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消腫止痛膏對(duì)角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足腫脹模型IL-1β、TNF-α炎癥因子的影響*

2015-04-25 11:12:38胡彥偉李彥民陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院骨科咸陽(yáng)712000
陜西中醫(yī) 2015年8期
關(guān)鍵詞:乳膏炎癥急性

楊 進(jìn) 胡彥偉 李彥民 陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院骨科 (咸陽(yáng)712000)

急性軟組織損傷作為臨床骨傷科常見疾病,如不及時(shí)治療,輕者則出現(xiàn)遷延日久的慢性持續(xù)性疼痛,影響患者的肢體活動(dòng)及功能的恢復(fù),甚者導(dǎo)致患者自理能力受阻[1]。消腫止痛膏是我院創(chuàng)傷骨科基于急性軟組織損傷“氣滯血瘀”的基本病機(jī)特點(diǎn),臨床主要用于創(chuàng)傷引起的急性軟組織損傷的早期。角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足腫脹模型是如今醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用的經(jīng)典急性炎癥模型,主要用于臨床篩選和評(píng)價(jià)藥物的抗炎作用和炎癥機(jī)制的實(shí)驗(yàn)性研究[2]。本此研究主要通過建立角叉菜膠足腫脹模型評(píng)價(jià)消腫止痛膏的抗炎消腫作用,為消腫止痛膏廣泛推廣于臨床提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)?,F(xiàn)將研究結(jié)果匯報(bào)如下。

1 材 料 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年的SD級(jí)大鼠84只,雌雄各半,體重200g±20g,由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(陜)2012-005。

1.2 藥物和試劑 消腫止痛膏,由陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑室提供;雙氯芬酸鈉凝膠(扶他林乳膏),由陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院提供(國(guó)藥準(zhǔn)字 H10900074);角叉菜膠Sigma公司,批號(hào):122k14456;IL-1β、TNF-αELISA 試劑盒,購(gòu)自伊萊瑞特生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 酶標(biāo)儀,RT-6000,深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司;隔水式恒溫培養(yǎng)箱,DHG-9140A型,上海一恒科技有限公司;離心機(jī),KDC-40,科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司;臺(tái)式電子天平,F(xiàn)A1104,上海恒平科學(xué)儀器有限公司。

2 方 法 2.1 動(dòng)物分組 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在室溫20~25℃,濕度40~70%的條件下,自由飲食常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。將64只大鼠稱重后按照體重大小編號(hào)后,完全隨機(jī)法將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、消腫止痛膏組、扶他林乳膏組,每組16只。

2.2 造模及給藥 模型組大鼠給予凡士林賦形劑取適量外涂,1d1次;消腫止痛膏組給予消腫止痛膏外敷治療,將消腫止痛膏取適量均勻涂抹于大鼠右足處,并用膠布固定,1d1次,如有脫落及時(shí)更換。扶他林乳膏組給予扶他林乳膏治療,1d3次;空白組不做處理。各組用藥均以完全包裹腫脹區(qū)域?yàn)槎?,各組療程均為7d,7d后純凈水沖洗靜每只大鼠右后腿相應(yīng)藥物,自然風(fēng)干。

2.3 大鼠血清中IL-1β、TNF-α的測(cè)定 分別于致炎后3h、8h同時(shí)間內(nèi)于消腫止痛膏組、扶他林乳膏組、模型組、空白組各隨機(jī)選取8只動(dòng)物,在無(wú)菌條件下腔靜脈取血5mL,于抗凝管中,2500r/min轉(zhuǎn)速離心5min,取血清4℃保鮮冰箱保存?zhèn)溆茫徊捎妹嘎?lián)免疫吸附法(ELISA)對(duì)大鼠血清內(nèi)IL-1β、TNF-α定量進(jìn)行檢測(cè),具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行,終止反應(yīng)后于450nm處讀取吸光度值。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析,IL-1β及TNF-α含量數(shù)據(jù)均用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn),若正態(tài)分布,方差齊,組間采用t檢驗(yàn);若方差不齊則采用單因素或非參數(shù)卡方檢驗(yàn),P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果 3.1 各組大鼠3、8h血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量檢測(cè)結(jié)果 各組血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量在致炎后各時(shí)相均高于空白組(P<0.05)。各時(shí)相點(diǎn)各組血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量均低于模型組,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。消腫止痛膏組與扶他林乳膏組相比,3h消腫止痛膏組血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量較扶他林乳膏組略高,兩組間差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。8h消腫止痛膏組血清內(nèi)IL-1β、TNF-α與扶他林乳膏組相比組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表1、2。

表1 致炎后3h各組大鼠IL-1β、TNF-α含量比較(±s,n=8)

表1 致炎后3h各組大鼠IL-1β、TNF-α含量比較(±s,n=8)

注:與空白組相比,△P<0.05,與模型組相比,▲P<0.05;與扶他林乳膏組相比,◆P>0.05

組 別 IL-1β(ng/L) TNF-α(ng/L)空白組 82.17±3.13 96.80±6.31▲模型組 211.06±10.53 218.57±7.57△消腫止痛膏組 195.52±8.60 207.15±9.37△▲◆扶他林乳膏組 195.50±9.50 205.52±8.69△▲

表2 致炎后8h各組大鼠IL-1β、TNF-α含量比較(±s,n=8)

表2 致炎后8h各組大鼠IL-1β、TNF-α含量比較(±s,n=8)

注:與空白組相比,△P<0.05;與模型組相比,▲P<0.05;與扶他林乳膏組相比,◆P>0.05

組 別 IL-1β(ng/L) TNF-α(ng/L)空白組 84.78±4.30 89.07±6.36◆▲◆模型組 120.69±11.68 133.19±14.34△消腫止痛膏組 84.74±4.30 94.37±5.91▲◆△扶他林乳膏組 83.64±7.62 93.64±5.83▲△

4 討 論 消腫止痛膏是陜中附院創(chuàng)傷骨科依據(jù)中醫(yī)藥的基礎(chǔ)理論及軟組織損傷機(jī)理,總結(jié)臨床及前輩經(jīng)驗(yàn),以活血化瘀為治療準(zhǔn)則,經(jīng)過臨床反復(fù)驗(yàn)證,不斷加減運(yùn)用配制出的臨床經(jīng)驗(yàn)方。消腫止痛膏主要以熟地、當(dāng)歸、川芎、赤芍、酒大黃、川烏、草烏、乳香、沒藥、三七、黃柏、蒼術(shù)、香附、連翹、藏紅花、冰片、蟄蟲、骨碎補(bǔ)、自然銅為佐使藥19味中藥共同組成,急性軟組織損傷其臨床表現(xiàn)以紅、腫、熱、痛為主,其病因主要是外傷損傷血絡(luò),血溢脈外,形成瘀血阻滯,故本方以四物湯的熟地、當(dāng)歸、川芎、赤芍為君藥主活血化瘀;以酒大黃、川烏、草烏、乳香、沒藥、蒼術(shù)、香附、藏紅花三七等溫經(jīng)通脈,活血行氣藥幫助君藥行氣、活血化瘀;瘀血阻脈,阻礙氣機(jī),氣郁化熱,所以臨床損傷部位常見發(fā)熱,紅腫,故在治療中配以黃柏、連翹清熱兼以涼血止血,主要合用共為臣藥;外傷出血,血溢脈外,故以寒涼之冰片涼血止血,其性辛香,又能活血,使血止而無(wú)留瘀之弊,蟄蟲、骨碎補(bǔ)、自然銅為臨床活血療傷之常用藥,可活血療傷,生新接骨,共為佐使藥;諸藥合用具有活血止血,理氣化瘀、止痛之功,臨床療效顯著。中藥外用是通過透皮吸收作用于創(chuàng)傷局部,從而維持局部相對(duì)穩(wěn)定的血藥濃度,起到、散瘀、消腫和止痛的功效[3]。急性軟組織損傷的早期,現(xiàn)代研究表明其特點(diǎn)是微循環(huán)破壞出血以及急性炎癥反應(yīng)[4],因此抑制微循環(huán)破壞導(dǎo)致的出血,促進(jìn)微循環(huán)的恢復(fù)以及抑制炎癥反應(yīng)成為治療的關(guān)鍵[5-6]。本實(shí)驗(yàn)表明消腫止痛膏可能是以減少或降低血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量,減少炎癥介質(zhì)的釋放,消除或改善損傷組織充血水腫,抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展,且具有與扶他林乳林膏相當(dāng)?shù)目寡紫[效果。

[1] 趙藝平,牛淑亮,竇群立.消腫噴劑促進(jìn)急性軟組織損傷修復(fù)66例[J].陜西中醫(yī),2012,33(9):1174-1175.

[2] 朱 蕾,李 娟,武丹威,等.羥胺三唑?qū)遣娌苏T導(dǎo)急性炎癥的抗炎作用[J].中國(guó)臨床藥理與治療學(xué)雜志,2013,6(4):601-605.

[3] 章建華,丁偉國(guó).三黃軟膏外敷治療大鼠急性軟組織損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)正骨,2012,22(3):6-9.

[4] 章建華,丁偉國(guó).消腫定痛散濕敷治療急性軟組織損傷147例[J].光明中醫(yī),2012,27(10):2007-2008.

[5] 肖百全,朱少璇,楊 威,等.芍藥甘草湯對(duì)角叉菜誘導(dǎo)的炎癥相關(guān)指標(biāo)時(shí)序性變化的研究 [J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)與方劑學(xué)雜志,2013,6(4):601-605.

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