張 英，李翠麗，王 煒，高秀娟，勞鳳云，李繼安

(華北理工大學(xué)，河北 唐山 063000)

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中藥復(fù)方十子代平方中總黃酮提取工藝優(yōu)化研究

張 英，李翠麗，王 煒，高秀娟，勞鳳云，李繼安*

(華北理工大學(xué)，河北 唐山 063000)

目的：優(yōu)化中藥復(fù)方十子代平方中總黃酮的提取工藝。方法：分別采用回流、超聲振蕩兩種方法提取中藥復(fù)方十子代平方中總黃酮成分，設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)確定其最佳提取工藝。結(jié)果：中藥復(fù)方十子代平方中總黃酮最佳提取工藝為溫度60℃，料液比1∶20，乙醇65%，時(shí)間為90min。結(jié)論：超聲振蕩法適于中藥復(fù)方十子代平方總黃酮成分的提取具有快速、高效、節(jié)能等特點(diǎn)。

總黃酮；UV法；正交實(shí)驗(yàn)

中藥復(fù)方十子代平方由五子衍宗丸與三子養(yǎng)親湯合方化裁，加茺蔚子、梔子、女貞子、決明子。五子衍宗丸由菟絲子、枸杞子、五味子、車前子、覆盆子等藥材組成；三子養(yǎng)親湯由萊菔子、蘇子、去白芥子等藥材組成。黃酮為植物界中最重要的低分子量酚類化合物之一，具有多種藥理活性，其中抗氧化活性研究最廣泛。氧化性應(yīng)激為糖尿病發(fā)病的重要因素，由于黃酮類物質(zhì)羥基的存在，具有較強(qiáng)的抗氧化性質(zhì)，可清除氧自由基，抑制脂質(zhì)過氧化物和螯合金屬離子的作用[1]。目前，研究發(fā)現(xiàn)某些黃酮類化合物可改善2型糖尿病大鼠胰島素抵抗能力及糖耐量[2]。本研究旨在尋找中藥降糖成分，實(shí)驗(yàn)采用回流、超聲振蕩方法提取中藥復(fù)方十子代平方中總黃酮成分，并設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化總黃酮提取工藝，為進(jìn)一步研究中藥復(fù)方黃酮成分的分離提取及藥理活性提供基礎(chǔ)。

1 材料與儀器

1.1 材料

十子代平方組方(均購自唐山市同仁堂藥店)；無水乙醇、石油醚、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁等均為分析純；蘆丁對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：0080-9705)。

1.2 儀器

電子天平(上海第二天平儀器廠)，微型高速粉碎機(jī)(深圳化試科技有限公司)，電熱恒溫水浴鍋(上海器械五廠)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-SZAA(上海亞榮生化儀器廠)，循環(huán)水式真空泵(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)，KQ-700DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫外吸收法測定提取物中總黃酮含量[3]

2.1.1 蘆丁對(duì)照品溶液制備 精密稱取蘆丁對(duì)照品10mg，置于50mL容量瓶，加70%的乙醇適量，置水浴微熱溶解，加蒸餾水至刻度線，搖勻靜置，即得0.2mg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液。

2.1.2 測定波長選擇 精密量取蘆丁對(duì)照品溶液1.5mL，置于10mL容量瓶，加5%的亞硝酸鈉0.3mL，搖勻，放置6min；加10%的硝酸鋁0.3mL，搖勻，放置6min；加4%的氫氧化鈉2mL，搖勻，并用70%的乙醇定容至刻度線，搖勻，放置15min。采用紫外分光光度計(jì)于200～700nm波長范圍內(nèi)掃描吸收光譜，結(jié)果顯示對(duì)照品在510nm波長附近有最大吸收鋒，故確定其波長為510nm。見圖1。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取蘆丁對(duì)照品0.00、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mL置10mL容量瓶中，按“2.1.2”項(xiàng)方法，在510nm處測定其吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)、蘆丁濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=0.038 2X-0.018 7，R=0.998 4。結(jié)果表明，線性關(guān)系良好。

2.1.4 提取物中總黃酮含量測定 精密量取“2.1.1”項(xiàng)提取液，置10mL容量瓶中，按“2.1.2”項(xiàng)方法于510nm處測定其吸光度，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算提取物中總黃酮的含量。

圖1 蘆丁對(duì)照品紫外吸收光譜

2.2 中藥復(fù)方十子代平方黃酮提取工藝[4-5]

2.2.1 回流提取 精密稱量中藥復(fù)方十子代平方組方粉末12.0g，置索氏提取器，用石油醚于70℃回流2h除去脂溶性物質(zhì)，揮干石油醚，再以80%的乙醇于熱水浴中回流浸提2h，提取結(jié)束后抽濾除去不溶性雜質(zhì)，收集濾液并濃縮，按“2.1.2”項(xiàng)方法測定其含量。

2.2.2 超聲振蕩提取 精密稱量中藥復(fù)方十子代平方組方粉末12.0g，置索氏提取器，用石油醚于70℃回流2h除去脂溶性物質(zhì)，揮干石油醚，再以80%的乙醇于30kHz條件超聲提取1h，溫度為60℃，提取結(jié)束后抽濾除去不溶性雜質(zhì)，收集濾液并濃縮，按“2.1.2”項(xiàng)方法測定其含量。

2.2.3 正交實(shí)驗(yàn) 采用超聲振蕩法提取中藥復(fù)方十子代平方總黃酮成分，并優(yōu)化提取工藝，設(shè)計(jì)L9(33)正交實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)因素水平見表1。

表1 因素水平

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，極差比較為RB>RC>RA， 十子代平方復(fù)方成分總黃酮提取率的主要影響因素為提取時(shí)間，其次為乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)、料液比。根據(jù)K值優(yōu)選最佳提取條件，即溫度60℃，料液比1∶20，乙醇65%，時(shí)間為90min。正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及極差分析結(jié)果見表2。

2.2.4 最佳工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 取粉碎的十子代平方組方1.0g，按“2.2.1”項(xiàng)方法，于最佳提取條件提取1 次，重復(fù)試驗(yàn)3次取平均值，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果見表3。

3 討論

預(yù)試驗(yàn)中比較回流提取與超聲波提取兩種方法，結(jié)果表明：超聲振蕩方法提取率相對(duì)較高，提取時(shí)間短，故選擇超聲振蕩法提取中藥復(fù)方十子代平方總黃酮成分，并設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選最佳提取條件，方法具有快速、高效、節(jié)能等特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用比色法以蘆丁為對(duì)照，是測定黃酮類化合物含量的常用方法，操作簡便、準(zhǔn)確、靈敏、穩(wěn)定性好，適用于十子代平方復(fù)方中總黃酮含量的測定。

本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選中藥復(fù)方十子代平方中總黃酮的最佳提取工藝，為進(jìn)一步研究其藥理活性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果分析

表3 提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

[1] 俞靈鶯,李向榮.植物黃酮類抗糖尿病及其并發(fā)癥的研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)·衛(wèi)生學(xué)分冊(cè),2000,27(6):331-335.

[2] 韓淑英,王志路,儲(chǔ)金秀,等.蕎麥花葉黃酮對(duì)2型糖尿病大鼠胰島素抵抗及肝組織PTP1B的影響[J].中國中藥雜志,2009,34(23):3114-3118.

[3] 王巖,謝媛媛,孫嘉鴻,等. 菊花提取物中總黃酮與總有機(jī)酸的含量測定[J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,28(2):124-129.

[4] 康永鋒,李艷,段吳平,等. 超聲波輔助提取赤豆中總黃酮的工藝研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥,2011,22(7):1695-1697.

[5] 賴紅芳，韋瑞松，黃秀香.金櫻根總黃酮提取工藝優(yōu)[J]．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(3):13.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2015-04-25

河北省科技局國際合作項(xiàng)目(13392502D)

張英(1994-)，女，華北理工大學(xué)在讀生，研究方向?yàn)橹兴幩幚韺W(xué)。

李繼安(1962-),男,華北理工大學(xué)教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)藥治療代謝性疾病。E-mail:lnyy@vip.sina.com

R286;TQ461

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1673-2197(2015)16-0026-02

10.11954/ytctyy.201516012