陳麗珍 艾朝暉 蔡藍(lán)潔 李 娟 翟銳銳 付煜榮海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南 ?？?571199

冰糖草中總酚酸的含量測(cè)定

陳麗珍 艾朝暉 蔡藍(lán)潔 李 娟 翟銳銳 付煜榮
海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南 海口 571199

目的：建立冰糖草水提液中總酚酸的含量測(cè)定方法。方法：采用分光光度法，以沒食子酸為對(duì)照品，0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe(CN)6](1∶0.9)混合液為顯色劑，在720nm波長(zhǎng)處進(jìn)行冰糖草中總酚酸的含量測(cè)定。結(jié)果：所測(cè)定總酚酸的線性相關(guān)系數(shù)為0.9995，精密度≤0.99%，平均回收率為99.4%，RSD≤2.31%，重現(xiàn)性好。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便快、準(zhǔn)確、穩(wěn)定，可作為冰糖草總酚酸含量測(cè)定的方法。

冰糖草；總酚酸；含量測(cè)定；分光光度法

冰糖草為玄參科植物野甘草ScopariadulcisL.的全草，為多年生草本植物，主要分布于我國廣西、海南、廣東、福建、臺(tái)灣及東南亞地區(qū)等，別名假甘草、假枸杞、通花草、熱痱草、米碎草等[1]。冰糖草作為一種常用的民族藥[2]，其味甘，性涼，具有疏風(fēng)止咳、清熱利濕、利水消腫之功效，可用于治療肺熱咳嗽、暑熱吐瀉、腳氣浮腫、咽喉腫痛、濕疹黃疸、熱痱、小兒麻痹、麻疹、丹毒等病癥[1-3]。目前已有冰糖草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究的報(bào)道，主要涉及其顯微鑒別、揮發(fā)油成分、藥理作用等方面的研究[4-6]，未見冰糖草總酚酸含量測(cè)定的相關(guān)報(bào)道。為進(jìn)一步開發(fā)利用該民間習(xí)用草藥，本文首次建立其水提液中總酚酸的含量的測(cè)定方法，為冰糖草的綜合開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 752型分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；1/10萬電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；粉碎機(jī)(湖南中誠制藥機(jī)械廠)。

1.2 試藥 冰糖草采自海南省萬寧市，經(jīng)海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院曾念開副教授鑒定為玄參科植物野甘草ScopariadulcisL.的干燥全草，烘干，粉碎，過40目藥篩，干燥保存?zhèn)溆?；沒食子酸對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所)；十二烷基磺酸鈉、無水乙醇、三氯化鐵、鐵氰化鉀、濃鹽酸均為分析純；水為雙蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品1.12mg，用無水乙醇溶解，定容至50ml量瓶，搖勻，即得22.4μg/ml沒食子酸對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 精密稱取冰糖草粉末0.2g，置圓底燒瓶中，加入15ml雙蒸水浸泡過夜，小火微沸提取2次，每次45min，濾過，合并濾液，加雙蒸水定容至50ml量瓶，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 測(cè)定方法 取待測(cè)溶液2.00ml置于25ml比色管，依次準(zhǔn)確加入5ml無水乙醇、加0.3%十二烷基磺酸鈉2ml及0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe(CN)6](1∶0.9)混合溶液1ml，混勻，于暗處放置5min，再加0.1mol/ml HCl至刻度，混勻，在暗處放置20min。以顯色劑為空白，在720nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A[7]。

2.4 線性關(guān)系考察 準(zhǔn)確量取對(duì)照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50ml，分別置于25ml比色管中，按“2.3”項(xiàng)下的方法顯色并測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算得回歸方程為Y=0.5941X+0.0562(r=0.9995)，表明沒食子酸含量在0.224～1.344μg/ml范圍內(nèi)，呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密稱定同一批冰糖草粉末0.2g，按“2.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行提取，同“2.3”項(xiàng)下的方法顯色并測(cè)定吸光度，RSD為0.99%(n=6)，表明該方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱定同一批冰糖草粉末0.2g，按“2.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行提取，同“2.3”項(xiàng)下的方法顯色并測(cè)定吸光度，每隔10min測(cè)定1次，記錄80min內(nèi)的吸光度值，RSD為2.02%(n=8)，表明供試品溶液在顯色后60min內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批冰糖草粉末6份，各0.2g，精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行提取，同“2.3”項(xiàng)下的方法顯色并測(cè)定吸光度，記錄吸光度值，并計(jì)算含量，RSD為1.85%(n=6)，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率 取同一批已知含量的冰糖草粉末9份，各0.1g，精密稱定，分別準(zhǔn)確加入高、中、低量的沒食子酸對(duì)照品，按“2.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行提取，同“2.3”項(xiàng)下的方法顯色并測(cè)定吸光度，記錄吸光度值，計(jì)算回收率，平均回收率為97.3%，RSD為2.31%(n=9)，結(jié)果見表1。

表1 加標(biāo)回收率測(cè)定結(jié)果(n=9)

2.9 樣品含量測(cè)定 取同一批冰糖草粉末6份，各0.2g，精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行提取，同““2.3”項(xiàng)下的方法顯色并測(cè)定吸光度，記錄吸光度值，并計(jì)算總酚酸含量，結(jié)果見表2。

表2 冰糖草中總酚酸含量測(cè)定結(jié)果(n=6)

3 結(jié)論

本文以沒食子酸為對(duì)照品，0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe(CN)6](1∶0.9)為顯色劑，采用分光光度法對(duì)冰糖草中總酚酸進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)便、快速，重現(xiàn)性好，精密度、穩(wěn)定性均滿足含量測(cè)定要求，準(zhǔn)確可靠，故可用于冰糖草的質(zhì)量控制及定量分析，為民間常用草藥冰糖草的應(yīng)用提供了理論參考依據(jù)，為冰糖草資源進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。然而，冰糖草的研究還處于初級(jí)階段，總酚酸的具體成分有待進(jìn)一步分析，其相關(guān)的活性作用還需深入研究。

[1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(下冊(cè))[M].上海：上海人民出版社,1977：2132.[2] 朱華.中國壯藥志(第1卷)[M].南寧：廣西民族出版社,2003：407.

[3] 國家中醫(yī)藥管理局.中華本草(第7冊(cè))[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1998：389.

[4] 李宗友,倪慕云.野甘草的化學(xué)、藥理[J].國外醫(yī)學(xué):中醫(yī)中藥分冊(cè),1994,16(2)：11.

[5] 姚亮,黃健軍.冰糖草揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(5)：101-103.

[6] 馬雯芳,鄧慧連,蔡毅,等.壯藥冰糖草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究[J].廣西中醫(yī)藥,2012,35(4)：51-53.

[7] 付煜榮,陳桂敏.景天三中七總酚酸提取條件及含量分析研究[J].河北北方學(xué)院學(xué)報(bào),2005,21(6)：25-27.

Determination of Total Phenolic Acid inScopariadulcis

CHEN Li-zhen AI Zhao-hui CAI Lan-jie LI Juan ZHAI Rui-rui FU Yu-rong

Department of Pharmacy, Hainan Medical College, Haikou 571199, Hainan, P. R. China

Objective To establish the methods for detection of total phenolic acid inScopariadulcis. Methods Total phenolic acid was analyzed by spectrophotometry at 720nm. Gallic acid as a reference, the colour reaction agent was the mixture solution of 0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe(CN)6](1∶0.9). Results The linear correlation coefficient of total phenolic acid was 0.9995. The precisions were less than 0.99%; the average recovery was 99.4% with RSD of less 2.31%. Conclusion The method was proved to be fast, simple, accurate and reliable for the quality control of gallic acid and total phenolic acid in Scoparia dulcis.

Scopariadulcis；Total Phenolic Acid；Quantitative method；Spectrophotometry

R284.1

A

1007-8517(2015)10-0010-02

2015.02.25)