賀華 王義杰 呂劍平 鄭美蓉

胃癌是威脅人類健康最常見的惡性瘤之一，其發(fā)病率和病死率均居各種惡性腫瘤前列[1-2]。胃癌的發(fā)生是一個(gè)集遺傳、環(huán)境及生活習(xí)慣等多因素于一體的復(fù)雜過(guò)程，但其確切機(jī)制仍不清楚[3-4]。微小核糖核酸（miRNA）是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一類非編碼單鏈小分子RNA[5]，它代表了一個(gè)新層次上的基因表達(dá)調(diào)控方式，其為腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究開辟了新的領(lǐng)域和思路[6-7]。熒光原位雜交技術(shù)（FISH）有敏感度高、信號(hào)強(qiáng)、背景低、快速等優(yōu)點(diǎn)，因此特別適合于病理學(xué)研究[7]。本研究分析miRNA在胃癌組織中的表達(dá)及意義，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收取2013年6月-2014年12月本院手術(shù)切除的50例胃癌標(biāo)本。男38例，女12例；年齡43~81歲，平均（63.4±10.2）歲。患者入院時(shí)均無(wú)其他腫瘤或惡性合并癥，且未接受放射、化學(xué)、免疫治療。腫瘤<5 cm 7例，≥5 cm 43例；高中分化14例，低分化36例；臨床病理分期Ⅰ~Ⅱ期23例，Ⅲ~Ⅳ期27例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例。取材時(shí)盡量切取腫塊中心的組織作為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)留取距腫瘤邊緣5 cm以上的癌旁正常組織作為對(duì)照組。

1.2 方法 主要儀器與試劑：原位雜交儀（S2451 S500-24）和熒光顯微鏡（BX-51）分別為德國(guó)萊卡儀器有限公司和日本OLYM PUS公司產(chǎn)品；miR-100 FISH probe（DIGOXIN Labeld）、U6陽(yáng)性對(duì)照探針、IR型原位雜交檢測(cè)試劑盒（紅色熒光）和4%多聚甲醛均購(gòu)自廣州外顯子生物技術(shù)有限公司。

按說(shuō)明書方法進(jìn)行原位雜交檢測(cè)，基本過(guò)程如下：二甲苯脫蠟，無(wú)水乙醇梯度脫水，4%多聚甲醛PBS液孵育，55 ℃預(yù)雜交后，加DAPI-抗熒光淬滅劑復(fù)染，置于暗處顯微鏡觀察結(jié)果，DAPI呈藍(lán)色熒光，探針呈紅色熒光。結(jié)果判定：miR-100陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)顯示紅色顆粒。

1.3 觀察指標(biāo) 胃癌的陽(yáng)性信號(hào)表達(dá)部位主要見于癌組織的細(xì)胞漿中，miR-100陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)顯示呈紅色顆粒。觀察兩組miR-100的陽(yáng)性表達(dá)率，分析miR-100在性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、臨床病理分期、淋巴轉(zhuǎn)移中的表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 18.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理及分析，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)和Fishers精確概率法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-100表達(dá)檢測(cè)的情況 運(yùn)用FISH技術(shù)檢測(cè)胃癌組織（實(shí)驗(yàn)組）和配對(duì)癌旁組織（對(duì)照組）中miR-100的表達(dá)情況，結(jié)果顯示：50例標(biāo)本中實(shí)驗(yàn)組miR-100的陽(yáng)性表達(dá)32例，陰性18例，陽(yáng)性表達(dá)率64%；對(duì)照組miR-100的陽(yáng)性表達(dá)10例，陰性40例，陽(yáng)性表達(dá)率20%，實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 miR-100表達(dá)與胃癌病理特征的關(guān)系 按照不同的臨床病理特征（性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、臨床病理分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）對(duì)50例胃癌患者進(jìn)行分組，通過(guò)組間對(duì)比分析，結(jié)果表明胃癌組織中miR-100陽(yáng)性表達(dá)率與患者的性別、年齡、腫瘤大小均無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05），而與胃癌患者的腫瘤分化程度、臨床病理分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 miR-100表達(dá)與胃癌病理特征的關(guān)系

3 討論

miRNA廣泛存在于真核生物中，并且具有物種進(jìn)化上的高度保守性，他們參與動(dòng)植物組織器官的發(fā)育和形成，影響細(xì)胞增殖、分化和凋亡，與脂肪代謝和激素分泌等過(guò)程有關(guān)，并與包括腫瘤在內(nèi)的多種疾病有著密切的關(guān)系[8-9]。

大量的研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞與正常組織來(lái)源細(xì)胞間的miRNA表達(dá)譜具有明顯的差異，多種腫瘤存在miRNA的異常表達(dá)或缺失，表明miRNA與多種人類腫瘤的關(guān)系密切，且miRNA在腫瘤組織和細(xì)胞中表達(dá)水平的異常與腫瘤的發(fā)生進(jìn)展、分化分期及轉(zhuǎn)移、預(yù)后等特征有著密切的聯(lián)系[10-11]。近年來(lái)的研究表明miRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起類似于促癌基因或抑癌基因的作用[12]。利用miRNA的表達(dá)特征，有助于鑒別良惡性病變和腫瘤預(yù)后的判斷。

許多不同的癌癥疾病都發(fā)現(xiàn)與miRNA存在密切的關(guān)系，胃癌同樣被發(fā)現(xiàn)與許多的miRNA有一定程度的相關(guān)性。miRNA主要位于染色體的脆性位點(diǎn)上，正常的上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）時(shí)，常導(dǎo)致染色體出現(xiàn)增加、缺失、重排等現(xiàn)象，致使miRNA在胃癌的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用[13]。miR-100位于染色體11q24.1。miR-100是人類發(fā)現(xiàn)較早miRNA中的一員，在多種腫瘤組織和細(xì)胞中表達(dá)異常。Volinia等[14]在對(duì)胃癌等6種人類腫瘤的540例組織標(biāo)本的研究發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于正常胃黏膜組織，miR-100在胃癌組織中表達(dá)上調(diào)。Ueda等[15]也發(fā)現(xiàn)miR-100在胃癌中明顯升高，起到促癌基因的作用。但利用FISH技術(shù)對(duì)其結(jié)果的驗(yàn)證少有報(bào)道，miR-100表達(dá)與胃癌的臨床病理特征的關(guān)系也不十分清楚。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)FISH技術(shù)檢測(cè)miR-100在胃癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與配對(duì)癌旁正常組織相比，miR-100在胃癌組織中的表達(dá)顯著升高。miR-100陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)顯示呈紅色顆粒，陽(yáng)性信號(hào)表達(dá)部位主要見于癌組織的細(xì)胞漿中，提示miR-100可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展等生物學(xué)行為，發(fā)揮著促癌基因的作用。筆者進(jìn)一步對(duì)50例胃癌患者的臨床病理特征與miR-100陽(yáng)性患者進(jìn)行卡方檢驗(yàn)分析，結(jié)果顯示與主要判斷預(yù)后的指標(biāo)明顯相關(guān)，這說(shuō)明miR-100作為判斷胃癌惡性程度的指標(biāo)具有一定的臨床價(jià)值。

綜上所述，miR-100在胃癌組織中表達(dá)上調(diào)，其在胃癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著促癌基因的作用，miR-100陽(yáng)性表達(dá)有望成為胃癌診斷和預(yù)后判斷的客觀指標(biāo)之一。

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