鐘紅蘭，蘇潮品，林云斌，申 健，陳鐵釬，秦 冰

(廣東省生物制品與藥物研究所，廣東 廣州 510440)

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鹽制柚核炮制工藝研究

鐘紅蘭，蘇潮品，林云斌，申 健，陳鐵釬，秦 冰

(廣東省生物制品與藥物研究所，廣東 廣州 510440)

目的：篩選鹽制柚核的最佳炮制工藝。方法：采用紫外分光光度法測定鹽制柚核中檸檬苦素含量，以烘制溫度、烘制時間和浸鹽量為考察因素，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對鹽制柚核的炮制工藝進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果：浸鹽量為2%，在70℃下烘烤60min為最佳炮制工藝。結(jié)論：正交試驗(yàn)確定的鹽制柚核炮制工藝合理可靠，穩(wěn)定性好，可為大批量生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

鹽制柚核；檸檬苦素；炮制工藝；正交設(shè)計(jì)

柚核為蕓香科柑橘屬植物柚(Citrusgrandis(L.)Osbeck)干燥成熟的核(種子)，性平、溫，味苦，歸肝經(jīng)，具有疏肝理氣、宣肺止咳的功效，臨床可用于治療疝氣、咳嗽、呃逆等疾病[1]。其來源和功效與橘核(蕓香科柑橘屬植物橘及其栽培變種的干燥成熟種子)相似，關(guān)于橘核歷代有多種炮制方法，在2010版《中華人民共和國藥典》也有規(guī)定其炮制方法：鹽橘核(鹽水炙法)[2]。但歷代均沒有記載關(guān)于柚核的炮制方法，而臨床和其他行業(yè)又常常會用到柚核。為促進(jìn)傳統(tǒng)中藥的綜合開發(fā)，更好地利用藥用資源，變廢為寶，有必要對柚核的炮制工藝進(jìn)行研究，為其臨床使用提供科學(xué)依據(jù)?，F(xiàn)代研究表明，柚核的主要活性成分和橘核相似，主要為檸檬苦素類化合物[3]。故本研究參照橘核(鹽炙法)的炮制方法，但考慮到鹽炙藥材加熱溫度不宜過高，因此對該方法進(jìn)行改良，采用烘箱烘烤的方法使鹽分滲入到藥材內(nèi)部。采用正交試驗(yàn)對柚核的最優(yōu)炮制工藝進(jìn)行篩選，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

722型可見分光光度計(jì)(上海菁華科技)；Denver Instrument Company AA-200型分析天平(美國產(chǎn))；HX1001T電子天平(慈溪市天東衡器廠)；TG-16高速離心機(jī)(鞏義市宇華儀器)；XW-80漩渦混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠)；HK-電熱恒溫干燥箱(智能電腦，廣州市旭郎機(jī)械)；微型植物試樣粉碎機(jī)。

1.2 試劑

檸檬苦素對照品購于北京德威鈉生物技術(shù)有限公司(含量(HPLC)為99.3%)；所用試劑均為分析純：無水乙醇、石油醚(60～90℃)、硫酸、三氯化鐵、丙酮、對二-甲氨基苯甲醛；純化水。

反應(yīng)液：125mg對二甲氨基苯甲醛溶解于100mL硫酸-無水乙醇混合液(硫酸65mL，無水乙醇35mL，放冷使用)中，加入0.5mL 0.9%三氯化鐵溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3 實(shí)驗(yàn)原料

柚核為梅州產(chǎn)沙田柚的果核，經(jīng)鑒定為蕓香科柑橘屬植物柚(Citrusgrandis(L.) Osbeck)干燥成熟的核(種子)，于50℃下烘干至恒重，保存于干燥環(huán)境中。

2 方法

2.1 檸檬苦素標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密稱取檸檬苦素對照品1.30mg于100mL容量瓶中，用無水甲醇配成130μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液。在6支刻度試管中分別加入0、0.5、0.8、1.2、1.5、2.0mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加無水乙醇至2.0mL，再分別加入反應(yīng)液5.0mL，搖勻，靜置30min，于500nm波長下測定吸光度[4]。以空白溶液(精密吸取2.0mL無色乙醇，加入反應(yīng)液5.0mL)為參比溶液，以標(biāo)準(zhǔn)品加入量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，采用直線回歸方法計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖1)，結(jié)果表明，檸檬苦素線性范圍為9.291 6～37.166 6μg/mL，回歸方程為Y=0.0177X+0.269，R2=0.997 6(Y：吸光值，X：標(biāo)準(zhǔn)品相當(dāng)量) 。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 鹽制柚核制備

取生柚核9份，每份100g，將藥材平鋪于托盤中，厚度約為2cm，分別加鹽水30mL至密閉容器內(nèi)拌勻，燜潤2h，待鹽水全部吸干后將藥材放入烘箱內(nèi)烘制。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知低溫烘制即可獲得穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，故烘制溫度不宜過高。選擇正交試驗(yàn)因素為加鹽量(A)、烘制溫度(B)、烘制時間(C)，每個因素取3個水平(見表1)，采用L9(34)正交表[5]安排實(shí)驗(yàn)。

表1 鹽制柚核因素水平

注：加鹽量(%)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)，即每100g柚核中鹽用量克數(shù)。

2.3 檸檬苦素類物質(zhì)總量測定

2.3.1 樣品液制備 取柚核炮制品10g，粉碎，過40目篩。精確稱取0.2g供試品(精確到0.001g)于10mL刻度試管中，加2mL石油醚，渦流混合3min，于4 000r/min條件下離心，吸走石油醚提取物，再加入適量石油醚重復(fù)以上操作，至提取物無色為止。試管中的剩余物中加入2mL丙酮，渦流提取3min，4 000r/min條件下離心，收集上清液，再加入丙酮重復(fù)以上操作數(shù)次。丙酮提取物用無水乙醇定容至10mL，待測[6]。

2.3.2 含量測定 精密吸取2.0mL樣品制備液，測定其吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算檸檬苦素含量，按照下列公式計(jì)算出原料中檸檬苦素類似物的含量。結(jié)果見表2，方差分析見表3。原料中檸檬苦素類似物含量(%)=(10C/LM)×100(其中C：檢測值；L：樣品加入體積；10：樣品制備定容體積；M：樣品質(zhì)量)。

表2 正交試驗(yàn)表及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：最佳條件為A2B2C1。

表3 正交實(shí)驗(yàn)(方差分析)

注：F0.05(2,2)=14.434。

2.3.3 最佳炮制工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 按照最佳炮制工藝A2B2C1制備3批鹽制柚核樣品，每批100g，測定其中檸檬苦素類物質(zhì)總量。結(jié)果見表4。

表4 3批鹽制柚核烘制實(shí)驗(yàn) (mg/L)

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，以檸檬苦素為考察指標(biāo)，鹽制柚核的最佳炮制工藝A2B2C1，即生柚核加2%鹽水拌勻，燜潤2h，待鹽水全部吸干后置于70℃烘箱烘制60min，取出，放涼。其中各因素對檸檬苦素含量的影響由大到小依次為：烘制時間>浸鹽濃度>烘制溫度。

4 討論

目前，中藥材炮制工藝大多缺乏科學(xué)合理的技術(shù)參數(shù)，而柚核作為一種常用中藥，在歷版藥典及古籍中均未收載其炮制方法。柚核在抗癌、抗氧化、抑菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗病毒等方面的功效備受關(guān)注，其提取物不僅可作為食品風(fēng)味改良劑和添加劑應(yīng)用在食品工業(yè)，亦可用于化妝品行業(yè)[6]。因此，對柚核炮制工藝的研究具有重要意義。

[1] 南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1985:2225-2226.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2015.

[3] 鐘紅蘭,蘇潮品,林云斌,等.中藥柚核(種子)研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2014,10(8):38-40.

[4] 田慶國,丁霄霖.測定橘核中檸檬苦素中檸檬苦素類似物的分光光度法[J].分析測試學(xué)報,1999,18(9):45-47.

[5] 付志玲,房敏峰,王啟林,等.烘法炮制苦杏仁工藝及影響因素研究[J].云南民族大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2010,19(2):140-142.

[6] 徐玉娟,施英,肖更生,等.橘核中檸檬苦素類物質(zhì)測定方法的研究[J].現(xiàn)代食品科技,2007(2):80-81.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Study on the Processing Technology of Pomelo Nuclear by Salty Water

Zhong Honglan，Su Chaopin，Lin Yunbin，Shen Jian，Chen Tieqian，Qin Bing

(Guangdong Provincial Institute of Biological Products and Materia Medica，Guangzhou 510440,China)

Objective:To optimize the processing technology of Pomelo nuclear by salty water through orthogonal test. Methods:Ultraviolet spectrophotometry was applied to determine the limonin content,which was extracted from processed Pomelo nuclear,and the processing was designed by orthogonal design,selecting three factors: soaking temperature, time and salt solution.Results:The best sample was soaked by 2% salt solution at 70℃ for 60minutes.Conclusion:The processing of Pomelo nuclear by salty water is reasonable and reliable and has a practical applicability.

Pomelo Nuclear Processed by Salty Water;Limonin;Processing Technology;Orthogonal Design

2015-06-26

廣東省建設(shè)中醫(yī)藥強(qiáng)省立項(xiàng)課題(20122183)

鐘紅蘭(1965-)，女，廣東省生物制品與藥物研究所副主任中藥師，研究方向?yàn)轭A(yù)防藥物及中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

R282.02

A

1673-2197(2015)22-0036-02

10.11954/ytctyy.201522015