姚莉菊等

特約欄目主持：萬勇

高級(jí)工程師，武漢市農(nóng)科院農(nóng)業(yè)機(jī)械化科學(xué)研究所副所長，負(fù)責(zé)科研、科技管理工作。長期在農(nóng)業(yè)科技推廣一線從事新產(chǎn)品開發(fā)和高新技術(shù)的引進(jìn)、改進(jìn)工作。參與“七萬畝建設(shè)”相關(guān)技術(shù)規(guī)范的起草與制定；主持、完成《七萬畝設(shè)施蔬菜技術(shù)集成示范推廣》（農(nóng)機(jī)部分）；長期從事“溫室內(nèi)環(huán)境智能控制系統(tǒng)”、“現(xiàn)代設(shè)施條件下水肥耦合與配方施放技術(shù)”的研究；致力于小型設(shè)施蔬菜機(jī)具開發(fā)，擁有專利5項(xiàng)。

農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全事關(guān)民眾消費(fèi)安全和社會(huì)穩(wěn)定。近年來，武漢市蔡甸區(qū)以區(qū)農(nóng)檢站為主體，不斷強(qiáng)化監(jiān)管措施，按照統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)為各街鄉(xiāng)鎮(zhèn)配備了TTNJ-16通道檢測(cè)儀器，以提高蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，在使用過程中建議注意以下幾點(diǎn)。

1 試劑配制及保存

1.1 緩沖液

取一包緩沖液，加入500 mL蒸餾水，溶解攪拌均勻后密閉，于避光、陰涼處保存。

1.2 顯色劑

取顯色劑一瓶，加入15 mL緩沖液溶解，4℃冰箱中保存。

1.3 底物

取底物一瓶，加入15 mL蒸餾水，4℃冰箱中保存。

1.4 乙酰膽堿酯酶

取乙酰膽堿酯酶一瓶，加入3 mL緩沖液溶解，4℃冰箱中保存。

2 對(duì)照溶液測(cè)試

2.1 自動(dòng)對(duì)照的設(shè)置

在試管中加入2.5 mL緩沖液，再加入100 μL酶、100 μL顯色劑，搖勻后置于水浴鍋中，在恒溫37.5℃下放置15 min。15 min后再加入100 μL底物搖勻，立即倒入1 cm比色皿，放入儀器比色池中，按“對(duì)照”按鈕，儀器開始作對(duì)照，3 min后自動(dòng)對(duì)照完成。

2.2 測(cè)定

建議測(cè)定對(duì)照值在0.4～0.8，當(dāng)對(duì)照值在0.3～0.4時(shí)盡快使用本試劑盒，同時(shí)冷凍保存未使用完的乙酰膽堿酯酶液。當(dāng)排除溫度、檢測(cè)設(shè)備等其他因素后，已測(cè)定的對(duì)照值仍然<0.3，則應(yīng)停止使用該瓶乙酰膽堿酯酶液，重新配制一瓶乙酰膽堿酯酶液后，嘗試再次測(cè)定對(duì)照值，通常情況下僅更換乙酰膽堿酯酶液即可繼續(xù)正常使用本試劑盒。

3 樣品處理

3.1 取樣部位

為了保證取樣具有代表性，葉菜一般取來自不同植株葉片的葉尖部；果蔬從不同個(gè)體的表皮處取樣。樣品不可用水沖洗，剪成1 cm×1 cm的碎片，稱取樣品2 g，放入燒杯中。

3.2 樣品處理

在裝有樣品的燒杯中加入10 mL緩沖液，振蕩1～2 min后過濾，用移液槍提取2.5 mL過濾后的待測(cè)液于試管中，加入100 μL酶、100 μL顯色劑，搖勻。在37.5℃水浴恒溫鍋中放置15 min，放置時(shí)間與對(duì)照液放置時(shí)間一致。

3.3 檢測(cè)

15 min后再加入100 μL底物搖勻，此時(shí)檢測(cè)液開始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即倒入1 cm比色皿，放入儀器比色池中，按“測(cè)量”按鈕，3 min后儀器測(cè)量完成，顯示測(cè)量結(jié)果。當(dāng)樣品提取液對(duì)酶的抑制率小于50%時(shí)，樣品為合格；當(dāng)≥50%時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，即樣品檢測(cè)結(jié)果為陽性。

4 檢測(cè)結(jié)果的歸檔

對(duì)檢測(cè)結(jié)果為超標(biāo)的樣品要重復(fù)檢測(cè)2次以上，以確保結(jié)果的可靠性。應(yīng)在檢測(cè)工作完成后將檢測(cè)結(jié)果粘貼在記錄本上，同時(shí)保存在檢測(cè)儀器內(nèi)，便于存檔、備查等。

5 檢測(cè)器皿的清洗

檢測(cè)所用的比色皿，必須用洗滌液清洗，后用清水清洗干凈，再晾干。不要用洗潔精之類的清潔劑，以免影響測(cè)量，不可用堿液洗滌，也不能用硬布、毛刷刷洗。試管、燒杯、剪刀一定要干凈，操作過程中應(yīng)分開使用，以免影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

6 其他需注意的事項(xiàng)

①蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時(shí)，可采取整株（體）蔬菜浸泡。對(duì)一些葉綠素含量較高的蔬菜，也可采取整株（體）浸泡的方法，減少色素的干擾。

②試劑溶解前冷凍保存的保質(zhì)期為1年；酶粉溶解后應(yīng)盡快用完，可短期冷藏保存，如1周不能用完，應(yīng)冷凍保存，反復(fù)冷凍不可超過3次，冷凍保存不超過1個(gè)月；底物和顯色劑溶解后冷藏保存，保質(zhì)期1個(gè)月，可冷凍長期保存，配制檢測(cè)試劑時(shí)請(qǐng)勿劇烈振蕩。

③樣品處理時(shí)勿將樣品剪得太碎。

④加入酶試劑必須定量準(zhǔn)確，勿將液體滴在玻璃壁上，否則誤差較大。向下操作。

⑤樣品結(jié)果抑制率大于50%的需要重復(fù)檢驗(yàn)2次，才能判斷為陽性。

參考文獻(xiàn)

[1] 秦桂云.蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)的方法及原理[EB/OL].（2013-05-17）[2014-02-11].http：//www.agrichem.cn/news/2013/3/25/201332514442058255.shtml.

[2] 普春，歐陽繼敏.蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法介紹及注意事項(xiàng)[J].云南農(nóng)業(yè)科技，2009（S2）：97-98.