賀寶瑩，楊紅梅，王聰穎，唐安玲，宋 英，朱 聰

1成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075；2成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院

芪術(shù)鼻噴劑提取工藝研究

賀寶瑩1，楊紅梅1，王聰穎1，唐安玲1，宋 英2△，朱 聰2

1成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075；2成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院

目的：研究芪術(shù)鼻噴霧劑的制備工藝。方法：采用薄層色譜鑒別的方法考察白術(shù)等芳香水的提取工藝，以毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量、總黃酮含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)水提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果：確定的白術(shù)等的芳香水提取工藝為：白術(shù)等加10倍水蒸餾提取5小時(shí)，收集1.4倍處方量的芳香水。優(yōu)選的水提工藝為：白術(shù)等的藥渣與其余藥味飲片加14倍劑量水，提取3次，每次提取0.5小時(shí)。結(jié)論：該制劑的提取工藝穩(wěn)定，可行，適用于工業(yè)大生產(chǎn)。

鼻噴劑；芳香水；毛蕊異黃酮葡萄糖苷；總黃酮；紫外分光光度法

近年來(lái)，鼻黏膜給藥系統(tǒng)正日益受到人們的重視，被認(rèn)為是一種藥物能被快速高效吸收的給藥方式。鼻黏膜下有豐富的血管和淋巴管，藥物通過(guò)黏膜吸收后可直接進(jìn)入體循環(huán)，藥物中有效成分可免受胃腸道中酶的破壞以及肝臟的首過(guò)效應(yīng)［1］。鼻噴劑的藥液以霧狀形式噴出，能在黏膜均勻分布，吸收快，可直達(dá)病所，且使用方便，操作簡(jiǎn)單。芪術(shù)鼻噴霧劑原處方為醫(yī)院臨床經(jīng)驗(yàn)方，具有益氣固表，通竅攝涕的功效，處方由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)、桂枝、鵝不食草等中藥組成，用于過(guò)敏性鼻炎的治療。為充分浸出處方中各藥有效成分，獲得穩(wěn)定、可控的制劑，以更好地發(fā)揮該制劑的療效，本課題對(duì)芪術(shù)鼻噴霧劑的提取工藝進(jìn)行了研究。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 HP 1100高效液相色譜儀(DAD紫外檢測(cè)器)(美國(guó)惠普公司提供)；Ag i l e n t C h em S tat i o n色譜工作站(美國(guó)安捷倫公司提供)，U V-210紫外分光光度儀(日本島津公司提供)；J A2003上海電子天平(上海精科天平提供)； B P211D分析天平(十萬(wàn)分之一型，德國(guó)賽多利斯公司提供)。

1.2 試劑 毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品(批號(hào)：111920-201203，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量為97.3%)，蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：100080-200707，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量為92.5%)，色譜甲醇(美國(guó)天地公司提供)，水為重蒸餾水(實(shí)驗(yàn)室自制)，薄層層析硅膠G為化學(xué)純(青島海洋化工有限公司分廠提供)，其他試劑均為分析純。藥材均購(gòu)自四川省新荷花中藥飲片有限公司，經(jīng)醫(yī)院質(zhì)檢部鑒定符合2010版《中國(guó)藥典》及四川省中藥飲片炮制規(guī)范的要求。

2 方法與結(jié)果

2.1 芳香水提取工藝

2.1.1 芳香水的提取 按處方比例稱(chēng)取白術(shù)、防風(fēng)、桂枝、鵝不食草共466 g，加入10倍量水，補(bǔ)加吸水量，浸泡3小時(shí)，水蒸氣蒸餾提取11小時(shí)，在0.5小時(shí)收集1次芳香水，后每隔1小時(shí)收集芳香水約100m L。

2.1.2 薄層色譜鑒別 吸取上述各時(shí)間段芳香水0.5μL，3味藥材混合揮發(fā)油0.3μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(17∶3)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，觀察揮發(fā)油的提取程度。結(jié)果見(jiàn)表1、圖1。

表1 芳香水收集量的考察

圖1 白術(shù)、桂枝等芳香水薄層鑒別

由圖可知，藥材提取5小時(shí)后，色譜斑點(diǎn)不明顯，芳香水提取量640m L，約為提取藥材量1.4倍，制劑量的50%。

結(jié)合前期預(yù)試，考慮生產(chǎn)實(shí)際，確定芳香水的提取條件為：藥材加水10倍量，蒸餾提取5小時(shí)，收集1.4倍藥材量的芳香水。

2.1.3 芳香水提取工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 按處方比例稱(chēng)取白術(shù)等4味飲片，共3份，分別加10倍量水且補(bǔ)足吸水率，浸泡3小時(shí)后，蒸餾提取5小時(shí)，分別于0.5、1、2、3、4、5小時(shí)各時(shí)段收集芳香水，并進(jìn)行薄層鑒別。薄層結(jié)果均較明顯。

2.2 黃芪等水提工藝考察

2.2.1 毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測(cè)定［2］

2.2.1.1 色譜條件 B osto n p H L e x O D S(250mm× 4.6mm，5μm)色譜柱；按表2進(jìn)行梯度洗脫，其中乙腈為流動(dòng)相A，0.2%的甲酸溶液為流動(dòng)相B；檢測(cè)波長(zhǎng)為260 n m；流速為1m L/m in；柱溫為30℃。理論板數(shù)按毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

表2 梯度洗脫

2.2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品3.26mg，置50m L量瓶中，加甲醇，定容，搖勻，即得(0.063 44mg/m L)。

2.2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取對(duì)照品溶液(0.06344mg/m L)0.5、1、3、5、7μL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，得回歸方程：

表明進(jìn)樣量在0.031 72～0.444 1mg/m L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.1.4 供試品溶液制備 精密量取“2.2.3”項(xiàng)下樣品溶液10m L，置25m L量瓶中，加甲醇，定容，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.1.5 缺黃芪陰性供試品溶液制備 按處方比例稱(chēng)取缺黃芪的其他飲片及提芳香水后藥渣，加10倍水，煎煮3次，每次煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至450m L，作為缺黃芪陰性樣品溶液。精密吸取缺黃芪陰性樣品溶液10m L，余下制備缺黃芪陰性供試品溶液。

2.2.1.6 樣品測(cè)定 取對(duì)照品溶液、供試品溶液、缺黃芪陰性供試品溶液，各精密吸取10μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量。色譜圖見(jiàn)圖2。

圖2 毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測(cè)定HPLC圖譜

2.2.2 總黃酮的含量測(cè)定［3］

2.2.2.1 對(duì)照品溶液的配制 精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品4.01mg，置10m L量瓶中，加60%甲醇，定容，搖勻，即得(0.370 9mg/m L)。

2.2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取蘆丁對(duì)照品溶液(0.3709mg/m L)，精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0m L，分別置10m L量瓶中，加60%甲醇，定容，搖勻。分別取上述溶液適量，置比色皿中，在265 n m波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A。以吸光度A為縱坐標(biāo)，總黃酮含量C為橫坐標(biāo)，得回歸方程為：A=9.0860C+0.0632，r=0.998 8，表明0.007 418～0.037 09mg/m L的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.2.3 供試品溶液的制備 取“2.2.3”項(xiàng)下樣品溶液，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液5m L，加60%的甲醇定容至20m L，再精密量取5m L，置20m L量瓶中，加60%甲醇定容值刻度。

2.2.2.4 含量測(cè)定 取供試品適量，置比色皿中，在265 n m波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光值，代入回歸方程，計(jì)算總黃酮含量。

2.2.3 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 以毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量、總黃酮含量為正交實(shí)驗(yàn)考察指標(biāo)。以影響水提主要因素加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)，選擇3個(gè)因素的水平［4-5］，按L9(34)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表3。

表3 因素水平設(shè)計(jì)

2.2.3.1 實(shí)驗(yàn)方法 按處方比例稱(chēng)取黃芪、白術(shù)、防風(fēng)、桂枝、鵝不食草，共9份，按L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)(第一次加水時(shí)補(bǔ)加飲片吸水率)，加水煎煮，濾過(guò)，合并濾液，濃縮并定容至450m L，作為樣品溶液。

2.2.3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 采用S P SS軟件進(jìn)行處理分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4，方差分析見(jiàn)表5。

表4 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表5 方差分析

結(jié)果分析：由表直觀分析可知，影響水提效果的各因素優(yōu)先順序?yàn)椋篊(提取次數(shù))＞A(加水量)＞B(提取時(shí)間)。經(jīng)方差分析，因素C(提取次數(shù))對(duì)水提效果有顯著性影響，因素A(加水量)、因素B(提取時(shí)間)無(wú)顯著性影響，考慮節(jié)約成本，優(yōu)選的水提工藝條件為：A3B1C3，即加14倍量水，煎煮3次，0.5 h/次。

2.2.4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 為了驗(yàn)證上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以保證提取工藝的合理可靠，取10倍處方量的飲片，共3份，按上述確定的實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 正交驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) mg/mL

驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：此工藝穩(wěn)定、可行，故確定優(yōu)選的工藝為A3B1C3。即加14倍量水，煎煮3次，0.5 h/次。

3 討論

根據(jù)上述藥材有效成分及該處方功能主治相關(guān)的活性成分的理化性質(zhì)，確定制劑的提取方法為白術(shù)、防風(fēng)、桂枝、鵝不食草提取芳香水，藥渣與其他藥味加水提取?？紤]到白術(shù)、鵝不食草等飲片中的揮發(fā)油對(duì)過(guò)敏性鼻炎有明顯的治療作用［6-9］，且提取芳香水的飲片量占處方比重較大，故最終確定收集芳香水的量占制劑的50%。處方為玉屏風(fēng)散加減方，具有補(bǔ)益脾肺之氣，扶正氣，固護(hù)衛(wèi)表，通竅攝涕的功效；其中黃芪為方中君藥，主要發(fā)揮益氣固表之功效，處方中含黃酮的藥味占60%，且藥理研究表明，黃芪、鵝不食草等的黃酮類(lèi)成分具有調(diào)節(jié)免疫力的作用［10-13］，故本研究采用君藥黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量以及飲片中總黃酮的含量為指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)水提工藝。此工藝經(jīng)過(guò)3次驗(yàn)證，證明其工藝合理，可行，且工藝簡(jiǎn)單，節(jié)約成本，適用于醫(yī)院制劑的生產(chǎn)。

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Study on Extraction Technology of QiZhu Nasal Spray

HE Baoying1,YANG Hongmei1,WANG Congying1,TANG Anling1,SONG Ying2△，ZHU Cong2
1 Chengdu University of TCM,Chengdu 610075,China；2 Teaching Hospital of Chengdu University of TCM

Objective:To study the preparation technology of QiZhu nasal spray.Methods:Thin-layer chromatography(TLC)was adopted to investigate the extraction technology of aromatic water of BaiZhu(Rhizoma Atractylodis Macrocephalae).Taking calycosin-7-glucoside contentand total flavonoids contentas the evaluation index,theoptimization ofwaterextraction technology wascarried outby orthogonal test.Results:Extraction technology of aromatic water of BaiZhu was determ ined as follows:distillation of BaiZhu w ith 10-fold volume of water for fivehours;aromaticwaterwhichwasasmuch as1.4 timesof prescription volume.The optim ization ofwaterextraction technology wasextracting residuesof BaiZhu and the restof decoction piecesw ith 14-fold volume ofwater for three timesw ith 0.5 hour once.Conclusion:This extraction technology which is stable and feasible can be used in industrialproductionw idely.

nasalspray;aromaticwater;calycosin-7-glucoside;total flavonoids;ultravioletspecterphotometry

R282.4

A

1004-6852(2015)04-0039-04

2014-08-24

賀寶瑩(1989—)，女，在讀碩士研究生。研究方向：中藥制劑的研發(fā)。