易潯飛 綜述，鐘秋蓉 審校(南京軍區(qū)福州總醫(yī)院全軍臨床檢驗醫(yī)學(xué)研究所，福州 350025)

?

·綜 述·

尿液中檢測循環(huán)miRNA的研究進展

易潯飛 綜述，鐘秋蓉 審校(南京軍區(qū)福州總醫(yī)院全軍臨床檢驗醫(yī)學(xué)研究所，福州 350025)

miRNA； 尿液； 生物標志物

1 尿液循環(huán)miRNA檢測的研究基礎(chǔ)

人體內(nèi)估計超過1/3的細胞轉(zhuǎn)錄組受miRNA調(diào)節(jié)，雖然數(shù)目相對不多(少于2 000種)，但在常見的組織和體液中miRNA有很高的穩(wěn)定性，miRNA表達增殖的潛力可準確輔助定量分析與分散的組織類型和疾病狀態(tài)有定位關(guān)系的miRNA，從而作為一個診斷新工具。

有研究認為外泌體是轉(zhuǎn)運miRNA的細胞結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，外泌體是納米級別的細胞單層膜結(jié)構(gòu)，可由機體多種類型細胞釋放，并廣泛分布于唾液、血漿、乳汗、尿液等體液中。外泌體可攜帶多種mRNA、miRNA、蛋白質(zhì)，參與細胞間通訊，重啟免疫系統(tǒng)，血管新生、腫瘤細胞生長等過程。在腫瘤或疾病中，這些分子都可以作為生物標志物[1]。miRNA也是重要的調(diào)節(jié)分子，涉及細胞生長全過程，如時序發(fā)育、干細胞分化和凋亡，可作為一種“腫瘤信號”[2]。

研究顯示miRNA在病理發(fā)展中會快速從組織中釋放入血，在血清、血漿、唾液和尿液中，這些胞外miRNA與腫瘤的不同病理狀態(tài)有關(guān)。Weber等[3]檢測了12種來自于不同階段懷孕婦女和不同泌尿道上皮細胞腫瘤患者的體液和尿液標本中的miRNA，應(yīng)用定量PCR對這些體液中的miRNA做廣譜分析。結(jié)果顯示miRNA在所有體液中均存在，在不同體液中構(gòu)成比明顯不同，一些高水平的miRNA在多種體液中表達相同，而一些miRNA在特定體液中富集，還觀察到不同生理狀態(tài)的尿液標本具有獨特的miRNA模式。提示使用特定miRNA水平可用作檢測和監(jiān)測不同病理生理學(xué)狀態(tài)。

細胞壞死和凋亡過程產(chǎn)生的miRNA片段會大量釋放到尿液中，且尿液在臨床上容易大量獲得，所含蛋白也比血液標本少，所以RNA預(yù)處理和后續(xù)檢測時蛋白干擾也較低。19～25個核苷酸長度的miRNA可對抗核酶的降解而更加穩(wěn)定，敏感性和特異性上都優(yōu)于現(xiàn)有標志物[4]。

2 尿液循環(huán)miRNA與泌尿系統(tǒng)腫瘤

miRNA已經(jīng)證實與一些腫瘤細胞增殖有關(guān)，出現(xiàn)一類新級別的癌基因或是抑癌基因時多表現(xiàn)為異常表達。通過檢測miRNA可確定腫瘤的分化程度，特別是對低分化腫瘤分期的準確性高于以往的mRNA分期[5]。

目前膀胱癌的診斷“金標準”是膀胱鏡檢，但具有一定損傷和相對昂貴，而普通的尿液鏡檢對低分化膀胱癌的敏感性較差。Yamada等[6]結(jié)合miR-96、miR-183與尿液鏡檢對膀胱癌患者標本進行了隊列研究，除發(fā)現(xiàn)miRNA上調(diào)，兩者聯(lián)合檢測從78例膀胱癌中診斷出61例，敏感性從43.9%提升到78.2%。還發(fā)現(xiàn)miR-96 和miR-183 表達量增加與腫瘤進展級別和病理分期同步，在術(shù)后尿液中兩者表達水平降低，提示這兩種miRNA可作為膀胱癌的標志物，miR-96結(jié)合尿液鏡檢也可成為一個很好的診斷指標。另外應(yīng)用數(shù)學(xué)預(yù)測模型優(yōu)化尿液miRNA的結(jié)果分析也顯示了比鏡檢顯著改進的診斷正確度[2]。另外常規(guī)保存的尿液細胞涂片也能用于miRNA表達譜分析，Simonato等[7]使用qRT-PCR在常規(guī)尿液細胞涂片中分析miR-145、miR-20所選的涂片標本均可抽提到滿意的總RNA，而20 ng總RNA就可用于miRNA表達譜分析。結(jié)果提示，膀胱癌患者標本中的miR-145、miR-205顯著下調(diào)。

檢測尿液中RNA類的腫瘤標志物還可以用于診斷其他泌尿系統(tǒng)的實體腫瘤，而且這類循環(huán)miRNA的獨特表達模式與特定的疾病相關(guān)，特別是早期階段，其高特異性和敏感性的潛能可用于腫瘤分期和早期預(yù)測[8]。Bryant等[9]使用含有742個miRNA的Exiqon qRT-PCR芯片分析了78例前列腺癌患者和28例健康對照血清標本，確定了12個表達量差異的miRNA。進而檢測135份健康人與前列癌患者尿液標本中5個選定的miRNA，發(fā)現(xiàn)腫瘤患者尿液中miR-107和miR-574-3p水平顯著高于健康對照，均可診斷出前列腺癌患者，并且準確性高于檢測尿液前列腺特異性抗原(PSA)。Hanke等[10]建立了一種對尿液標本中小相對分子質(zhì)量的RNA進行預(yù)處理和分子檢測技術(shù)，用于非侵入性的診斷泌尿道上皮膀胱癌。提取了來源于膀胱癌患者(低分化組和高分化組)和健康志愿者尿液標本中的小相對分子質(zhì)量RNA，使用定量RT-PCR檢測了157種miRNA，發(fā)現(xiàn)利用miRNA-126/miRNA-152的比值來診斷膀胱癌的特異性為82%，敏感性為72%，ROC曲線下面積為0.768(95%CI：0.605～0.931)，具有相當(dāng)高的準確性。

盡管在尿液中無創(chuàng)檢測RNA腫瘤標志物的優(yōu)點很多，但是尿液中不僅含有腫瘤細胞，也有凋亡和壞死細胞，如良性剝落的泌尿道上皮細胞、白細胞，還有非細胞來源的RNA，都可能干擾RNA的檢測。早期研究中，在尿液中檢測組織來源的標志物的診斷性能弱于直接檢測實體腫瘤。Hanke等[11]研究了新方法來減少尿液標本的影響因素，可最小化檢測誤差。通過在尿細胞顆粒,細胞降解碎片和尿液中分別提取RNA，用qRT-PCR定量檢測。使用1個外部RNA標準品標準化每一個步驟，來平衡尿液標本中背景因素的干擾。比較了尿液標本中4個預(yù)設(shè)的RNA腫瘤標志物和5個已確認的組織來源RNA組織標志物的表達情況，結(jié)果表明ETS2 mRNA/uPA mRNA 的比值用于診斷膀胱癌的特異性為100%，敏感性為75.4%，ROC曲線下面積為0.929(95%CI：0.882～0.976),可作為一種潛在的膀胱癌診斷標志物。

3.2 顆粒粒度測定方法 本研究采用BT-9300H型激光粒度分布儀分析系統(tǒng)對顆粒進行粒度測定，利用測定激光束穿透顆?；鞈乙旱纳⑸涔烙嫵鲱w粒的平均體積，如假設(shè)顆粒為標準球體，則可計算出顆粒直徑。和傳統(tǒng)光鏡或電鏡測量方法相比，具有快速，誤差小，精確度高，操作簡便，可定量分析的優(yōu)勢，尤其適用于大樣本的測定。激光粒度分析儀的不足之處在于：忽略了顆粒的形狀，可能會對顆粒的計算結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。

檢測尿液miRNA還可用于泌尿系統(tǒng)腫瘤的病理機制研究，Shimizu等[12]使用芯片評估了腫瘤細胞株、原癌組織、術(shù)前和術(shù)后尿液標本中miRNA基因甲基化。提示膀胱癌細胞中沉默后miRNA的異位表達可以抑制其生長和侵襲性，提示miRNA基因的后天沉默可能與腫瘤進展有關(guān)，且miRNA基因的甲基化可作為腫瘤檢測的生物標志物。

3 尿液循環(huán)miRNA與腎臟疾病

體內(nèi)的外泌體和胞外液囊的循環(huán)水平可影響腎病的進展。液囊可作為細胞通訊的胞外載體，運輸功能性分子(如mRNA、miRNA等)到受體細胞。外泌體和外泌體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)可在疾病發(fā)生中起效，如動脈粥樣硬化、腎病，成為診斷和治療腎病的潛在標志物[13]。在與之相關(guān)的miRNA與腎病的相關(guān)研究中，發(fā)現(xiàn)其表達差異出現(xiàn)于腎與其他器官、或是腎臟不同部位。而且miRNA還在足突狀細胞的生長中起重要作用，如糖尿病腎病、多囊性腎病。尤其注意的是，在小鼠模型中發(fā)現(xiàn)足突細胞缺失特有的Dicer(miRNA起源中的1個關(guān)鍵酶)，可導(dǎo)致蛋白尿和嚴重腎損傷。

腎活檢是腎臟疾病診斷的金標準，但需入院操作，且有3%并發(fā)癥的風(fēng)險，定量檢測尿液miRNA提供了慢性腎病標志物的一個可選途徑[14]。Wang等[15]分析了IgA腎病患者尿沉渣標本中的miRNA表達，發(fā)現(xiàn)尿液中miR-200a、miR-200b和miR-429的表達量下降，與尿蛋白陽性相關(guān)。說明其可用于評估IgA腎病，上調(diào)程度與腎病的臨床與組織嚴重性相關(guān)[16]。Wang等[17]使用腎缺血再灌注老鼠和STZ誘導(dǎo)腎損傷老鼠作為急、慢性腎損傷模型，應(yīng)用TaqMan探針的qRT-PCR方法評估鼠尿液、血清和腎組織中miRNA的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)腎組織中富含的miRNA-10a(miR-10a)和miRNA-30d(miR-30d)很容易在尿液中檢測到，且其水平與腎損傷的程度明確相關(guān)。相反這一變化并沒在腎損傷后的鼠血清中發(fā)現(xiàn)。

目前常用的早期診斷腎損傷指標，如尿蛋白定量，預(yù)測價值有限。Wang等[17]使用小鼠的急慢性腎損傷模型，評估小鼠的尿液、血清和腎組織中miRNA的變化情況，結(jié)果顯示腎富含的 miR-10a和miR-30d較易在鼠尿液中檢測到，而且其水平與兩種模型的腎損傷程度陽性相關(guān)，相反，腎損傷的小鼠血清中沒有觀察到相同的改變。提示尿液miR-10a和miR-30d用于檢測腎損傷提供了一種非侵入、敏感、特異和潛在的高通量方法。Luo等[18]探討了兒童先天性腎病綜合征(NS)患者的血清、尿液miRNA作為標志物的臨床價值，先用TaqMan低密度芯片篩查，再用定量RT-PCR確認血清標本中的表達差異miRNA，再收集患者尿液標本用于檢測篩選出的miRNA。發(fā)現(xiàn)血清中5種miRNA水平和尿液中miR-30a-5p水平顯著降低與臨床治療后病情改善相關(guān)。

糖尿病腎病機制研究發(fā)現(xiàn)高糖環(huán)境中miRNA(miR-192)可作為激活轉(zhuǎn)化生長因子β的效應(yīng)分子[19]。Argyropoulos等[20]觀察了糖尿病腎病不同階段患者尿液中的miRNA表達譜差異，miRNA表達譜覆蓋了生長因子信號通路和已知糖尿病腎病腎纖維化通路。這些miRNA表達組合將可推斷腎臟病時分子信號的改變，可用于糖尿病腎病的早期診斷、風(fēng)險分級的標志物。

4 尿液循環(huán)miRNA與腎移植后的排斥監(jiān)測

研究表明尿液細胞和外周血細胞中miRNA水平與急性腎移植排斥相關(guān)，可作為腎移植后急性排斥(簡稱急排)結(jié)局的預(yù)測因子。有研究應(yīng)用這類非侵入性生物標志物的檢測來預(yù)測腎移植后排斥，通過監(jiān)測miRNA表達來預(yù)測腎移植后的狀態(tài)，減少使用侵入性活檢，預(yù)測急排的進展和腎移植后的慢性病變，提前使用保護移植腎功能的治療方案，促進受者個性化的免疫抑制治療[21]。Lorenzen等[22]評估了穩(wěn)定期腎移植患者和急排期腎移植患者的尿液中miRNA，使用定量PCR方法檢測了急排患者、無排斥移植患者、穩(wěn)定移植患者伴泌尿系感染患者。急排患者相比健康對照發(fā)現(xiàn)miR-10b和miR-210下調(diào)，miR-10a上調(diào)，而急排患者相比穩(wěn)定移植伴泌尿系感染患者僅miR-210有差別，移植一年后低miR-210水平患者可伴隨出現(xiàn)GFR的降低。結(jié)果表明這些選定的miRNAs在急排患者的尿液中發(fā)生大幅改變，miR-210水平可確認腎移植急排的發(fā)生，并預(yù)測移植后的腎功能，可作為一個全新的急性腎排斥的生物標志物。

miRNA還參與了移植物免疫反應(yīng)中引起移植器官的排斥作用，其基因特異轉(zhuǎn)錄沉默可以調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的通路中如先天免疫的發(fā)展，炎性反應(yīng)、T細胞、B細胞分化和移植物排斥的不同階段，miRNA還在移植后綜合征發(fā)展中起作用，如纖維化、肝硬化、致癌作用，常易引起移植器官的失敗或不良結(jié)局，最近組織中定量檢測miRNA的方法，以及在血清和尿液中檢測的改進，可應(yīng)用分析移植后如排斥、復(fù)發(fā)、腫瘤等[23]。因miRNA可在尿液中直接檢測，所以可作為一種新的腎移植急排結(jié)局的預(yù)測因子。

5 尿液循環(huán)miRNA與心臟疾病

各種體液中(血清、血漿、唾液、尿液、母乳、眼淚)，大約90%的胞外miRNA都與蛋白結(jié)合(如Ago2、HDL和其他RNA結(jié)合蛋白)，約10%被小型膜表面分子包裝(外泌體、凋亡小體)，因此這類胞外miRNA可介導(dǎo)細胞間通訊，最近的研究表明其水平和構(gòu)成疾病、損傷狀態(tài)有關(guān)，可成為心血管疾病的非侵入性生物標志物[24]。已有研究評估心肌梗死患者的血漿心肌特異miRNAs水平，同時在尿液標本中檢測，探討其與肌鈣蛋白、心肌功能的相關(guān)性[25]。

研究顯示尿液中miR-1是急性心肌梗死的標志物，小鼠試驗中24 h即可有50倍的升高，而另一miR-208也僅能在心肌梗死后尿液中檢出，并初步證實此類miRNA是經(jīng)由相關(guān)外泌體轉(zhuǎn)運而發(fā)揮功能[26]。Duan等[27]也觀察了ST段升高的急性心肌梗死(ST-EMI)患者尿液中的心肌特異miRNA(miR-1)表達水平的改變，同時測定血清中cTnI、CK-MB的水平。結(jié)果心肌梗死患者血清cTnI、CK-MB和尿液miR-1均明顯高于健康對照，且miR-1水平與CK-MB、cTnI 水平顯著相關(guān)。

6 尿液循環(huán)miRNA與自身免疫性疾病

近期的研究顯示miRNA在自身免疫性疾病的發(fā)病機制中起了重要作用，miRNA參與調(diào)節(jié)先天和獲得性免疫反應(yīng)，包括免疫細胞的分化和進展，如調(diào)節(jié)性T細胞穩(wěn)定和功能化，這類調(diào)節(jié)miRNA的裂解能導(dǎo)致自身免疫性疾病。

Wang等[28]檢測了系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者血液和尿液上清液中的miR-146a和miR-155，相比對照組，血清中miR-146a和miR-155降低，尿液中miR-146a水平增高，SLE患者的腎小球濾過率(GFR)與血清中miR-146a、miR-155(r=0.384,P=0.014)呈正相關(guān)。經(jīng)鈣三醇治療6個月后，SLE患者血清miR-146a水平顯著增加。后期又在SLE患者血清和尿液中檢測了多種miRNA(miR-200系、miR-205和miR-192)水平，尿液中miR-200a、miR-200c、miR-141、miR-429和miR-192均低于對照組，SLE疾病活動指數(shù)(SLEDAI)與血清中miR-200a呈負相關(guān)，而尿液miRNA水平與其他臨床參數(shù)沒有顯著的關(guān)系。說明尿液miRNA與血清中水平呈不同變化，兩者間無關(guān)聯(lián)性。多數(shù)尿沉渣中miRNA來自腎實質(zhì)細胞產(chǎn)生，miRNA可參與SLE的病理過程，建議對其進一步研究[29]。

7 尿液循環(huán)miRNA檢測技術(shù)的進展

尿液中含有的循環(huán)miRNA可用為一種生物標志物，用于早期診斷、預(yù)測臨床結(jié)局和療效監(jiān)測，然而水平相對較低，為檢測這些低水平的分子，必須在初始階段對其進行特殊的富集。分析這類核酸基質(zhì)的標志物目前多利用PCR或改良PCR，并與基因芯片等組合使用以提高敏感性和特異性[30]。

體液中特異miRNAs的存在模式提示其有希望成為替代標志物，但分析尿液中的miRNAs仍是一個挑戰(zhàn)。難點包括從很有限的生物標本來源中恢復(fù)核苷酸、標準化策略、相關(guān)技術(shù)的性能驗證等，現(xiàn)有大多數(shù)的研究僅引入較少患者隊列限制了其有效性和實際應(yīng)用。轉(zhuǎn)錄miRNA生物標志物成為臨床常規(guī)診斷項目，還依賴于未來體液miRNAs能夠?qū)崿F(xiàn)快速、高效、標準化[5]。

為促進miRNA標志物的發(fā)現(xiàn)和臨床應(yīng)用，已出現(xiàn)一些新的技術(shù)平臺。如基于基因組鎖核酸(LNA)基礎(chǔ)的miRNA-qPCR技術(shù),具有很高的敏感性和穩(wěn)定性，直接將重要臨床來源的miRNA進行高通量復(fù)制，而不需提前擴增。通過上千份生物液體標本(血清、血漿、尿液)驗證，應(yīng)用質(zhì)控系統(tǒng)，減少分析前和分析變量偏倚[31]。還有研究使用等速電泳來分離和敏感檢測未標記分子(DNA、rRNA、miRNA)，簡單操作就能百萬倍預(yù)濃縮，再基于離子遷移率來有效分離和提取，可簡單或不經(jīng)預(yù)處理從復(fù)合物中抽提或純化核苷酸，如細胞株、尿液、血液[32]。

還有研究將已知的胞外循環(huán)miRNAs編制成數(shù)據(jù)庫：miRandola，使其成為生物醫(yī)學(xué)研究的基本工具，這個miRNA數(shù)據(jù)庫，允許用戶推斷循環(huán)miRNA的潛在生物學(xué)功能，以及與表型的聯(lián)系，目前包含 2 132條記錄，581個特異的常規(guī)miRNAs和21種類型標本[33]。

尿液中循環(huán)miRNA已成為一種新的非侵入性生物標志物，與多種疾病和組織損傷相關(guān)，已經(jīng)涉及臨床診斷的多個領(lǐng)域，如尿液miRNAs水平改變介入毒物誘導(dǎo)的肝損傷[34]、miRNAs成為興奮劑(紅細胞刺激劑)濫用的生物標志物[35]?？梢灶A(yù)見隨著檢測技術(shù)的發(fā)展，尿液循環(huán)miRNA將成為臨床診斷的一個新的強有力工具。

[1]Rani S,O′Brien K,Kelleher FC,et al.Isolation of exosomes for subsequent mRNA,MicroRNA,and protein profiling[J].Methods Mol Biol,2011,784:181-195.

[2]Snowdon J,Boag S,Feilotter H,et al.A pilot study of urinary microRNA as a biomarker for urothelial cancer[J].Can Urol Assoc J,2012，7(1/2):1-5.

[3]Weber JA,Baxter DH,Zhang S,et al.The microRNA spectrum in 12 body fluids[J].Clin Chem,2010,56(11):1733-1741.

[4]Zen K,Zhang CY.Circulating MicroRNAs:a novel class of biomarkers to diagnose and monitor human cancers[J].Med Res Rev,2012，32(2)：326-348.

[5]Kuner R,Brase JC,Sultmann H,et al.microRNA biomarkers in body fluids of prostate cancer patients[J].Methods,2013,59(1):132-137.

[6]Yamada Y,Enokida H,Kojima S,et al.MiR-96 and miR-183 detection in urine serve as potential tumor markers of urothelial carcinoma:correlation with stage and grade,and comparison with urinary cytology[J].Cancer Sci,2011,102(3):522-529.

[7]Simonato F,Ventura L,Sartori N,et al.Detection of microRNAs in archival cytology urine smears[J].PLoS ONE,2013,8(2):e57490.

[8]Lorenzen JM,Thum T.Circulating and urinary microRNAs in kidney disease[J].Clin J Am Soc Nephrol,2012,7(9):1528-1533.

[9]Bryant RJ,Pawlowski T,Catto JW,et al.Changes in circulating microRNA levels associated with prostate cancer[J].Br J Cancer,2012,106(4):768-774.

[10]Hanke M,Hoefig K,Merz H,et al.A robust methodology to study urine microRNA as tumor marker:microRNA-126 and microRNA-182 are related to urinary bladder cancer[J].Urol Oncol,2010,28(6):655-661.

[11]Hanke M,Kausch I,Dahmen G,et al.Detailed technical analysis of urine RNA-based tumor diagnostics reveals ETS2/urokinase plasminogen activator to be a novel marker for bladder cancer[J].Clin Chem,2007,53(12):2070-2077.

[12]Shimizu T,Suzuki H,Nojima M,et al.Methylation of a panel of MicroRNA genes is a novel biomarker for detection of bladder cancer[J].LID-S0302-2838(12)01405-4[pii]LID-10.1016/j.eururo.2012.11.030[doi].Eur Urol,2012.

[13]Fang DY,King HW,Li JY,et al.Exosomes and the kidney:blaming the messenger[J].Nephrology (Carlton),2013,18(1):1-10.

[14]Beltrami C,Clayton A,Phillips AO,et al.Analysis of urinary microRNAs in chronic kidney disease[J].Biochem Soc Trans,2012,40(4):875-879.

[15]Wang G,Kwan BC,Lai FM,et al.Expression of microRNAs in the urinary sediment of patients with IgA nephropathy[J].Dis Markers,2010,28(2):79-86.

[16]Wang G,Kwan BC,Lai FM,et al.Elevated levels of miR-146a and miR-155 in kidney biopsy and urine from patients with IgA nephropathy[J].Dis Markers,2011,30(4):171-179.

[17]Wang N,Zhou Y,Jiang L,et al.Urinary microRNA-10a and microRNA-30d serve as novel,sensitive and specific biomarkers for kidney injury[J].PLoS ONE,2012,7(12):e51140.

[18]Luo Y,Wang C,Chen X,et al.Increased serum and urinary MicroRNAs in children with idiopathic nephrotic Syndrome[J].Clin Chem,2013,59(4):658-666.

[19]Li JY,Yong TY,Michael MZ,et al.Review:the role of microRNAs in kidney disease[J].Nephrology (Carlton),2010,15(6):599-608.

[20]Argyropoulos C,Wang K,McClarty S,et al.Urinary microRNA profiling in the nephropathy of type 1 diabetes[J].PLoS ONE,2013,8(1):e54662.

[21]Hartono C,Muthukumar T,Suthanthiran M.Noninvasive diagnosis of acute rejection of renal allografts[J].Curr Opin Organ Transplant,2010,15(1):35-41.

[22]Lorenzen JM,Volkmann I,Fiedler J,et al.Urinary miR-210 as a mediator of acute T-cell mediated rejection in renal allograft recipients[J].Am J Transplant,2011,11(10):2221-2227.

[23]Sarma NJ,Tiriveedhi V,Ramachandran S,et al.Modulation of immune responses following solid organ transplantation by microRNA[J].Exp Mol Pathol,2012,93(3):378-385.

[24]Zhu H,Fan GC.Extracellular/circulating microRNAs and their potential role in cardiovascular disease[J].Am J Cardiovasc Dis,2011,1(2):138-149.

[25]Gidlof O,Andersson P,vander Pals J,et al.Cardiospecific microRNA plasma levels correlate with troponin and cardiac function in patients with ST elevation myocardial infarction,are selectively dependent on renal elimination,and can be detected in urine samples[J].Cardiology,2011,118(4):217-226.

[26]Cheng Y,Wang X,Yang J,et al.A translational study of urine miRNAs in acute myocardial infarction[J].J Mol Cell Cardiol,2012,53(5):668-676.

[27]Duan XX,Zhou X,Wang XB,et al.Urine cardiac specific microRNA-1 level in patients with ST segment elevation acute myocardial infarction[J].Zhongguo Weizhongbing Jijiu Yixue,2012,24(12):709-712.

[28]Wang G,Tam LS,Li EK,et al.Serum and urinary cell-free MiR-146a and MiR-155 in patients with systemic lupus erythematosus[J].J Rheumatol,2010,37(12):2516-2522.

[29]Wang G,Tam LS,Li EK,et al.Serum and urinary free microRNA level in patients with systemic lupus erythematosus[J].Lupus,2011,20(5):493-500.

[30]Roos PH,Jakubowski N.Methods for the discovery of low-abundance biomarkers for urinary bladder cancer in biological fluids[J].Bioanalysis,2010,2(2):295-309.

[31]Blondal T,Jensby NS,Baker A,et al.Assessing sample and miRNA profile quality in serum and plasma or other biofluids[J].Methods,2013,59(1):164-169.

[32]Garcia-Schwarz G,Rogacs A,Bahga SS,et al.On-chip isotachophoresis for separation of ions and purification of nucleic acids[J].J Vis Exp,2012,(61):e3890.

[33]Russo F,Di BS,Nigita G,et al.miRandola:extracellular circulating microRNAs database[J].PLoS ONE,2012,7(10):e47786.

[34]Yang X,Greenhaw J,Shi Q,et al.Identification of urinary microRNA profiles in rats that may diagnose hepatotoxicity[J].Toxicol Sci,2012,125(2):335-344.

[35]Leuenberger N,Jan N,Pradervand S,et al.Circulating microRNAs as long-term biomarkers for the detection of erythropoiesis-stimulating agent abuse[J].Drug Test Anal,2011,3(11/12):771-776.

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.18.068

A

1672-9455(2015)18-2798-04

2015-03-25

2015-04-15)