水蛭的化學(xué)成分與藥理作用

郭曉慶,孫佳明,張輝*

(長春中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥與生物工程研發(fā)中心，長春 130117)

摘要：水蛭是我國傳統(tǒng)的活血化瘀藥之一，臨床多用于血滯經(jīng)閉、微痕積聚、跌打損傷等癥。水蛭的炮制方法《傷寒論》中有所記載，大致有凈制、切、加輔料和不加輔料制幾大類，十幾種炮制方法；現(xiàn)代對水蛭的炮制大多采用酒制、滑石粉燙、砂燙等方法。水蛭的主要成分為大分子類化合物，如水蛭素、肝素、組織胺、吻蛭素、氨基酸等。水蛭中也含有糖脂類、蝶啶類、甾體類和羧酸酯類等多種小分子類物質(zhì)。水蛭具有抗細(xì)胞凋亡，抗腫瘤，抗凝、抗血栓，抗炎、抗纖維化等藥理作用。

關(guān)鍵詞：水蛭；水蛭素；肝素；滑石粉燙；砂燙

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.01.014

中圖分類號：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)01-0047-04

基金項(xiàng)目:國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2012BAI29B00)；國家中醫(yī)藥行業(yè)專項(xiàng)課題(2015468002-2)。

作者簡介:郭曉慶(1989-)，女，碩士研究生，主要從事中藥學(xué)研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯:張瑞彬2014-12-10)

*通信作者:張輝，電話-(0431)86172080,電子信箱-zhanghui_8080@163.com

Review of pharmacological effects and chemical compounds of leech

GUO Xiaoqing,SUN Jiaming,ZHANG Hui*

(Development Center of Traditional Chinese Medicine and Bioengineering,Changchun University of

Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

Abstract：Leech is one of Chinese herbs for activating blood circulation.Leech is clinically used for the treatment of blood stasis,amenorrhea,minor bruising and so on.According to the processing methods of leech recorded in the Discourse on Cold Damage Disorders (Shang-Han Lun),there are more than ten kinds of processing methods,such as cleaning,cutting,adding adjuvant material,without adjuvant material,etc.However,modern processing methods of leech are wine processing,scalded with talc powder,heated with sand and so on.The main compounds of leech are macromolecular compounds,like hirudin,heparin,histamine,hementin,amino acids,etc.Meanwhile,leech also contains small molecular compounds like glycolipids,pteridine,steroids,carboxylic acid esters,etc.Leech has pharmacological effects,such as anti-apoptosis,anti-neoplastic,anti-freeing,anti-thrombus,anti-inflammatory and anti-fibrosis.

Key words:leech;hirudin;heparin;scalded with talc powder;heated with sand

水蛭，又名螞璜，為環(huán)節(jié)動(dòng)物門水蛭科動(dòng)物螞璜(WhitmaniapigraWhitman)、柳葉螞璜(WhitmaniaacranulataWhitman)及水蛭(HirudonipponicaWhitman)的干燥體。據(jù)對我國樟樹等地區(qū)的藥用水蛭進(jìn)行鑒別,得出95%以上的藥用水蛭為螞蟥。自古以來中醫(yī)認(rèn)為水蛭具有破血通經(jīng)，逐瘀消的功效。歷代本草亦多有記載。水蛭是一味安全、有效、藥性平和的傳統(tǒng)中藥。本文將從炮制方法，化學(xué)成分，藥理作用等方面作以歸納。

1炮制研究

1.1古代炮制方法自古以來對動(dòng)物藥的炮制大多是為了去除腥味，易于儲藏，易于粉碎等。經(jīng)過傳統(tǒng)的炮制后可以起到減少毒副作用，增強(qiáng)功效，去除難聞氣味，有利于調(diào)劑制劑等作用。水蛭的炮制方法早在《傷寒論》中就有所記載，大致有凈制、切、加輔料和不加輔料制幾大類，十幾種炮制方法。其中還記載了“暖水洗去腥”的凈制方法，以及《金匱玉函經(jīng)》中記載的“熬去子杵碎”的水火共制的方法。《太平圣惠方》也記載了“微炒，炒令微黃等炒制法”和“微煨令黃”的煨制法[1]等。古方中還有水浸、洗去腥、去血子等炮制方法[2]。

1.2現(xiàn)代炮制方法

1.2.1酒制新方法曾有學(xué)者提出將凈制后的水蛭用黃酒悶透,然后用文火炒至酒盡，取出，再將其放在80 ℃的烘箱內(nèi),觀察當(dāng)其微微鼓起質(zhì)地酥脆時(shí)，將其從中取出放涼即得，進(jìn)行密封保存[3]。高攀峰等[4]也提出用黃酒悶水蛭，并說明炮制可起到矯味矯臭的作用，并能使水蛭破血逐瘀的功效加強(qiáng)，還可以增強(qiáng)對腦血管類疾病的治療作用。除黃酒悶的方法，呂文海等[5]設(shè)計(jì)出酒潤麩炒水蛭的新工藝，實(shí)驗(yàn)研究分析表明此新工藝制品優(yōu)于傳統(tǒng)的燙水蛭，其具體表現(xiàn)在溶出效果、抗凝血、抗血栓、降低血小板聚集率、改善微循環(huán)等藥效學(xué)指標(biāo)，而與生水蛭相比也有部分指標(biāo)有所提升，是一種簡單高效的新方法。

1.2.2滑石粉燙滑石粉燙為目前應(yīng)用最多最廣泛的一種炮制方法,其具體方法為將滑石粉放入鍋內(nèi)，用武火將其炒熱后，再加入切好的水蛭段，期間要不斷翻動(dòng)，當(dāng)水蛭燙至微鼓起時(shí)取出。有研究者提出生品中所含氨基酸以及人體必需氨基酸總量均比滑石粉燙制品中含量低[6]。也有學(xué)者對比了日本醫(yī)蛭炮制前后活性成分含量變化，認(rèn)為滑石粉燙水蛭使其峻烈的藥用活性成分含量降低，同時(shí)又降低了水蛭的毒性，緩和了其破血通經(jīng)之性[7]。

1.2.3砂燙砂燙炮制水蛭的具體方法為,將砂子放入鍋內(nèi)，用武火將其炒熱后加入凈水蛭，連續(xù)翻動(dòng)，將水蛭燙至鼓起，斷面為棕色時(shí)取出，將沙子篩出去，放涼即得。砂燙與滑石粉燙步驟相似，其主要區(qū)別是在溫度的控制上，砂燙的溫度較高些，對于其高溫后活性成分的研究，有學(xué)者表明燙水蛭在抗炎、降血脂等方面具有一定優(yōu)勢[8]。

1.2.4其他方法此外水蛭的現(xiàn)代炮制方法還有蜜制、焙制、醋制、油制、石灰制等,炮制對水蛭的使用及保存有重要的意義，并且在其藥用功效方面也有一定的增強(qiáng)。

2化學(xué)成分

2.1蛋白質(zhì)及多肽類大分子水蛭的主要成分為大分子類化合物，如水蛭素、肝素、組織胺、吻蛭素、氨基酸等。

2.1.1水蛭素水蛭作為活血化瘀藥，其主要活性成分為水蛭素,水蛭素是一種由66個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽，其相對分子質(zhì)量約7 000,其活性極為敏感，尤其對高溫及化學(xué)試劑。水蛭素是目前鑒定出的最強(qiáng)的凝血酶特異性抑制劑[9]。據(jù)文獻(xiàn)[10]報(bào)道水蛭素是一種特別不穩(wěn)定的多肽類成分，而且只存在于水蛭的唾液腺中，由此看來水蛭素的含量很低，有文獻(xiàn)表明目前已能用基因工程方法合成重組水蛭素。

2.1.2其他大分子類成分近年來從水蛭中分離純化得到多種多肽類成分，有學(xué)者應(yīng)用SephadexDEAE A-50陰離子交換樹脂色譜、葡聚糖G-25和 LH-20凝膠過濾色譜及反相高壓液相色譜對螞蟥干體進(jìn)行分離純化，并從中分離得到一個(gè)命名為“螞蟥多肽”的抗凝血物質(zhì)，其相對分子質(zhì)量為8 608，經(jīng)推測其結(jié)構(gòu)為63個(gè)氨基酸殘基形成的肽鏈上連接一個(gè)相對分子質(zhì)量為1 898的糖鏈[11-12]。貴艷麗等[13]利用仿生親和介質(zhì)庫進(jìn)行配體篩選和1部純化，從中得到一種命名為NLP-1的,具有很強(qiáng)抗凝血作用的新型低豐度蛋白質(zhì)，此法得到的蛋白質(zhì)提取率可達(dá)到69.2%，具有相當(dāng)高的開發(fā)研究價(jià)值。水蛭中含有17種氨基酸，其中包含的人體必需氨基酸有8種,由此看來氨基酸成分也有可能是水蛭抗凝血的主要活性成分。水蛭中的大分子類成分還有多種，有待于進(jìn)一步研究。

2.2小分子類成分水蛭中也含有糖脂類、蝶啶類、甾體類和羧酸酯類等多種小分子類物質(zhì)。目前為止研究表明水蛭中含有Fe、Mn、Zn、Co等14種微量元素。閆繼東[14]研究得出，水蛭可以治療因微量元素變化引起人體生理功能發(fā)生紊亂的疾病。荊文光等[15]將水蛭用甲醇提取，并首次從中分離鑒定出煙酸、腺苷、尿苷、苯丙氨酸、尿嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤核苷、脯氨酸、棕櫚酸、纈氨酸。黃榮清等[16]運(yùn)用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)并結(jié)合面積歸一化法得到水蛭中抗凝血活性較強(qiáng)的成分，主要為甾體和不飽和脂肪酸甲酯等。

3藥理作用

3.1抗凝、抗血栓作用翟新艷[17]通過實(shí)驗(yàn)研究表明，水蛭的提取物可以延長小鼠凝血、出血時(shí)間來說明水蛭的提取物具有抗凝作用。水蛭素同凝血酶的親和能力相當(dāng)強(qiáng)，其與凝血酶的中和可以在低溫高速環(huán)境下進(jìn)行。動(dòng)脈粥樣硬化主要是血小板聚集引起的，而凝血酶是激活血小板的重要物質(zhì)，水蛭素與凝血酶的結(jié)合剛好可以抑制血小板聚集，起到治療的目的[18]。李艷玲等[19]經(jīng)過抗凝血實(shí)驗(yàn)表明不同炮制方法不同提取液的抗凝效果不同，其采用大鼠體外活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，水蛭的乙酸乙酯層抗凝效果最好，然而正丁醇層、正己烷層也都存在著不同程度的抗凝血作用。

3.2抗腫瘤作用大量的試驗(yàn)研究表明水蛭可以通過影響腫瘤細(xì)胞的黏附穿膜能力，抑制凝血酶的作用，抑制血小板聚集等方面來體現(xiàn)其抗腫瘤作用。王杰[20]、張博[21]等利用復(fù)方水蛭素治療小鼠異體移植的W256腫瘤和接種S180瘤細(xì)胞的小鼠的研究表明，復(fù)方水蛭素可以明顯降低W256腫瘤細(xì)胞和小鼠移植瘤細(xì)胞p53、Ki267及VEGF的表達(dá)，能抑制腫瘤細(xì)胞的生長。于瑞發(fā)等[22]研究發(fā)現(xiàn)水蛭提取物對小鼠移植性腫瘤具有較強(qiáng)的抑制作用,同時(shí)能使免疫能力得到改善。方圓[23]通過研究水蛭對肝癌HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)化酶的影響得出其能抑制肝癌細(xì)胞的DNTMs表達(dá)。

3.3抗細(xì)胞凋亡作用近年來實(shí)驗(yàn)研究表明，水蛭對腦細(xì)胞、肝細(xì)胞、肺細(xì)胞等均有保護(hù)作用。呂莉等[24]觀察水蛭素對右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型的影響，研究結(jié)果提示，高劑量水蛭素具有明顯的抗腦缺血作用，且效果較銀杏葉明顯，同時(shí)對神經(jīng)元細(xì)胞凋亡具有明顯的抑制作用。陳姝等[25]的研究結(jié)果表明，水蛭桃仁煎劑可以抑制小鼠肝細(xì)胞的凋亡。王洋等[26]通過藥理實(shí)驗(yàn)表明水蛭具有抗肺細(xì)胞凋亡的作用。

3.4抗炎、抗纖維化作用鮑宗麟等[27]通過對慢性病毒性肝炎患者的臨床觀察研究得出，水蛭對慢性病毒性肝炎有很好的治療作用。孫學(xué)強(qiáng)等[28]通過對30名肝硬化患者進(jìn)行臨床觀察結(jié)果表明，水蛭有助于提高中藥復(fù)方合劑抗肝纖維化的治療效果。林建明等[29]在研究水蛭對狼瘡性腎炎患者的作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，水蛭對腎炎患者有一定的拮抗作用，改善腎功能等。楊影等[30]研究發(fā)現(xiàn)，水蛭素可以有效降低纖維細(xì)胞的增殖率。

4結(jié)語

多年來隨著對水蛭的研究不斷加深，不論是從炮制機(jī)理、化學(xué)成分還是其藥理作用、臨床應(yīng)用都獲得了顯著的成果。由于水蛭中含有多種有效成分，而且入藥歷史悠久，因此對水蛭的研究也不會停留至此，研究過程中還存在許多待解決的問題，這就需要廣大學(xué)者不斷努力，使水蛭在中藥的研究領(lǐng)域中展現(xiàn)出新的活力。

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