張秀麗等

摘要：目的 探討益氣化瘀方促進產(chǎn)后子宮復(fù)舊的作用機制。方法 選取50只雌性SD大鼠，采用陰道內(nèi)注射大腸桿菌制備產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全模型。按妊娠先后次序編號，隨機分為空白組、模型組、新生化組及益氣化瘀方低、高劑量組，空白組和模型組灌胃純凈水，益氣化瘀方低、高劑量組給予益氣化瘀方灌胃，新生化組給予新生化顆粒灌胃，每日1次，連續(xù)7 d。HE染色觀察子宮內(nèi)膜形態(tài)，硝酸還原酶法檢測大鼠血清中一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）的含量。結(jié)果 模型組大鼠子宮組織切片HE染色示黏膜下層充血、出血，內(nèi)膜連續(xù)性中斷，伴炎性細胞浸潤，提示造模成功。模型組NO、NOS含量均高于空白組；與模型組比較，各給藥組NO、NOS明顯降低（P<0.05，P<0.01）；與新生化組比較，益氣化瘀高劑量組NO、NOS降低（P<0.05）。結(jié)論 益氣化瘀方通過降低NO、NOS水平，抑制子宮螺旋動脈異常舒張，促進子宮內(nèi)膜的重建與修復(fù)。

關(guān)鍵詞：子宮復(fù)舊不全；益氣化瘀方；一氧化氮；一氧化氮合酶；大鼠

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2015）06-0058-03

產(chǎn)后，子宮通過肌肉收縮縮復(fù)、肌細胞自溶、內(nèi)膜增生、血管修復(fù)等過程，恢復(fù)至非孕時的狀態(tài)，稱子宮復(fù)舊。如果子宮體平滑肌纖維沒有如期收縮縮復(fù)、胎盤胎膜未能及時剝脫順利排出、子宮內(nèi)膜再生修復(fù)障礙，則發(fā)展為子宮復(fù)舊不全[1]。益氣化瘀方是湖南中醫(yī)藥大學(xué)尤昭玲教授治療人工流產(chǎn)、藥物流產(chǎn)、產(chǎn)后惡露不絕、腹痛的常用經(jīng)驗方，臨床療效好。前期我們研究了其對激素水平、炎癥因子、膠原降解、血管再生的影響[2-4]。一氧化氮（NO）是一種血管舒張因子和血小板凝集抑制劑，一氧化氮合酶（NOS）是其合成的限速酶，它們可能參與調(diào)節(jié)子宮血流和子宮內(nèi)膜的重建與修復(fù)[5]。為進一步研究益氣化瘀方對產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全的干預(yù)機制，本研究觀察益氣化瘀方對產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全大鼠血清中NO、NOS的影響，探討其促進產(chǎn)后子宮復(fù)舊的作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物

雌性SD大鼠50只，雄性大鼠20只，鼠齡<3個月，清潔級，體質(zhì)量（200.4±8.1）g，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號SCXK（湘）2011-0003，飼養(yǎng)于SPF級實驗室。

1.2 藥物

益氣化瘀方（黨參、蒲黃、黃芪、茜草等），臨床用量為52 g/d，益氣化瘀方低劑量組（4.68 g/kg）為臨床用量，益氣化瘀方高劑量組（9.36 g/kg）相當(dāng)于臨床用量2倍，湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供；新生化顆粒，云南白藥集團股份有限公司生產(chǎn)，臨床用量為24 g/d，批號ZLB1304。

1.3 主要試劑與儀器

NO、NOS測定試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號20120624）。MK3型酶標儀，熱電（上海）儀器有限公司生產(chǎn)。

1.4 菌種

臨床分離致病性大腸桿菌（X25922），湖南中醫(yī)藥大學(xué)微生物研究室提供。

1.5 分組、造模與給藥

大鼠隨機分為空白組、模型組、新生化組及益氣化瘀方低、高劑量組（益氣低、高組），每組8只。大鼠常規(guī)喂養(yǎng)1周后，晚8：00將雌鼠、雄鼠以2∶1比例合籠，第2日清晨陰道口查找陰道栓。如發(fā)現(xiàn)陰道栓確定為妊娠第1日。若未見陰道栓，則行陰道沖洗液涂片找精子，發(fā)現(xiàn)精子的當(dāng)日為妊娠第1日。妊娠大鼠分籠飼養(yǎng)至自然分娩。分娩后第1日，將過夜培養(yǎng)的大腸桿菌用生理鹽水稀釋成1.0×107個/mL，進行宮腔內(nèi)接種，每只大鼠接種量為0.2 mL[6]。造模后第1日開始，益氣低、高組分別給予益氣化瘀方4.68、9.36 g/kg灌胃，新生化組給予新生化顆粒2.16 g/kg灌胃，灌胃體積為8 mL/（kg·d），模型組和空白組灌胃等量白開水。每日1次，連續(xù)7 d。

1.6 指標檢測

1.6.1 HE染色觀察子宮內(nèi)膜形態(tài) 各組大鼠于末次灌胃后2 h，腹腔注射20%烏拉坦麻醉，腹主動脈采血后，脫頸處死。取出單側(cè)子宮長約2 cm，4%福爾馬林固定24 h，不同濃度乙醇依次脫水，二甲苯透明40 min，軟蠟中浸1 h，石蠟包埋，冷凍12 h后，連續(xù)冠狀切片（4 mm），常規(guī)HE染色，封片，鏡下觀察子宮內(nèi)膜變化。

1.6.2 血清一氧化氮、一氧化氮合酶含量測定 腹主動脈采血，室溫下靜置60 min，離心10 min，留取上層血清，按照試劑盒說明書操作，應(yīng)用硝酸還原酶法，測定大鼠血清中NO、NOS含量。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS18.0 統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料以—x±s表示，符合正態(tài)性和方差齊性的數(shù)據(jù)行方差分析，樣本間兩兩比較采用q檢驗，不符合上述條件用秩和檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 益氣化瘀方對大鼠子宮內(nèi)膜形態(tài)學(xué)的影響

空白組大鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞輕度脫落，偶見內(nèi)膜連續(xù)性部分中斷，腺體數(shù)目少；模型組有炎細胞浸潤，間質(zhì)疏松水腫，部分上皮細胞壞死脫落，內(nèi)膜連續(xù)性部分中斷，內(nèi)膜下小血管擴張、充血、出血；新生化組及益氣高組內(nèi)膜上皮損傷較輕，炎細胞少見，內(nèi)膜連續(xù)性好，腺體數(shù)目多，血管未見明顯擴張，間質(zhì)較致密，宮腔中滲液不明顯；益氣低組上皮損傷介于模型組與益氣高組之間。見圖1。

2.2 益氣化瘀方對大鼠血清中一氧化氮、一氧化氮合酶的影響

與空白組比較，模型大鼠血清中NO、NOS含量升高；與模型組比較，各給藥組均能明顯降低模型大鼠血清中NO、NOS水平，且益氣高組效果優(yōu)于新生化組。見表1。

3 討論

產(chǎn)后子宮復(fù)舊是一個復(fù)雜的過程，子宮收縮、胎盤或胎膜排出、膠原降解、細胞凋亡、內(nèi)膜增生，血管修復(fù)貫穿始終，甾體激素及其受體、血管活性物質(zhì)、炎癥因子等共同調(diào)控這一過程。分娩后，子宮內(nèi)膜損傷主要通過內(nèi)膜增生和血管再生來修復(fù)。

NO是一種血管舒張因子，具有廣泛生物學(xué)效應(yīng)，適量NO參與人體正常生理功能，過多NO可引起細胞毒性作用，導(dǎo)致組織損傷。NO還能強烈抑制血小板聚集，從而防止血栓形成。強縮血管物質(zhì)與舒血管物質(zhì)NO共同作用于子宮螺旋動脈，導(dǎo)致其節(jié)律性收縮與舒張。NO還能直接擴張子宮內(nèi)膜血管平滑肌、抑制子宮肌層收縮，調(diào)節(jié)子宮血流、重建并修復(fù)內(nèi)膜。因而，同時兼具血管舒張因子和血小板凝集抑制劑雙重作用的NO，參與調(diào)節(jié)子宮出血及止血。

NOS是NO合成的限速酶，主要存在于人體正常子宮內(nèi)膜的表面上皮、腺上皮及血管內(nèi)皮，是女性生殖過程中主要的旁分泌介質(zhì)和重要的生物調(diào)節(jié)劑，還參與了子宮出血的調(diào)控。NOS有3種亞型，即神經(jīng)元型NOS（nNOS）、內(nèi)皮型NOS（eNOS）和誘導(dǎo)型NOS（iNOS）。eNOS與nNOS在生理狀態(tài)下持續(xù)表達，iNOS是病理狀態(tài)的酶，生理狀態(tài)下不表達，當(dāng)機體出現(xiàn)炎癥、免疫反應(yīng)時，催化產(chǎn)生大量的NO，而過量的NO使子宮螺旋動脈異常舒張，血管修復(fù)障礙。

NO-iNOS系統(tǒng)參與女性生殖生理活動，如子宮內(nèi)膜周期性變化的調(diào)節(jié)、細胞凋亡、卵泡發(fā)育、卵巢性激素的分泌、胚胎著床、妊娠與分娩及平滑肌的增殖分化等。月經(jīng)來潮過程中，它參與了子宮內(nèi)膜的增殖、剝脫。分娩后，它還可以穩(wěn)定溶酶體膜、對抗氧自由基對血管內(nèi)皮的損傷。

產(chǎn)后宮腔注入大腸桿菌可導(dǎo)致產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎影響子宮復(fù)舊，我們的前期研究表明，模型大鼠產(chǎn)后白細胞介素-1、腫瘤壞死因子-α異常高表達[3]。異常升高的炎癥因子如白細胞介素-1、腫瘤壞死因子-α等刺激iNOS，導(dǎo)致其含量異常增高。高含量的iNOS導(dǎo)致大量NO產(chǎn)生，誘發(fā)子宮螺旋動脈過度舒張，局部血流增快，血漿滲出增多，組織水腫，內(nèi)膜修復(fù)障礙，導(dǎo)致子宮出血淋漓不凈。產(chǎn)褥期女性處于特殊的生理時期，產(chǎn)時亡血傷津，元氣受損，產(chǎn)后多虛易瘀，其中以氣虛為本，以血瘀為標，以標實為急，治宜益氣化瘀為主。本實驗結(jié)果表明，模型大鼠血清NO、NOS含量升高。益氣化瘀方和新生化顆粒均能明顯降低模型大鼠血清中NO、NOS水平，且高劑量益氣化瘀方優(yōu)于新生化顆粒。我們推測益氣化瘀方的作用機制可能有以下幾點：①抑制子宮內(nèi)膜細胞中NOS的表達，減少NO合成，抑制子宮螺旋動脈過度舒張，減少炎癥滲出；②降低NO含量，間接降低前列腺素的合成和含量，抑制血小板聚集、抑制血栓形成；③提高溶酶體膜的穩(wěn)定性，對抗血管內(nèi)皮的損傷，重塑子宮螺旋動脈，促進內(nèi)膜血管平滑肌及血管收縮，調(diào)節(jié)子宮血流，參與內(nèi)膜重建修復(fù)。

參考文獻：

[1] 杜惠蘭.中西醫(yī)結(jié)合婦產(chǎn)科學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2012：87- 89.

[2] 尤昭玲，曾晶，游卉，等.婦科止血消痛顆粒對藥物流產(chǎn)大鼠模型雌孕激素及其受體的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2010，17（8）：19-21.

[3] 鄧海燕，曾晶，查亞萍，等.益氣化瘀方對產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全模型大鼠TNF-α，IL-1，6-K-PGF1α，TXB2的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2011， 17（10）：196-198.

[4] 曾晶，尤昭玲，查亞萍，等.婦科止血消痛顆粒對產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全大鼠模型子宮MMP-9、TIMP-1 mRNA表達的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志， 2011，17（6）：31-33.

[5] 尤昭玲，丁青.三七復(fù)合有效成分對子宮內(nèi)膜炎癥細胞一氧化氮及一氧化氮合酶的影響[J]，中國中醫(yī)藥科技，2007，14（2）：115-117.

[6] 趙紅瓊，簡子健，姚剛，等.建立大鼠實驗性子宮內(nèi)膜炎模型的探討[J].新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2008，31（3）：5-8.

（收稿日期：2014-10-18；編輯：華強）