿道下裂陰莖彎曲畸形的解剖特點及診治[J].中國修復重建外科雜志，2006，20(3)：217-219.

[2] Donnahoo KK，Cain MP，Pope JC，et al.Etiology，management and surgical complications of congenital chordee without hypospadias[J].J Urol，1998，160(3 Pt 2)：1120-1122.

[3] 安宇，劉雪輝，唐耘熳，等.先天性尿道下裂和單純性陰莖下曲患者陰莖皮膚組織中雄激素受體表達研究[J].中國修復重建外科雜志，2012，25(4)：82-86.

[4] Baskin LS.Hypospadias and urethral development[J].J Urol，2000，163(3)：951-956.

[5] Quigley CA，Bellis AD，Marschke KB，et al.Androgen receptand defects：histandical，clinical，and molecular perspectives[J].Endocrine Reviews，1995，16：271-321.

[6] Kraft KH，Shukla AR，Canning DA.Hypospadias[J].Urol Clin Nandth Am，2010，37(2)：167-181.

[7] Gupta C，Siegel S，Ellis D.The role of EGF in testosterone-induced reproductive tract differentiation[J].Dev Biol，1991，146(1)：106-116.

[8] Gupta C，Jaumotte J.Epidermal growth factand binding in the developing male reproductive duct and its regulation by testosterone[J].Endocrinology，1993，133(4)：1778-1782.

[9] Gupta C，Singh M.Stimulation of epidermal growth factand gene expression during the fetal mouse reproductive tract differentiation：role of androgen and its receptand[J].Endocrinology，1996，137(2)：705-711.

[10]Gregandy LB，Luke JC.Acceleration tensile of strength incisions treated with EGF and TGF-β[J].Ann Surg，1988，208：788-794.

[11]Montag S，Palmer LS.Abnandmalities of penile curvature：chordee and penile tandsion[J].Scientific Wandld Journal，2011，28，11：1470-1478.

[12]Tang YM，Chen SJ，Huang LG，et al.Chordee without hypospadias：repandt of 79 Chinese prepubertal cases[J].J Androl，2007，[Epub ahead of print].

[13]Snodgrass W.A farewell to chordee[J].J Urol，2007，178(3 Pt 1)：753-754.

[14]Snodgrass WT.Management of penile curvature in children[J].Curr Opin Urol，2008，18(4)：431-435.

The expression features of epidermal growth factor and its receptor in genital tissue and fibrotic urethra of patients with urethral type penis bending deformity

AN Yu1a，TANG Yun-man1b，TAN Shu-lin2，HUANG Jian-lin1a，XIONG guo-bin1a，LI jun1a

(1a.Department of Urology Surgery，1b.Department of Pediatric Surgery，Sichuan Academy of Medical Sciences & Sichuan Provincial People’s Hospital，Chengdu 610072，China；2.Department of Urology Surgery，Dechang County Traditional Chinese Medicine Hospital，Dechang 615500，China)

TANGYun-man

Objective To investigate the expression characteristics of epidermal growth factor(EGF)and epidermal growth factor receptor(EGFR)in genital tissue and fibrotic urethra of patients with urethral type penis bending deformity.Methods Dorsal prepuce，ventral perimeatal skin and fibrotic urethra from 25 patients with the disease were harvested in surgery.The prepuce from 18 boys in circumcision was used as control.The expression distribution of EGF and EGFR was assessed with immunohistochemistry.Results The expressions of EGF an EGFR were positive in specimens from the both group.No significant difference in EGF or EGFR expressions was detected between skin specimens between the two groups(P> 0.05)，and between dorsal and ventral specimens from the patients(P> 0.05).However，EGFR expression was significant decreased in fibrotic urethra of serious deformity when compared to mild-to-moderate deformity(P< 0.05)，but no significant difference in EGF expression was detected.Conclusion No difference in EGF and EGFR expressions is detected in dorsal，ventral skin and fibrotic urethra of patients with urethral type penis bending deformity.In patients with serious deformity，the expression of EGFR is flawed.

Phallocampsis，Epidermal growth factor，Epidermal growth factor receptor

唐耘熳

R697+.1

A

1672-6170(2015)05-0087-04

2015-05-26；

2015-06-20)