廖樂樂吳麗霞李 敏唐干益

1.深圳市流花醫(yī)院藥劑科，廣東 深圳 518002；2.深圳市龍華新區(qū)觀瀾人民醫(yī)院藥劑科，廣東 深圳 518000

加壓提取對(duì)皂苷類成分體外抗氧化及抑菌活性的影響

廖樂樂1吳麗霞2李 敏1唐干益1

1.深圳市流花醫(yī)院藥劑科，廣東 深圳 518002；2.深圳市龍華新區(qū)觀瀾人民醫(yī)院藥劑科，廣東 深圳 518000

目的：探討采用加壓提取技術(shù)提取中藥中皂苷類成分對(duì)于其苷類成分體外抗氧化及抑菌活性的影響程度。方法：選取三七、黃芪、柴胡、甘草四味中藥作為研究對(duì)象，分別采取加壓提取技術(shù)和加熱回流提取技術(shù)來(lái)提取藥材中的皂苷類成分，比較兩種提取方式對(duì)藥材皂苷類成分體外抗氧化及抑菌活性的影響。結(jié)果：加壓提取工藝與加熱回流提取工藝相比，四種中草藥提取物對(duì)DPPH自由基的清除率略有提高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）；加壓提取法對(duì)四種中草藥皂苷類抑菌活性的影響明顯小于加熱回流提取法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。結(jié)論：加壓提取工藝對(duì)中草藥皂苷類成分中的抗氧化活性和抑菌活性并無(wú)明顯影響且耗時(shí)短，值得推廣應(yīng)用。

加壓提??；加熱回流提??；皂苷類；抗氧化；抑菌活性

皂苷類成分，實(shí)質(zhì)上就是知母、柴胡、白頭翁以及地榆等一系列中藥材中非常重要的組成部分?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究中明確提出，皂苷類成分具備的藥理作用較為廣泛，包括抗腫瘤、抗病毒、消炎、增強(qiáng)免疫力、抗衰老以及降血脂等，主要在于皂苷類成分能夠?qū)ψ杂苫钚援a(chǎn)生抑制作用，具備較強(qiáng)的抑菌作用與抗氧化作用。本文主要探討了加壓提取對(duì)皂苷類成分體外抗氧化及抑菌活性的影響，以期為中草藥皂苷類成分提取工作提供參考依據(jù)?，F(xiàn)將研究資料予以總結(jié)歸納，茲述如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與材料 以中藥材市場(chǎng)選購(gòu)的三七、黃芪、柴胡、甘草四味中藥作為研究對(duì)象。

實(shí)驗(yàn)器材：RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海之信儀器有限公司生產(chǎn)）；ZXRD-A5110型干燥箱（上海智城分析儀器制造有限公司生產(chǎn)）；SpectroArt200型紫外分光光度儀（美國(guó)威泰克生物科技股份有限公司生產(chǎn)）；ZXSP-A0430型生化培養(yǎng)箱（上海智城分析儀器制造有限公司生產(chǎn)）；ASE200型溶劑加速提取儀（美國(guó)Dionex公司生產(chǎn)）；Tissuelyser-48型樣品研磨機(jī) （上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司生產(chǎn)）；Model500高效液相色譜儀（杭州海普科技有限公司生產(chǎn)）。

試驗(yàn)藥劑：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌和四聯(lián)球菌（均由本市人民醫(yī)院藥劑實(shí)驗(yàn)室提供）；DPPH［1，1 -二苯基-2-三氨基苯肼］；超純水；乙醇 （色譜純）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 加壓提取工藝提取方法 取三七干燥并粉碎成粗粉，取40g，同400ml蒸餾水先后置入加壓提取裝置，密封加壓提取器，將其溫度設(shè)定為110℃、壓力值＜0.3MPa，加壓浸提0.5h，取出135ml濃縮液，水提醇沉濃度至60%后靜置，取上清液，揮干處理。其它三種中草藥的皂苷類成分提取方式同上述方式一致。

1.2.2 加熱回流提取工藝提取方法 取三七干燥并粉碎成粗粉，取40g，以回流法提取3次，每次加入200ml蒸餾水，首次2h，后兩次均為1h。合并濾液，水提醇沉濃度至60%后靜置，取上清液后揮干處理。其它三種中草藥的皂苷類成分提取方式同上述方式一致。

1.3 觀察指標(biāo) ①抗氧化活性：取備用提取物，加甲醇稀釋，搖勻待測(cè)。分別配制為2.5minDPPH+1.5ml甲醇溶液（測(cè)定溶液吸光度：A0）、2.5mlDPPH+1.5ml待測(cè)樣品甲醇溶液（測(cè)定溶液吸光度：A1）及2.5ml甲醇+1.5ml待測(cè)樣品甲醇溶液 （測(cè)定溶液吸光度：A2）。室溫下靜置0.5h，于517nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，取3次平均值。清除率計(jì)算公式：Y=［1-（A1-A2）/A0］×100%；②抑菌活性：制備菌懸液和培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基上等距離打孔并注入藥液，置入37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)18～24h后取出，測(cè)定抑菌圈直徑，并以此作為其抑菌效果的判定依據(jù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采取統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS22.0對(duì)上述兩種皂苷類成分提取方法的各項(xiàng)記錄數(shù)據(jù)予以分類和匯總處理，計(jì)量資料以 （±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 抗氧化活性 加壓提取工藝與加熱回流提取工藝相比，四種中草藥提取物對(duì)DPPH自由基的清除率略有提高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 四種中草藥提取物對(duì)DPPH自由基的清除率比較 ±s）

表1 四種中草藥提取物對(duì)DPPH自由基的清除率比較 ±s）

91.4±9.9 39.8±5.5 91.8±10.2 30.0±4.3加熱回流提取 91.2±10.4 42.2±5.2 91.2±9.8 36.6±5.2 t 1.54 0.55 0.07 1.69 P提取方法 三七 黃芪 柴胡 甘草加壓提取0.20 0.61 0.95 0.17

2.2 抑菌活性 加壓提取法對(duì)四種中草藥皂苷類抑菌活性的影響明顯小于加熱回流提取法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩種提取方法對(duì)四種中草藥皂苷類抑菌活性的影響 （mm，±s）

表2 兩種提取方法對(duì)四種中草藥皂苷類抑菌活性的影響 （mm，±s）

注：與加熱回流提取方式相比較，*P＜0.05，#P＜0.01。

提取方法 中草藥抑菌圈直徑大腸桿菌 金黃色葡萄球菌 枯草桿菌 四聯(lián)球菌三七 16.5±3.2* 15.1±4.2* 16.2±3.5* 15.2±3.3加壓提取*黃芪 4.9±1.2* 5.8±1.3# 4.8±0.4# 6.7±1.3*柴胡 13.8±2.2* 13.2±2.4* 12.2±2.4* 13.0±2.2*甘草 8.8±1.2* 7.1±1.8* 7.2±1.5* 8.0±1.2加熱回流提取* 12.0±2.2 10.0±2.1 9.2±2.3 9.5±2.9三七 18.1±4.1 16.0±5.1 17.2±4.3 17.1±3.5黃芪 8.8±2.3 8.9±2.2 8.7±1.3 7.6±2.5柴胡 14.3±2.3 13.2±1.5 12.0±1.8 14.1±3.1甘草

3 討論

皂苷類成分常見于中草藥，因該種成分具有較強(qiáng)的抗氧化作用和抑菌活性［1］，故而含有皂苷類成分的中草藥也秉存特殊的藥理作用，諸如桔梗中的皂苷類成分可排膿消癰，三萜皂苷類成分有抗衰老功效［2］。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展及皂苷類成分于醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用范圍的擴(kuò)大，如何確保中草藥皂苷類成分體外抗氧化及抑菌活性在不受影響的前提下得以提取則成為了當(dāng)前醫(yī)藥研究領(lǐng)域亟待解決的課題之一?；诖搜芯勘尘埃?］，本文選取了常見的四味中草藥用于實(shí)驗(yàn)，并以提取物對(duì)DPPH自由基的清除率和抑菌試驗(yàn)結(jié)果作為兩種提取方式對(duì)皂苷類成分體外抗氧化及抑菌活性的影響的判定依據(jù)。

結(jié)果顯示，采取加壓提取工藝提取的四味中草藥提取物對(duì)DPPH自由基的清除率同加熱回流提取工藝相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與一般研究結(jié)果一致。可見，加壓提取工藝與加熱回流提取工藝一樣，對(duì)四味中草藥皂苷類成分抗氧化活性［4］。分析其原理，可能在于加壓浸提溫度設(shè)置值高于溶劑沸點(diǎn)時(shí)，后者溶解能力會(huì)因此而增強(qiáng)，進(jìn)而增加中草藥中抗氧化活性成分的含量［5-6］。

比較兩種提取工藝對(duì)四味中草藥皂苷類成分抑菌活性的影響程度，其中，黃芪皂苷類成分對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草桿菌的抑制作用受提取方式影響，加壓提取法較之于加熱回流提取法抑菌活性有所下降［7］，整體而言，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明有影響。究其原因，緣于加壓提取工藝雖然是在超過(guò)溶劑沸點(diǎn)的條件下進(jìn)行，但是并沒有對(duì)中草藥中皂苷類成分中具有抑菌作用的結(jié)果造成破壞［8］。

由上可知，加壓提取工藝同加熱回流提取工藝具有同樣的應(yīng)用效果，對(duì)中草藥中皂苷類成分體外抗氧化及活性并不會(huì)造成顯著影響，說(shuō)明兩者均具有應(yīng)用價(jià)值。但是回顧性分析兩種工藝開展的各項(xiàng)因素，聯(lián)系上文可知，加壓提取工藝提取方法完成時(shí)間較短，且操作步驟簡(jiǎn)便易行，而加熱回流工藝提取方法耗費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，至少需5h，且操作步驟較之于前者更為繁瑣。綜上所述，比較兩種提取方式對(duì)皂苷類成分體外抗氧化及抑菌活性的影響程度及操作性出發(fā)，加壓提取工藝具有其獨(dú)有優(yōu)勢(shì)，是一種可推廣的提取技術(shù)。

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R284.2

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1007-8517（2015）23-0020-02

2015.08.31）

深圳市寶安區(qū)2012年科技計(jì)劃社會(huì)公益項(xiàng)目：加壓提取三七皂苷的工藝開發(fā)及其抗氧化性活性研究 （編號(hào)：2012277）。