吳柱 魏丹丹 林海鳴

摘要：目的：考察蘿卜硫苷對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響，為蘿卜硫苷的開發(fā)應(yīng)用提供參考依據(jù)。方法：以二硝基氟苯（DNFB）誘導(dǎo)分組小鼠接觸性皮炎以及誘導(dǎo)耳腫脹，測量誘導(dǎo)相和效應(yīng)相小鼠的耳廓厚度，通過測量數(shù)據(jù)來評(píng)價(jià)蘿卜硫苷提高機(jī)體免疫效應(yīng) ；結(jié)果：隨著蘿卜硫苷劑量的增大，能明顯促進(jìn)致敏小鼠耳廓腫脹，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：蘿卜硫苷能一定程度促進(jìn)T細(xì)胞增殖，具有提高機(jī)體免疫的作用。

關(guān)鍵詞：蘿卜硫苷； 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)；影響

【中圖分類號(hào)】R954 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1672-8602（2015）06-0247-02

蘿卜硫苷（Glucoraphanin）是硫代葡萄糖苷的一種，其降解產(chǎn)物為異硫代氰酸鹽[1]，硫代葡萄糖苷及其降解產(chǎn)物具有廣泛的生物活性，可以抑制癌細(xì)胞繁殖、保護(hù)DNA免收損傷、防止抗癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[2][3]，還可以抑制細(xì)菌和微生物的生長。為了探討蘿卜硫苷對(duì)機(jī)體的細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功效，本實(shí)驗(yàn)選用不同劑量的蘿卜硫苷進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。

1材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物： KM小鼠，SPF級(jí)，雄性，小鼠體質(zhì)量18—22g，長沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（湘）2014-0011。

1.2 試劑及藥品：二硝基氟苯（DNFB） ，CMC，綠元膠囊，蘿卜硫苷（九江華漢生物科技有限公司），丙酮，水合氯醛，松香，石蠟

1.3 儀器：電子天平（AL204，梅特勒），青霉素小瓶，250微升注射器，打孔器，凈化工作臺(tái)，培養(yǎng)箱

2試驗(yàn)方法

2. 1 動(dòng)物分組

KM小鼠，常規(guī)飼養(yǎng)，自由采食和飲水，每日光照時(shí)間 1 2 h，適應(yīng)環(huán)境1周后，經(jīng)臨床觀察健康者進(jìn)行分組。隨機(jī)分為4組：模型組、陽性藥組、蘿卜硫苷高低劑量組，每組小鼠各12只 。

2.2 DNFB溶液配制

DNFB應(yīng)新鮮配制。如欲配制1% DNFB 5ml，可稱取DNFB50 mg，置清潔干燥的青霉素小瓶中，將預(yù)先配置好的5ml丙酮-生理鹽水溶液（丙酮：生理鹽水=1：1），倒入小瓶，蓋好并用膠布密封，混勻后，用250微升注射器通過瓶蓋取用。

2. 3 給藥方法[4][5]

模型組包括致敏（背部涂抹DNFB）和誘發(fā)（少量DNFB涂耳）步驟，采用灌胃方式給藥，給予藥物用CMC溶液替代；陽性藥組包括致敏（背部涂抹DNFB）和誘發(fā)（少量DNFB涂耳）步驟，采用灌胃方式給予綠元膠囊保健品800mg/kg；蘿卜硫苷高低劑量組包括致敏（背部涂抹DNFB）和誘發(fā)（少量DNFB涂耳）步驟，采用灌胃方式給予蘿卜硫苷（300、600 mg/kg），連續(xù)6天給藥。

2.4 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)

選用KM小鼠，采用5%水合氯醛（10ml/kg）進(jìn)行麻醉，采用松香和石蠟對(duì)以上各組小鼠背部進(jìn)行物理除毛，范圍約為3cm*3cm，并將1% DNFB丙酮-生理鹽水溶液50微升均勻涂抹致敏。

2.5 TH反應(yīng)的產(chǎn)生與測定

背部致敏第5天后將1%DNFB溶液10微升均勻涂抹于小鼠右耳（兩面）進(jìn)行攻擊。攻擊24 h，頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下9mm的耳片，稱重。以左右耳片重量差為腫脹度。

2.6 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用spss11.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

3.試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，蘿卜硫苷各劑量組小鼠右耳經(jīng)1%DNFB丙酮溶液攻擊后明顯腫脹，重量高于左耳，其中，高劑量組左右耳重量的差值明顯高于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 見表1，圖1 ） 。

4.結(jié)論

本研究通過用蘿卜硫苷遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)對(duì)小鼠免疫作用的影響進(jìn)行了初步探究。結(jié)果表明，蘿卜硫苷的兩個(gè)劑量組均能增加小鼠的腫脹程度，且隨著劑量的增加，其功能增強(qiáng)，表明蘿卜硫苷能在一定程度上促進(jìn)T細(xì)胞增殖，具有提高機(jī)體免疫的作用。

參考文獻(xiàn)

[1] 修麗麗，鈕昆亮.十字花科植物中的硫代葡萄糖苷及其降解產(chǎn)物[J].江科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，16（3）：118-121

[2] 李志邈，曹家樹.蔬菜的抗癌特性[J].北方園藝，2001，4：4-6.

[3] Higdon J V，Delage B，Williams D E，et al.Cruciferous vegetables and human cancerrisk：epidemiologic evidence and mechanistic basis[J].pharmacol Res，2007，55（3）：224-236.

[4] 呂方軍 ，許一平 ，葉國華 ，等.萊陽沙參莖葉提取物對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2012，23（5）：1115-1116

[5] 薛明， 胡建華.兩參芪膠囊對(duì)小鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].江蘇中醫(yī)藥，2011，43（12）：78-79