袁羽昀，沈 健，趙 鋆

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院兒科，上海 201203）

肥胖與雌性幼齡SD大鼠青春發(fā)育提前的相關(guān)性

袁羽昀，沈 健，趙 鋆

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院兒科，上海 201203）

目的探討肥胖與雌性幼齡SD大鼠與青春發(fā)育提前之間的相關(guān)性。方法 將10只雌性SD大鼠與6只雄性SD大鼠隨機(jī)分為兩組，分別為親代模型組(雌鼠n=5，雄鼠n=3）、親代對(duì)照組(雌鼠n=5，雄鼠n= 3）。模型組以高脂飼料飼喂8周造模，對(duì)照組用普通大鼠飼料飼喂，8周后篩選體質(zhì)量大于對(duì)照組20％的模型組親代大鼠體進(jìn)行交配，繁殖的雌性仔鼠設(shè)定為模型組仔鼠，親代對(duì)照組大鼠繁殖的雌性仔鼠作為對(duì)照組仔鼠。模型組仔鼠造模方法與模型組親代大鼠相同，均為同配方高脂飼料飼喂，21日齡斷乳后飼喂5周，對(duì)照組仔鼠則用普通飼料飼喂5周。自21日齡起每日觀察仔鼠陰門開(kāi)啟情況，陰門開(kāi)啟后每日均進(jìn)行陰道涂片檢查，觀察動(dòng)情周期，并稱量體重；體長(zhǎng)及腹圍的測(cè)量每?jī)芍苓M(jìn)行1次；兩組實(shí)驗(yàn)仔鼠均在56日齡時(shí)結(jié)束實(shí)驗(yàn)，腹主動(dòng)脈取血，檢測(cè)兩組幼鼠56日齡血清膽固醇(CH）、甘油三酯(TG）、血清卵泡刺激素(FSH）、促黃體生成素(LH）、雌二醇(E2）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后解剖56日齡仔鼠，取材子宮、卵巢，計(jì)算卵巢指數(shù)、子宮指數(shù)，子宮、卵巢做病理切片HE染色，計(jì)數(shù)卵巢最大橫截面黃體個(gè)數(shù)和成熟卵個(gè)泡數(shù)。結(jié)果 ①56日齡造模結(jié)束，模型組幼鼠體重、腹圍均高于對(duì)照組幼鼠，P＜0.001；②模型組幼鼠血清TG、CH均高于對(duì)照組，P＜0.001；③模型組幼鼠血清LH、E2濃度高于對(duì)照組幼鼠，P＜0.001，血清FSH濃度低于對(duì)照組，P＜0.001；④模型組幼鼠卵巢病理切片中最大橫截面黃體計(jì)數(shù)較對(duì)照組多，P＜0.001；成熟卵泡計(jì)數(shù)少于對(duì)照組，P＜0.001；⑤Pearson相關(guān)性分析結(jié)果為：幼齡SD大鼠體質(zhì)量與第一次動(dòng)情間期、陰門開(kāi)啟時(shí)間兩項(xiàng)指標(biāo)呈成負(fù)相關(guān)，與血清LH、卵巢最大橫截面切片黃體計(jì)數(shù)兩項(xiàng)指標(biāo)成正相關(guān)；幼齡SD大鼠腹圍與第一次動(dòng)情間期出現(xiàn)時(shí)間、陰門開(kāi)啟時(shí)間兩項(xiàng)指標(biāo)成負(fù)相關(guān)，與血清LH、卵巢最大橫截面切片黃體計(jì)數(shù)兩項(xiàng)指標(biāo)成正相關(guān)。結(jié)論 幼齡SD大鼠青春發(fā)育評(píng)判指標(biāo)與肥胖指標(biāo)具有相關(guān)性，呈正相關(guān)。即具有肥胖特征的幼齡SD大鼠青春發(fā)育較之正常對(duì)照組幼鼠提前。

青春發(fā)育提前；肥胖；SD大鼠

近幾十年來(lái)，兒童青春發(fā)育提前啟動(dòng)，第二性征提前出現(xiàn)屢見(jiàn)不鮮，當(dāng)青春發(fā)育提前到一定年齡界點(diǎn)之前即為性早熟。性早熟是指女童在8歲前，男童在9歲前呈現(xiàn)第二性征的發(fā)育異常性疾?。?］。發(fā)病率女童高于男童［2］。有研究發(fā)現(xiàn)肥胖女童普遍存在第二性征發(fā)育提前的臨床報(bào)道［3］。肥胖，是指一定程度的明顯超重與脂肪層過(guò)厚，是體內(nèi)脂肪，尤其是甘油三酯積聚過(guò)多而導(dǎo)致的一種狀態(tài)［4］。肥胖已成為世界范圍內(nèi)的公共衛(wèi)生問(wèn)題，被列為現(xiàn)代世界四大醫(yī)學(xué)社會(huì)問(wèn)題之一。近年來(lái)，中國(guó)的肥胖人數(shù)也在增加，在兒科領(lǐng)域我們注意到，1993至2009年的17年中，中國(guó)學(xué)齡兒童BMI、腰圍數(shù)值以及超重、肥胖及腹型肥胖人數(shù)呈現(xiàn)逐年增長(zhǎng)狀態(tài)，且增速顯著［5］。兒童時(shí)期肥胖不但會(huì)過(guò)早地導(dǎo)致低齡人群血壓、血糖、血脂的升高，而且會(huì)促使青春發(fā)育提前，從而增加兒童性早熟的風(fēng)險(xiǎn)。肥胖的早發(fā)育兒童面臨著發(fā)生內(nèi)分泌代謝性疾病與成年后罹患生殖系統(tǒng)腫瘤的雙重風(fēng)險(xiǎn)，全球醫(yī)學(xué)界日益重視兒童肥胖和青春發(fā)育提前的相關(guān)研究，美國(guó)此前的肥胖兒童跟蹤調(diào)查指出，全美兒童肥胖的狀況導(dǎo)致兒童青春期提前的趨勢(shì)日益明顯［6］。由上述流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果可以推測(cè)兒童期肥胖與青春發(fā)育啟動(dòng)有某種內(nèi)在關(guān)聯(lián)性，故有必要對(duì)此進(jìn)行深入研究和探討。

國(guó)內(nèi)有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道，哺乳期營(yíng)養(yǎng)過(guò)甚的雌性幼鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間早于營(yíng)養(yǎng)適中組，飼喂?fàn)I養(yǎng)越好的幼鼠卵巢發(fā)育越早、越趨于成熟［7］。另有報(bào)道，通過(guò)高脂飲食飼喂的方法建立大鼠營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型，可使模型大鼠體重明顯增加，表現(xiàn)出運(yùn)動(dòng)遲緩、高脂血癥等肥胖特點(diǎn)［8］。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用上述較為成熟的大鼠肥胖模型建立方法，進(jìn)一步建立雌性肥胖幼齡SD大鼠模型，將其肥胖、青春發(fā)育的相關(guān)指標(biāo)與正常對(duì)照組雌性幼鼠相比較，觀察肥胖與雌性動(dòng)物青春期發(fā)育提前之間的關(guān)聯(lián)性，為深入認(rèn)識(shí)和有效干預(yù)肥胖導(dǎo)致的青春發(fā)育提前奠定研究基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)環(huán)境：SPF級(jí)成年雌性與雄性SD大鼠，重量(100～150）g，由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)【SCXK (滬）】2012-0016，使用合格證號(hào)【SYXK(滬）】2013-0069。實(shí)驗(yàn)環(huán)境：上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心3樓SPF級(jí)動(dòng)物房。

1.1.2 儀器與試劑：大鼠甘油三酯(TG）酶聯(lián)免疫分析試劑盒，大鼠膽固醇(CH）酶聯(lián)免疫分析試劑盒，大鼠卵泡刺激素(FSH）酶聯(lián)免疫分析試劑盒，大鼠促黃體生成素(LH）酶聯(lián)免疫分析試劑盒，大鼠雌二醇(E2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒(羅氏公司）；Model 680酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Rad公司），F(xiàn)riocell生化培養(yǎng)箱(德國(guó)MMM公司），電子精密天平［奧豪斯(上海）公司］，正置光學(xué)顯微鏡(德國(guó)Leica公司），石蠟切片機(jī)(德國(guó)Leica公司）。

1.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

1.2.1 動(dòng)物分組：本實(shí)驗(yàn)采用隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，運(yùn)用Excel生成隨機(jī)數(shù)字，完全隨機(jī)地將10只健康未孕雌性SD大鼠分為2組，組別名稱：雌性模型組(n=5）、雌性對(duì)照組(n=5）；同上述方法將6只雄性SD大鼠分為兩組，組別名稱：雄性模型組(n= 3）、雄性對(duì)照組(n=3）。模型組大鼠所繁殖仔鼠設(shè)定為：幼鼠模型組(依據(jù)繁殖批次標(biāo)記組號(hào)）；對(duì)照組大鼠所繁殖仔鼠設(shè)定為：幼鼠對(duì)照組(依據(jù)繁殖批次標(biāo)記組號(hào)）。

1.2.2 親代大鼠營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型的建立［9］：雌雄鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開(kāi)始造模。模型組采用30％總脂肪含量(動(dòng)物脂肪≥23％）的高脂飼料飼喂8周，高脂飼料中蛋白質(zhì)含量20％，碳水化合物及礦物質(zhì)、維生素總含量50％。造模期間大鼠自由進(jìn)水進(jìn)食。8周造模結(jié)束后篩選體質(zhì)量超過(guò)對(duì)照組體質(zhì)量均數(shù)20％的個(gè)體，未達(dá)標(biāo)大鼠剔除。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M親代雌鼠造模后剔除1只，成模4只，剔除率20％；模型組親代雄鼠造模后剔除1只，成模2只，剔除率33％。

1.2.3 幼齡SD大鼠營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型的建立：模型組雌性及雄性大鼠造模成功后，采用循環(huán)交配法，雌雄比例2：1合籠交配，確認(rèn)雌鼠懷孕后分籠，孕鼠單獨(dú)一籠飼養(yǎng)進(jìn)行產(chǎn)仔哺乳，仔鼠離乳后將雌鼠放回原籠交配。模型組雌鼠所繁殖子代即為模型組仔鼠，14日齡去除雄性仔鼠，剩余雌性仔鼠每窩哺乳密度不超過(guò)6只，仔鼠21日齡斷乳分籠，飼喂與親代模型組大鼠相同的高脂飼料，至56日齡結(jié)束造模，并按照體質(zhì)量大于同日齡對(duì)照組幼鼠平均體質(zhì)量20％的標(biāo)準(zhǔn)篩選出模型組仔鼠。

1.2.4 幼鼠一般情況的觀察測(cè)量：于幼鼠21日齡起每日測(cè)量記錄幼鼠體質(zhì)量(g）、攝食量(g）、排泄物性狀、活動(dòng)度，每2周測(cè)量體長(zhǎng)(cm）、腹圍(cm）。

1.2.5 幼鼠青春發(fā)育期的觀察測(cè)量：模型組與對(duì)照組幼鼠均于22日齡起觀察陰門開(kāi)啟情況，記錄陰門開(kāi)啟時(shí)間，此后每日行陰道涂片檢查，鏡下觀察性周期(動(dòng)情前期、動(dòng)情期、動(dòng)情后期、動(dòng)情間期），捕捉完整性周期，顯微拍照留取信息。

1.2.6 幼鼠組織形態(tài)學(xué)觀察：于幼鼠56日齡結(jié)束造模，戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后剖開(kāi)腹部，觀察腹腔脂肪，取子宮、卵巢，隔濾紙稱量濕重后迅速用10％甲醛固定液固定標(biāo)本。經(jīng)組織塊脫水透明，浸醋包埋，切片與貼片，脫蠟染色，脫水透明，封固等步驟完成卵巢、子宮病理切片HE染色。計(jì)數(shù)卵巢最大橫切面黃體數(shù)及成熟卵泡數(shù)。

1.2.7 酶聯(lián)免疫分析法測(cè)定幼鼠血清TG、CH、LH、FSH、E2：仔鼠56日齡，戊巴比妥鈉麻醉仔鼠，腹主動(dòng)脈取血，3 000轉(zhuǎn)離心5 min分離血清，-80℃保存；運(yùn)用酶聯(lián)免疫分析法測(cè)定大鼠血清FSH、LH、E2、TG、CH。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s）表示，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采用兩組間t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采用兩組間秩和檢驗(yàn)，組內(nèi)及組間的重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析，同一時(shí)間點(diǎn)測(cè)量數(shù)據(jù)的組間比較采用單因素方差分析(LSD、S-NK），肥胖測(cè)量指標(biāo)與青春發(fā)育測(cè)量指標(biāo)的相關(guān)性檢驗(yàn)采用Pearson相關(guān)性分析，均設(shè)定 P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 幼鼠一般指標(biāo)的觀察

模型組幼鼠均顯現(xiàn)出體型肥胖，活動(dòng)度下降，排泄物量多黏膩臭穢的特點(diǎn)。模型組幼鼠42日齡前覓食量與對(duì)照組基本持平，42日齡后覓食量減少，低于對(duì)照組，且行動(dòng)較遲緩，喜抱團(tuán)停留于鼠盒一角或鉆入墊料下層的特點(diǎn)突出。

2.2 幼齡雌性SD大鼠營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型的相關(guān)判定指標(biāo)

模型組幼鼠21日齡體質(zhì)量、56日齡體質(zhì)量，21日齡腹圍、56日齡腹圍，56日齡血清TG、56日齡血清CH均高于對(duì)照組幼鼠(表1，P＜0.05）。

2.3 幼齡雌性SD大鼠青春發(fā)育的相關(guān)判定指標(biāo)

2.3.1 幼鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間，第一個(gè)動(dòng)情間期出現(xiàn)時(shí)間比較：幼鼠模型組的陰門開(kāi)啟時(shí)間較對(duì)照組提前；幼鼠模型組第一個(gè)動(dòng)情間期出現(xiàn)時(shí)間亦較對(duì)照組提前(表2，P＜0.001）。

表1 兩組幼鼠體質(zhì)量、腹圍、TG、CH的比較(n=41）Tab.1 ComParison of the body weight，abdominal circumference，serum TG and CH between the two grouPs of immature rats(CH），(TG）

表2 兩組幼鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間、第一個(gè)動(dòng)情間期出現(xiàn)時(shí)間的比較Tab.2 ComParison of the vaginal oPening time and the first diestrus time between the two grouPs of immature rats

表3 兩組幼鼠血清促黃體生成素、卵泡刺激素、雌二醇的比較Tab.3 ComParison of the serum LH，F(xiàn)SH and E2between the two grouPs of immature rats

2.3.2 幼鼠血清促黃體生成素、卵泡刺激素、雌二醇、黃體數(shù)、成熟卵泡數(shù)的比較：56日齡時(shí)，幼鼠模型組血清LH濃度、E2濃度高于對(duì)照組，幼鼠模型組血清FSH濃度低于對(duì)照組；模型組幼鼠卵巢切片中以黃體為主，黃體較多，成熟卵泡數(shù)相對(duì)較少；對(duì)照組幼鼠卵巢切片中以各級(jí)卵泡為主，成熟卵泡數(shù)較多，黃體較少(表3，P＜0.001）。石蠟切片圖像見(jiàn)圖1，(圖1見(jiàn)文后彩插2）。

2.4 幼鼠肥胖指標(biāo)與青春發(fā)育指標(biāo)相關(guān)性分析

2.4.1 體重與四項(xiàng)青春發(fā)育指標(biāo)的相關(guān)性：幼鼠56日齡體質(zhì)量與陰門開(kāi)啟時(shí)間、第一個(gè)動(dòng)情間期成負(fù)相關(guān)，與黃體數(shù)、血清 LH成正相關(guān)(表4，P＜ 0.001）。

2.4.2 腹圍與四項(xiàng)青春發(fā)育指標(biāo)的相關(guān)性：幼鼠56日齡腹圍高于對(duì)照組幼鼠，P＜0.001(表5）。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象為雌性幼齡肥胖SD大鼠，故建立符合實(shí)驗(yàn)要求的動(dòng)物模型是實(shí)驗(yàn)的第一步驟和后續(xù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)。課題采用成年大鼠建立營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型后組內(nèi)繁殖仔鼠的方法建立幼齡SD大鼠營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型，旨在通過(guò)肥胖親代雌鼠提供幼鼠胎兒期和哺乳期的高脂營(yíng)養(yǎng)攝入、親本肥胖的遺傳因素，縮短幼鼠肥胖成模時(shí)間，以達(dá)成幼鼠性

表4 體重與四項(xiàng)青春發(fā)育指標(biāo)的相關(guān)性Tab.4 Correlation between the body weight and four indicators of Puberty in the immature rats

表5 腹圍與四項(xiàng)青春發(fā)育指標(biāo)的相關(guān)性Tab.5 Correlation between abdominal Perimeter of immature rats and four indicators of Puberty

注：Pearson相關(guān)性分析，差異顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

Note.The Pearson correlation analysis showed statistically significant difference.成熟前肥胖的造模目的。以親代大鼠的肥胖和高脂飲食狀態(tài)直接影響子代，形成肥胖模型體質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的連續(xù)性。造模思路的理論支持來(lái)源于臨床研究報(bào)道的兒童肥胖具有明顯的遺傳傾向［10］，相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道，母鼠孕期高脂飲食攝入造成仔鼠脂肪組織發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)改變，使體重增加［11］。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M幼鼠體質(zhì)量均數(shù)在21日齡已高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，56日齡造模結(jié)束時(shí)，模型組體質(zhì)量達(dá)到肥胖模型要求(體重大于對(duì)照組體重均數(shù)20％）的個(gè)體數(shù)已達(dá)到總數(shù)的69.5％ (共繁殖雌性模型組幼鼠59只，按照以上篩選標(biāo)準(zhǔn)，成模41只）。模型組幼鼠高脂飼喂造模5周，雖未達(dá)到親代模型組的8周造模時(shí)間，但肥胖成模率已較高，分析這一結(jié)果可能與模型組幼鼠21日齡已出現(xiàn)的體重升高有關(guān)，由此得出幼齡SD大鼠肥胖模型的建立周期為5周的高脂飼料飼喂加3周的高脂母乳飼喂，兩個(gè)階段連續(xù)8周的高脂攝入保證了幼鼠肥胖模型的快速建立。

陰門開(kāi)啟和第一次排卵的發(fā)生是兩項(xiàng)判斷雌性大鼠青春期啟動(dòng)的決定性標(biāo)準(zhǔn)，而第一個(gè)動(dòng)情間期的出現(xiàn)是第一次排卵發(fā)生的間接指征［12］。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M幼鼠平均陰門開(kāi)啟時(shí)間約為38日齡，對(duì)照組幼鼠約為42日齡，模型組較對(duì)照組提前4 d。模型組幼鼠第一個(gè)動(dòng)情間期的發(fā)生時(shí)間約為42日齡，對(duì)照組約為46日齡，兩者前后相差4 d。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明肥胖幼齡SD大鼠青春期啟動(dòng)較普通體重的幼齡SD大鼠提前。本實(shí)驗(yàn)在嚴(yán)格控制各種影響因素的情況下，最大程度避免了系統(tǒng)誤差，只存在肥胖與非肥胖的差異，而模型組親代大鼠的肥胖和高脂飲食狀態(tài)對(duì)子代幼鼠造成的直接影響，屬仔鼠肥胖的同一范疇。因此可以得出結(jié)論：肥胖幼齡SD大鼠的陰門開(kāi)啟時(shí)間和性周期建立時(shí)間均較正常體質(zhì)量SD幼鼠提前。

血清性激素作為一項(xiàng)判斷性發(fā)育的客觀檢測(cè)指標(biāo)，具有可定量、較精確的特點(diǎn)。雌性動(dòng)物體內(nèi)FSH與排卵關(guān)系密切，F(xiàn)SH可刺激卵泡生成，促進(jìn)卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)成熟，血清FSH濃度的高低可直接反應(yīng)卵巢的功能狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M幼鼠血清LH、E2平均濃度均高于對(duì)照組幼鼠，而血清FSH則低于對(duì)照組。兩組幼鼠LH/FSH均大于1，說(shuō)明性腺功能已經(jīng)啟動(dòng)，且已度過(guò)性發(fā)育早期［13］。相關(guān)研究證實(shí)，雌性大鼠青春發(fā)育期前FSH升高明顯，青春發(fā)育啟動(dòng)后以LH升高為主［14］，有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)指出SD大鼠血清FSH在青春發(fā)育早期即出現(xiàn)分泌高峰，此后隨著青春發(fā)育的進(jìn)程而緩慢下降，反之LH在FSH下降后的青春發(fā)育期內(nèi)顯著升高則提示性腺軸功能的啟動(dòng)［15］。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)兩項(xiàng)主要觀測(cè)指標(biāo)，即兩組幼鼠的血清性激素濃度測(cè)定與陰門開(kāi)啟時(shí)間、第一個(gè)動(dòng)情間期時(shí)間的觀察結(jié)果，得出的肥胖幼齡SD大鼠較之普通體重幼齡SD大鼠青春發(fā)育期提前的結(jié)論具有客觀可驗(yàn)證性。由此可推論模型組幼鼠性腺軸的發(fā)育較之對(duì)照組也更加成熟。

卵巢發(fā)育情況是判斷大鼠性發(fā)育的最直接最重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)觀察到模型組56日齡幼鼠卵巢最大橫截面均出現(xiàn)黃體，計(jì)數(shù)多于對(duì)照組(P＜0.001）。卵巢最大橫截面成熟卵泡數(shù)計(jì)數(shù)則為對(duì)照組多于模型組(P＜0.001）。模型組黃體數(shù)較多，成熟卵泡數(shù)較少，說(shuō)明已經(jīng)過(guò)青春發(fā)育期初期，多次出現(xiàn)過(guò)排卵形成黃體，進(jìn)入卵巢發(fā)育比較成熟的階段。對(duì)照組卵巢中成熟卵泡數(shù)較多，黃體數(shù)較少，說(shuō)明大部分個(gè)體處于青春發(fā)育初期，剛出現(xiàn)排卵，以上現(xiàn)象符合大鼠青春發(fā)育規(guī)律，可看出模型組較對(duì)照組卵巢發(fā)育時(shí)間更長(zhǎng)，更成熟。本實(shí)驗(yàn)將雌性幼齡SD大鼠的兩項(xiàng)肥胖相關(guān)指標(biāo)：體質(zhì)量、腹圍與四項(xiàng)性發(fā)育相關(guān)指標(biāo)：陰門開(kāi)啟時(shí)間、第一個(gè)動(dòng)情間期、黃體數(shù)、LH分別進(jìn)行Pearson correlation檢驗(yàn)，通過(guò)統(tǒng)計(jì)結(jié)果分析可得出以下結(jié)論：幼齡SD大鼠的肥胖與青春發(fā)育密切相關(guān)，體重、腹圍越大，則性發(fā)育越超前，即超正常范圍的肥胖體重和腹圍將誘發(fā)青春發(fā)育過(guò)程提前啟動(dòng)，性器官提前發(fā)育。本次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)論與肥胖女童青春發(fā)育提前的相關(guān)臨床報(bào)道相互驗(yàn)證［16］。依據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們進(jìn)一步推論，青春發(fā)育期控制雌性動(dòng)物體脂肪含量可以延緩其性發(fā)育提前的趨勢(shì)，至于雌性動(dòng)物脂肪調(diào)控與性發(fā)育調(diào)控兩者間是否存在機(jī)制的相關(guān)性或同源性，今后將進(jìn)行更深入的實(shí)驗(yàn)探索。

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Correlation of obesity and early puberty in immature female SD rats

YUAN Yu-yun，SHEN Jian，ZHAO Jun
(Shuguang HosPital Affiliated to Shanghai University of TCM，Shanghai 201203，China）

Objective To exPlore the correlation of obesity and early Puberty in immature female SD rats by comParison of Puberty develoPment-related indicators between the model grouP and control grouP after setting uP SD immature rat models of nutritional obesity.Methods Ten female rats and 6 male rats were divided in two grouPs：the Parent model grouP(5 females and 3males）and Parent control grouP(5 females and 3 males）.The model grouP was fed with high-fat diet for 8 weeks and control grouP was fed with normal diet.The rats of model grouP with body weight≥20％ higher than those of the control grouP were matched and their female offsPrings were taken as model offsPring grouP.Thefemale offsPrings of the Parent control grouP were taken as control offsPring grouP.The 21-days old immature rat model grouP was fed with high-fat diet for 5 weeks while the control grouP immature rats were fed with normal diet for the same time.Since 21-days old the immature rats were observed for the vaginal oPening state daily，and after the vaginal oPening they were examined by vaginal smear.The rats were weighed daily，and their abdominal circumference and body length were measured biweekly.The rats of both exPerimental grouPs were killed at the age of 56-days old，the serum triglyceride，cholesterol，estradiol，follicle stimulating hormone，and luteinizing hormone were measured，and the uterus，ovaries，Pituitary gland were taken and weighed and the ovary index and uterus index were calculated.The uterus and ovaries were examined by Pathology using HE staining，and the corPus luteum and mature follicles in the largest cross section of ovaries were counted.Results 1.The body weight and the abdominal circumference of the 56-days old immature rats in the model grouP were significantly higher than those of control grouP(P＜0.001）.2.The values of serum TG and CH in the immature rats of model grouP were significantly higher than those in the control grouP(P＜0.001）.3.The values of serum LH and E2in the immature rats of model grouP were significantly higher，and the value of serum FSH was significantly lower than those of the control grouP(P＜0.001 for all）.4.The number of corPus luteum in the largest cross section of ovaries was significantly higher，and the number of mature follicles was significantly lower in the model grouP than those of control grouP(P＜0.001 for both）.5.The Pearson correlation analysis showed that the body weight of immature rats was Positively related to the serum LH level and quantity of corPus luteum，and negatively correlated with vaginal oPening time and the first diestrus time；the abdominal Perimeter of the immature rats was Positively related to the quantity of corPus luteum，serum LH，and negatively correlated with vaginal oPening time and the first diestrus time.Conclusions The early Puberty of immature SD rats is Positively related to obesity，i.e.the develoPment of immature rats with obesity occurs earlier than in normal immature rats.

Puberty；DeveloPment；Obesity；Hormones；Immature SD rats；Uterus；Ovary

R-33 < class="emphasis_bold">【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

A

1671-7856（2015）09-0039-06

10.3969.j.issn.1671.7856.2015.009.008

上海市衛(wèi)生局中醫(yī)藥科研基金(編號(hào)：2012J002A）；上海市中醫(yī)臨床優(yōu)勢(shì)專科(三年行動(dòng)計(jì)劃）(編號(hào)：ZYSNXD-YLYSZK006）。

袁羽昀(1986-），女，研究方向：中醫(yī)兒科內(nèi)分泌疾病基礎(chǔ)研究。E-mail：chnyuyun@foxmail.com。

趙鋆(1971-），女，研究方向：中醫(yī)兒科，內(nèi)分泌疾病臨床與基礎(chǔ)研究。E-mail：annezhao@sina.com。

2015-08-18