謝美華，宋信信，賈 丹，包劉媛，楊海艷*

(1.楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,云南 楚雄 675000;2.云南省高校應(yīng)用生物學(xué)重點實驗室,云南 楚雄 675000)

平菇粗多糖提取方法及抗氧化活力的研究*

謝美華1，2，宋信信2，賈 丹2，包劉媛1，楊海艷1，2*

(1.楚雄師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,云南 楚雄 675000;2.云南省高校應(yīng)用生物學(xué)重點實驗室,云南 楚雄 675000)

采用水提法,通過單因素和正交試驗，對提平菇粗多糖的最佳方法進行了篩選，并采用DPPH法對其活力進行了測定。結(jié)果表明：提取平菇粗多糖最佳方法為微波法。微波6min、料液比1∶45，提取次數(shù)2次，粗多糖的得率為155.05mg/g。當(dāng)平菇粗多糖溶液濃度為2.25 mg/mL時，抗氧化活性為92.49%，且提取液中粗多糖的含量與抗氧化活性成正比。

平菇;粗多糖;抗氧化活性;提取方法

平菇(Pleurotusostreatus)，學(xué)名側(cè)耳,屬傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬的一類外生菌根菌，目前已在全世界范圍內(nèi)廣泛人工栽培。平菇含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，平菇中的多糖對癌細(xì)胞具有很強的抑制作用，能增強機體的免疫功能[1]，還具有明顯的降血糖、降血脂、抗衰老、護肝等作用[2-3]。有研究表明，每100 g平菇干品中含有多糖類57.6～81.8mg，其是獲得多糖的好材料[4]。如何高效地提取平菇中的多糖用于藥用資源的開發(fā)，使平菇這一資源更好的開發(fā)的利用呢？為此，本研究采用單因素和正交試驗法優(yōu)選平菇多糖提取工藝，并利用DPPH法(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)對其多糖活性進行了測定，以期能找出一種高效的提取平菇多糖的方法。

1.材料與方法

1.1材料

1.1.1材料 平菇，于2013年9月購買自云南省楚雄市綠農(nóng)食用菌公司。

1.1.2主要試劑與儀器

DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，日本進口原裝TCI，購買自上海如吉生物科技發(fā)展有限公司)。

紫外可見分光光度計(上海譜元)，離心機(美國Thermo)，水浴鍋(金壇市晶玻實驗儀器廠)，電子天平(奧豪斯)，微波爐(格蘭仕)，小型植物粉碎機(長沙市常宏制藥機械設(shè)備廠)，電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海躍進醫(yī)療器械廠)。

1.2方法

1.2.1材料的預(yù)處理

將采集來的平菇菌子實體洗凈，用蒸餾水沖洗，切片，放入干燥箱中，將干燥好的平菇放入粉碎機中粉碎過40目篩。

1.2.2提取平菇粗多糖方法的篩選

稱取三份0.5g的平菇菌子實體粉末→以水為提取劑，固定料液比1∶20(g/mL)。分別采用微波5min、熱水浸提2h、超聲波20min三種提取方法→離心取上清液→加活性炭去色素→抽濾后取濾液→sevage法除蛋白(加入氯仿∶正丁醇=4∶1)→離心(取上層) →平菇菌粗多糖。每個處理設(shè)三個重復(fù)。

1.2.3正交試驗優(yōu)選最佳提取工藝

通過1.2.2的篩選，選出最佳的提取方法。然后采用L9(33-)正交設(shè)計進行正交，研究不同的微波時間、料液比和提取次數(shù)三個因素對平菇菌粗多糖提取率的影響，因素與水平設(shè)計見表1。每個處理設(shè)三個重復(fù)試驗。

表1 因素與水平

1.2.4數(shù)據(jù)測量

1.2.4.1平菇菌粗多糖的測定，采用硫酸-蒽酮比色法[5]

1.2.4.2繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

以葡萄糖濃度X為橫坐標(biāo)(μg/ml)、吸光度Y為縱坐標(biāo)，繪制葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行線性回歸。

1.3不同濃度的平菇的抗氧化能力測定，DPPH 法[6]

將Vc配成0.01，0.03，0.05，0.07，0.09，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mmol/L的濃液作為對照試驗。所有測定重復(fù)操作3次，取平均值。

表2 DPPH試驗加樣表

1.4數(shù)據(jù)處理

采用SPSS Statistics 16.0進行數(shù)據(jù)分析，Excel作圖。

2.結(jié)果與分析

2.1單因素法篩選提取平菇粗多糖最佳方法

分別用微波法、熱水浸提法、超聲波法提取平菇粗多糖，試驗結(jié)果表明，提取效率最高的是微波法，其次是超聲波提取法，最差的是熱水浸提法(表3)。

表3 三種提取方法提取平菇多糖的結(jié)果比較

2.2正交試驗結(jié)果

2.2.1根據(jù)2.1單因素方法篩選結(jié)果，采用熱水浸提法進行正交試驗，結(jié)果如表4所示，根據(jù)極差判斷，3個因素對平菇的多糖得率的影響大小依次為料液比>提取次數(shù)>微波時間。通過對試驗數(shù)據(jù)進行直觀分析，最佳提取方法是A3B2C2，即微波6min、料液比1∶45，提取次數(shù)2次。從表5的方差分析可以看出，在本試驗所研究的范圍內(nèi),料液比對提取平菇粗多糖得率有極顯著地影響，料液比為1∶30 時多糖的提取率(Mean±SE)為126.62±7.00，料液比為1∶45 時多糖的提取率為142.93±4.41，料液比為1∶60 時多糖的提取率為111.03±4.69。微波時間和提取次數(shù)對粗多糖得率沒有明顯的影響。

表4 正交試驗結(jié)果

表5 平菇提取粗多糖正交試驗方差分析表

2.2.2最佳提取條件的驗證試驗:為了驗證正交試驗優(yōu)選的平菇粗多糖最佳提取工藝的穩(wěn)定性，每組稱取原料粉0.5g，做3組平行實驗，每組3個重復(fù)。試驗結(jié)果表明，試驗工藝重復(fù)性較好，粗多糖得率平均為157.21 ±7.21(mg/g)，試驗的重復(fù)性較好。

2.3平菇粗多糖的活力測定

試驗結(jié)果表明，隨著平菇粗多糖濃度的提高，抗氧化抑制率也隨之提高。平菇粗多糖質(zhì)量濃度為2.25 mg/mL時的抑制率與Vc質(zhì)量濃度為0.035mg/mL相當(dāng)，說明平菇粗多糖存在一定的抗氧化活性(見表6)。

表6 平菇粗多糖與Vc抗氧化抑制率比較

3.討論與結(jié)論

平菇在世界范圍內(nèi)已廣泛栽培，作為一種人工可栽培的食用菌，與野生食用菌相比，它有生長季節(jié)不受季節(jié)控制，易培養(yǎng)和價格相對低廉的優(yōu)點。目前平菇主要被加工成平菇罐頭、平菇脯、油炸平菇、平菇蜜餞等產(chǎn)品，這些產(chǎn)品的科技含量較低，依然處于產(chǎn)業(yè)鏈的最低端。隨著近年來食用菌保健功能的進一步開發(fā)，以食用菌多糖為主要原料的藥品、保健品等精深加工產(chǎn)品將有廣闊的發(fā)展空間。本課題的研究結(jié)果表明，微波法可作為平菇多糖的提取工藝，其操作簡單，成本較低；平菇多糖具有一定體外抗氧化活性。

[1]周國英，蘭貴紅，何小燕.食用菌多糖研究開發(fā)與進展[J].實用預(yù)防醫(yī)學(xué),2004,(1):55—56.

[2] Kathatun K，Mahtab H，Khanam PA，etal.Oyster Pleumtus ostreatusreduced blood glucose and cholesterol in diabetic subjects[J].MymensinghMedJ,2007,(16):94—99．

[3]Yang B K，Kim D H，Jeong S C，etal.Hypoglycemic effect of a Lentinus edodes exo-polymer produced from a submerged mycelial culture[J]．BiosciBiotechnelBiochem,2002,66(5):937—942．

[4]張敏,陳瑞戰(zhàn),陳瑞平,等.平菇多糖提取方法的比較[J].吉林大學(xué)學(xué)報(理學(xué)版),2011,49(5):1141—1149.

[5]陳楊瓊,伍春蓮,侯怡鈴,等.松乳菇多糖含量的苯酚硫酸法檢測研究[J].西華師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2012,33(2):135—138.

[6]倪國柱，溫琳豫，王健，等.DPPH法測定新疆磨合煙的抗氧化活性[J]．廣州化工，2012，4(22)：104—106.

(責(zé)任編輯 徐成東)

Study on Crude Polysaccharide Extraction Method and Antioxidant Capacity of Pleurotus Astreatus

XIE Meihua1，2, SONG Xinxin2, JIA Dan2, BAO Liuyuan2& YANG Haiyan1，2

(1.SchoolofChemistryandLifeScience,ChuxiongNormalUniversity,Chuxiong, 675000,YunnanProvince;2.KeyUniversityAppliedBiologyLaboratoryofYunnan,Chuxiong, 675000,YunnanProvince)

Take water extraction method, screening the best condition for extract crude polysaccharide inPleurotusostreatuswas determine by single factor and orthogonal test. DPPH assay method was used to determine the antioxidant activities of extraction. The results showed that: (1)The preferred way for extraction crude polysaccharide ofPleurotusostreatuswas microwave method. The best condition for extraction crude polysaccharide ofPleurotusostreatuswas：Microwave extraction 6min, the ratio of material to liquid was 1:45,extraction 2 times,the extraction yield was 155.05mg/g.(2)The antioxidant properties was 92.49% when solution concentration of crude polysaccharide inPleurotusostreatuswas 2.25mg/mL，and the content of crude polysaccharide was directly proportional to the antioxidant activities．

Pleurotusostreatus; crude polysaccharide; antioxidant capacity; extraction method

2015 - 03 - 12

謝美華(1981—)，女，實驗師，研究方向為植物病理學(xué)與微生物。

楊海艷(1979—)，女，高級實驗師，博士，主要從事植物病理學(xué)研究。

TQ281

A

1671 - 7406(2015)06 - 0018 - 04