閆云霞，楊中林*，蕭 偉，王振中，黃文哲

(1.中國(guó)藥科大學(xué) 現(xiàn)代中藥教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210009；2.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001)

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虎杖降尿酸作用初步研究

閆云霞1，楊中林1*，蕭 偉2，王振中2，黃文哲2

(1.中國(guó)藥科大學(xué) 現(xiàn)代中藥教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210009；2.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001)

目的：研究虎杖醇提液對(duì)高尿酸血癥小鼠的降尿酸作用，并初步探討其作用途徑。方法：灌胃給予小鼠不同劑量虎杖醇提液，7天后采用腹腔注射黃嘌呤和氧嗪酸鉀誘導(dǎo)建立小鼠高尿酸血癥模型，并對(duì)小鼠血清尿酸(SUA)、尿液尿酸(UUA)及肝臟中黃嘌呤氧化酶活性(XOD)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：虎杖醇提液可顯著降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平，促進(jìn)尿酸排泄，并抑制肝臟中XOD活性。結(jié)論：虎杖醇提液可通過(guò)抑制肝臟XOD活性而促進(jìn)尿酸排泄，從而發(fā)揮降尿酸作用。

虎杖；降尿酸作用；黃嘌呤氧化酶

痛風(fēng)是由于嘌呤代謝紊亂和(或)尿酸排泄障礙所致的一種臨床綜合征，以高尿酸血癥為主要特征。目前，對(duì)于虎杖為蓼科植物虎杖PolygonumcuspidatumSieb. et Zucc.的干燥根莖和根，味微苦，性微寒，具有利濕退黃、清熱解毒、散瘀止痛、止咳化痰的功效，可用于濕熱黃疸、風(fēng)濕痹痛等證的治療。侯建平等[1-3]研究發(fā)風(fēng)的治療以西藥為主，雖有一定效果，但副作用較多。近年來(lái)，越來(lái)越多的學(xué)者致力于天然藥物的開(kāi)發(fā)，以期從中篩選出降尿酸活性成分。

現(xiàn)虎杖提取物可通過(guò)減少痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中前列腺素(PGE2)含量等途徑改善痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎部位病理變化。也有研究報(bào)道[4]稱其水提物可抑制黃嘌呤氧化酶活性。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)腹腔注射氧嗪酸鉀和黃嘌呤致小鼠高尿酸血癥模型來(lái)研究虎杖醇提物的降尿酸作用及其可能的作用途徑，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與試劑

1.1 儀器

HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司)，RE52CS-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，epoch型酶標(biāo)儀(BIOTEK)，80-2型電動(dòng)離心機(jī)(江蘇金壇市金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠)，BS 124S型萬(wàn)分之一天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.2 試藥

虎杖(產(chǎn)地：湖北，批號(hào)：131111，購(gòu)自先聲再康江蘇藥業(yè)有限公司)，氧嗪酸鉀(Sigma，批號(hào)：STBD5759V)，黃嘌呤(Sigma，批號(hào)：SLBF7120V)，別嘌醇片(世貿(mào)天階制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20140606)，痛風(fēng)定膠囊(四川升和藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：1304104)，尿酸試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20141013)，XOD試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20141015)，考馬斯亮藍(lán)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20141013)。

1.3 動(dòng)物

KM小鼠，雄性，SPF級(jí)，18～22g，84只，購(gòu)自上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)樣品溶液制備

2.1 虎杖醇提液制備

2.1.1 高濃度虎杖醇提液制備 稱取虎杖藥材粗粉18.00g，加11倍量70%乙醇浸泡2h后，分別以11倍、10倍、9倍量70%乙醇水浴加熱回流，時(shí)間分別為2h、1.5h、1h。合并3次提取液，濾過(guò)，減壓回收乙醇至50mL，加入1% CMC-Na溶液定容至100mL，即得濃度為0.18g·mL-1的藥液。

2.1.2 中濃度虎杖醇提液制備 稱取虎杖藥材粗粉9.00g，提取方法同上，得濃度為0.09g·mL-1的藥液。

2.1.3 低濃度虎杖醇提液制備 稱取虎杖藥材粗粉4.50g，提取方法同上，得濃度0.045g·mL-1的藥液。

2.2 陽(yáng)性藥溶液配制

2.2.1 別嘌醇溶液配制 取別嘌醇片3片，稱重后置于研缽中研碎，精密稱取0.196 2g(約含別嘌醇150mg)，加0.5%CMC-Na溶液定容至100mL，即得別嘌醇濃度為1.5mg·mL-1的藥液。

2.2.2 痛風(fēng)定溶液配制 精密稱取3.600 7g痛風(fēng)定粉末，加0.5%CMC-Na溶液定容至100mL，即得痛風(fēng)定濃度為36.0mg·mL-1的藥液。

2.3 造模劑配制

精密稱取氧嗪酸鉀和黃嘌呤適量，加入0.8%CMC-Na溶液超聲溶解，使二者終濃度分別為10mg·mL-1和5mg·mL-1。

3 方法與結(jié)果

3.1 實(shí)驗(yàn)方法

將84只KM小鼠隨機(jī)分為七組，分別為空白組、模型組、別嘌醇組、痛風(fēng)定組、虎杖高劑量組(HH)、虎杖中劑量組(HM)、虎杖低劑量組(HL)。于每天上午灌胃給藥，空白組小鼠給予等體積生理鹽水，模型組小鼠給予等體積0.5%CMC-Na溶液，其他各組小鼠給予相應(yīng)藥液，體積劑量為20mL·kg-1。別嘌醇組、痛風(fēng)定組、HH組、HM組、HL組小鼠給藥劑量分別為30.03mg·kg-1、0.72g·kg-1、3.6g·kg-1、1.8g·kg-1、0.9g·kg-1，持續(xù)給藥7天。于第7天采用腹腔注射進(jìn)行造模，空白組小鼠給予等體積生理鹽水，其余各組小鼠給予造模劑，體積劑量為20mL·kg-1，造模劑量為氧嗪酸鉀200mg·kg-1、黃嘌呤100mg·kg-1。造模1h后灌胃給予小鼠相應(yīng)藥物。

給藥1h后對(duì)小鼠進(jìn)行眼底靜脈叢取血，約0.5mL，室溫自然凝血1h，離心分取血清(4 000rpm，10min)，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定各血清樣品中的尿酸濃度。取血后，將小鼠脫頸處死，迅速解剖小鼠，取適量肝臟組織，置于離心管中，加9倍量生理鹽水勻漿(10 000rpm，1min)，離心勻漿液(2 500rpm，10min)，分取上清液。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定肝臟組織中的XOD活性。收集小鼠造模后1h和給藥后1h的尿液，混合尿液，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定尿液中尿酸的排泄量。

3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3.3 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組小鼠血清尿酸水平明顯升高(P<0.01)，表明高尿酸血癥模型造模成功。與模型組比較，別嘌醇組及痛風(fēng)定組小鼠血清尿酸濃度明顯降低(P<0.05)，肝臟XOD活性亦明顯降低(P<0.05)，表明別嘌醇及痛風(fēng)定可通過(guò)抑制肝臟XOD活性而降低血清尿酸水平；與模型組比較，虎杖醇提液高、中、低劑量組小鼠血清尿酸濃度明顯降低(P<0.05)，尿酸排泄量明顯增大(P<0.01)，肝臟XOD活性明顯降低(P<0.01)，表明虎杖可通過(guò)促進(jìn)尿酸排泄，抑制肝臟XOD活性而降低血清尿酸含量。

各藥物對(duì)高尿酸血癥小鼠的血清尿酸、尿酸排泄量及XOD活性影響結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各藥物對(duì)高尿酸血癥小鼠相應(yīng)指標(biāo)的影響 ±s)

注：Δ表示模型組與空白組比較(ΔP<0.05，ΔΔP<0.01)；*表示各給藥組與模型組比較(*P<0.05，**P<0.01)。

4 討論

以往痛風(fēng)多發(fā)于歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家，近年來(lái)，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和社會(huì)的進(jìn)步，該病在我國(guó)的發(fā)病率也逐年提高[5]。高尿酸血癥是痛風(fēng)的病理基礎(chǔ)，因此本研究聯(lián)合應(yīng)用氧嗪酸鉀和黃嘌呤誘導(dǎo)建立小鼠高尿酸血癥模型，其中氧嗪酸鉀為尿酸酶抑制劑，黃嘌呤為尿酸生成的前體物質(zhì)，腹腔注射后其可在增加尿酸生成的同時(shí)抑制尿酸被氧化成尿囊酸，從而升高小鼠血清尿酸水平。

本研究結(jié)果表明，虎杖高、中、低劑量醇提液均可明顯降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平，增加尿酸排泄量，降低黃嘌呤氧化酶活性。黃嘌呤氧化酶既能催化次黃嘌呤生成黃嘌呤，進(jìn)而生成尿酸，又能直接催化黃嘌呤生成尿酸。而虎杖醇提物可通過(guò)抑制尿酸生成、促進(jìn)尿酸排泄兩條途徑對(duì)高尿酸血癥小鼠發(fā)揮降尿酸作用。尿酸排泄過(guò)程中涉及腎小管上皮細(xì)胞上的多種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[6]，虎杖醇提物對(duì)其作用機(jī)制還需要進(jìn)一步深入研究。

[1] 王斌,侯建平,李敏,等.虎杖提取物對(duì)模型大鼠滑膜組織黏附分子與核轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響[J].中藥新藥與臨床藥理,2008,19(6):434-437.

[2] 王斌,侯建平,李敏,等.虎杖提取物對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清PGE-2水平的影響[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志, 2008,14(12): 944-945.

[3] 侯建平.虎杖提取物對(duì)尿酸鈉致痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎家兔滑膜組織PPAR-γ的影響[J].中藥藥理與臨床, 2010,26(5):76-79.

[4] KONG LD, CAI Y, HUANG WW,et al.Inhibition of xanthine oxidase by some Chinese medicinal plants used to treat gout[J].J Ethnopharmacol,2000,73(1):199-207.

[5] 邵繼紅,徐耀初,莫寶慶,等.痛風(fēng)與高尿酸血癥的流行病學(xué)研究進(jìn)展[J].疾病控制雜志,2004,8(2): 152-154.

[6] 朱立然,陳光亮.尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2012,17(11):1289-1294.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Study on the Anti-hyperuricemia Effect ofPolygoniCuspidateRhizoma et Radix

Yan Yunxia1,Yang Zhonglin1*,Xiao Wei2,Wang Zhenzhong2,Huang Wenzhe2

(1.Key Laboratory of Modern Chinese Medicines of Ministry of Education, China Pharmaceutical University,Nanjing 210009, China;2.Jiangsu Kanion Parmaceutical Co.Ltd, Lianyungang 222001, China)

Objective:To study the effect of ethanol extract ofPolygoniCuspidateRhizoma et Radix in hyperuricemic mice and investigate its possible mechanism. Methods:Different doses of ethanol extract of Polygoni Cuspidate Rhizoma et Radix were administrated to mice for 7 days, then hyperuricemia was induced by potassium oxonate and xanthine and the serum uric acid (SUA), urinary uric acid (UUA) and the hepatic xanthine oxidase activities (XOD) were detected. Results:Three doses of ethanol extract of Polygoni Cuspidate Rhizoma et Radix can significantly reduce the level of SUA, promote uric acid excretion and inhibit the XOD in hepatic. Conclusion:Ethanol extract ofPolygoniCuspidateRhizoma et Radix can significantly reduce the level of SUA in hyperuricemic mice by promoting uric acid excretion and inhibiting the XOD in hepatic.

PolygoniCuspidateRhizoma et Radix;Anti-trioxypurine; Xanthine Oxidase

2014-12-01

閆云霞(1989-)，女，中國(guó)藥科大學(xué)碩士研究生，研究方向?yàn)榭雇达L(fēng)藥物。E-mail：yanyunxia16@163.com

楊中林(1950-)，女，滿族，中國(guó)藥科大學(xué)教授，研究方向?yàn)橹兴幮滤幯邪l(fā)。 E-mail：yzl1950@126.com

R285.5

A

1673-2197(2015)08-0007-03

10.11954/ytctyy.201508004