郝志香 劉海林

(河南省新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453003)

2015年9 ～10月，河南省新鄉(xiāng)市某羊場(chǎng)所養(yǎng)山羊個(gè)別羊只皮膚上出現(xiàn)膿腫疙瘩，一個(gè)多月后，發(fā)病情況并沒有好轉(zhuǎn)，而其他羊只陸續(xù)被感染，隨后經(jīng)我中心技術(shù)人員現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室診斷確診為鏈球菌感染。由于即時(shí)采取了綜合的治療和防控措施，羊化膿性鏈球菌病得到了有效控制，降低了經(jīng)濟(jì)損失，現(xiàn)將具體情況報(bào)告如下：

1 發(fā)病情況

該羊場(chǎng)共養(yǎng)殖有80只山羊，起初只有個(gè)別羊只發(fā)病，后陸續(xù)感染，發(fā)病初期病羊有一過性精神不好，食欲下降，體溫41℃，3天后恢復(fù)正常，所以養(yǎng)殖戶沒有進(jìn)行治療，半月后發(fā)現(xiàn)羊只精神沉郁，食欲減退，逐漸消瘦，個(gè)別羊頸部和腹部開始出現(xiàn)玉米粒大小疙瘩，而且疙瘩越來越大，最后腫大到拳頭大小，用刀片刺破后流出乳白色濃汁，病羊眼結(jié)膜潮紅，鼻孔又少量膿性鼻涕，無羊只死亡。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷

2.1 直接染色鏡檢

無菌操作取病變處濃汁直接涂片，用革蘭氏染色方法進(jìn)行染色后直接顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)視野中有2個(gè)或3個(gè)藍(lán)紫色圓形球菌成線狀排列，視野中始終未見其他細(xì)菌。

2.2 細(xì)菌培養(yǎng)

將濃汁經(jīng)滅菌生理鹽水稀釋后分別接種普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和鮮血瓊脂平板，進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)。24小時(shí)觀察是，只在劃過線的地方出現(xiàn)灰白色劃線痕跡，沒有見明顯菌落，48小時(shí)觀察，發(fā)現(xiàn)在劃線痕跡附近長(zhǎng)出細(xì)小、灰白色、表面光滑、邊緣整齊的菌落，菌落大小為0.3mm左右，在血瓊脂上菌落多于普通瓊脂，厭氧培養(yǎng)長(zhǎng)出的菌落多于通培養(yǎng)，但培養(yǎng)出的細(xì)菌沒有在血瓊脂上產(chǎn)生溶血現(xiàn)象。

2.3 生化鑒定

分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不分解菊糖、果糖、半乳糖、密二糖、赤蘚醇、衛(wèi)矛醇、山梨醇，不被膽汁溶解，觸酶試驗(yàn)陰性，最后認(rèn)定為鏈球菌。

2.4 PCR檢測(cè)

圖1 PCR鑒定鏈球菌

用接種環(huán)刮取部分菌落放于裝有1mL滅菌生理鹽水的EP管中按照常規(guī)DNA提取步驟進(jìn)行操作，然后進(jìn)行擴(kuò)增：94℃5 min后，94℃45s，56℃45s，72℃45s循環(huán)35次，最后72℃延伸10min。試劑購(gòu)自河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心。電泳后用凝膠成像系統(tǒng)觀察（江蘇捷達(dá)）。結(jié)果顯示在Marker2000標(biāo)示的500bp到750bp之間出現(xiàn)了一條亮帶，說明菌液中含有鏈球菌。

3 藥敏試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)采用紙片法，藥敏片購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司，細(xì)菌接種量和具體操作方法參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）規(guī)定的Kirby-Bauer紙片擴(kuò)散法敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，結(jié)果判定參考杭州天和產(chǎn)品使用說明書提供的標(biāo)準(zhǔn)判定，具體分離株藥敏試驗(yàn)結(jié)果見表1。該株鏈球菌對(duì)大部分青霉素和喹諾酮類藥物敏感，對(duì)少部分青霉素類耐藥，對(duì)四環(huán)素類和林克酰胺類以及大部分頭孢類藥物耐藥，其中喹諾酮類藥物并不能完全殺死分離株細(xì)菌，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果結(jié)合實(shí)際治療方法宜選用青霉素G和頭孢噻吩進(jìn)行治療。

表1.分離株藥敏試驗(yàn)結(jié)果

4 治療

將膿包用滅菌手術(shù)刀縱向劃開小口擠出濃汁，用3%雙氧水對(duì)皮膚下的膿包進(jìn)行沖洗，邊沖洗邊向外擠壓液體，然后用滅菌生理鹽水再次沖洗，最后根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，用青霉素G敷于膿包內(nèi)，同時(shí)用頭孢噻吩肌注，控制全身感染。其他健康羊用阿莫西林飲水3-5天，然后對(duì)臨床健康羊進(jìn)行鏈球菌疫苗免疫，對(duì)羊圈和飲水用具等進(jìn)行徹底清洗消毒。

5 討論

從患病山羊病變濃汁分離出的病菌，根據(jù)發(fā)病情況，鏡檢結(jié)果、培養(yǎng)特性、生化試驗(yàn)和PCR等確定為化膿性鏈球菌。該病發(fā)生后使用青霉素G和頭孢噻吩聯(lián)合用藥病情很快得到控制。藥敏試驗(yàn)表明，該病原菌對(duì)部分常規(guī)藥物敏感，不過對(duì)部分常規(guī)藥物已經(jīng)產(chǎn)生耐藥性。

另外該場(chǎng)之所以會(huì)發(fā)生鏈球菌感染，主要是因?yàn)椋?.當(dāng)?shù)匮虻娘曫B(yǎng)量不大，大部分養(yǎng)羊戶對(duì)疫苗防疫沒有清醒的認(rèn)識(shí)，往往防疫三聯(lián)四防后就認(rèn)為萬事大吉；2.飼養(yǎng)條件差，冬春季比較寒冷，沒有做好保暖防寒的措施，圈舍比較潮濕；3.沒有嚴(yán)格的消毒和管理措施，從而導(dǎo)致病菌滋生，時(shí)常引起疾病的發(fā)生。今后，當(dāng)?shù)仞B(yǎng)羊戶應(yīng)當(dāng)更加科學(xué)的進(jìn)行羊的飼養(yǎng)管理，提高飼養(yǎng)條件，加強(qiáng)免疫和消毒工作，這樣才能減少疫病發(fā)生頻率，降低養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)，獲得更大的利潤(rùn)空間。