朱 飛，王湘慶，陳亞楠，郎森陽(yáng)，張家堂

解放軍總醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科，北京 100853

大麻素受體1/食欲素受體1-G蛋白偶聯(lián)受體異聚體及其交叉激活作用研究進(jìn)展

朱 飛，王湘慶，陳亞楠，郎森陽(yáng)，張家堂

解放軍總醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科，北京 100853

大麻素受體1(cannabinoid receptor 1，CB1)和食欲素受體1(orexin receptor 1，OX1)同屬G蛋白偶聯(lián)受體(G-proteincoupled receptors，GPCRs)，兩者在體內(nèi)分布廣泛，均參與調(diào)節(jié)攝食、能量平衡、睡眠和覺醒、食物和藥物的成癮性等。兩者作用位點(diǎn)接近，足以形成異聚體共同參與各項(xiàng)功能調(diào)節(jié)，多項(xiàng)研究表明，CB1/OX1存在交叉激活作用。本文對(duì)CB1和OX1的作用以及CB1/OX1異聚體的交叉激活作用進(jìn)行綜述，以期對(duì)其有更深入的認(rèn)識(shí)，從而對(duì)CB1/OX1-GPCR新藥研發(fā)起到一定指導(dǎo)作用。

大麻素受體1；食欲素受體1；G蛋白偶聯(lián)受體；交叉激活

大麻素的應(yīng)用已經(jīng)有5 000年歷史，然而其成癮性限制了其臨床應(yīng)用[1-2]。近年來(lái)，隨著大麻素受體的發(fā)現(xiàn)和對(duì)內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)，各種大麻素受體激動(dòng)劑/拮抗劑/相關(guān)復(fù)合物逐漸出現(xiàn)，使得大麻素在保留其藥效的前提下去除其成癮性成為可能。食欲素在1998年被分離出來(lái)，參與攝食、能量平衡等各項(xiàng)功能調(diào)節(jié)。大麻素受體1(cannabinoid receptor 1，CB1)和食欲素受體1(orexin receptor 1，OX1)同屬G蛋白偶聯(lián)受體(G-protein-coupled receptors，GPCRs)，多項(xiàng)研究顯示兩者作用位點(diǎn)接近，足以形成異聚體，兩者共同參與多種功能調(diào)節(jié)，存在交叉激活作用[3-8]。對(duì)CB1/OX1-GPCR異聚體的研究有望合理利用大麻素和食欲素，克服大麻素的藥物成癮性，實(shí)現(xiàn)新藥的研發(fā)。

1 大麻素和大麻素受體CB1

植物大麻在幾世紀(jì)前就已用于治療各種疾病，但是因?yàn)槠涑砂a性和藥物濫用的風(fēng)險(xiǎn)限制了其臨床應(yīng)用。1964年，大麻的主要精神調(diào)節(jié)活性成分Δ9-THC(Δ9-tetrohydrocannabina)被提取并純化[9]。之后發(fā)現(xiàn)Δ9-THC主要作用于特殊的G蛋白偶聯(lián)受體，被命名為大麻素受體1和大麻素受體2(cannabinoid receptor 2，CB2)。隨著大麻素受體的發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性大麻素(endocannabinoid，EC)被人們所認(rèn)識(shí)。人體主要有兩種內(nèi)源性大麻素：花生四烯酸乙醇胺和2-花生四烯酸甘油(2-arachiodonoylglycerol，2-AG)，在它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)中都含有磷脂衍生脂化的花生四烯酸鏈。EC的合成與分解酶還在不斷的被認(rèn)識(shí)與克隆，這些蛋白質(zhì)與EC以及大麻素受體1和大麻素受體2一起組成內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)[2]。

CB1和CB2是分別由人染色體6q14-q15(CNR1)和1p36 11(CNR2)基因編碼的7次跨膜抑制性G蛋白偶聯(lián)受體，兩者具有大約48%的序列同源性。CB1主要存在于中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)，在脂肪組織、心肌、血管內(nèi)皮、胃腸道、肝、胰腺和骨骼肌也有不同程度的表達(dá)；CB2主要分布在免疫細(xì)胞、造骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞，在腦干有極少表達(dá)[10-11]。大麻素主要是通過(guò)CB1來(lái)發(fā)揮作用[12]。鼠類和人類的CB1分別于1990年和1991年克隆成功，兩者具有97%的同源性[10]。神經(jīng)元CB1位于突觸前膜，與配體結(jié)合后使突觸后神經(jīng)元去極化然后通過(guò)逆行信使作用于突觸前神經(jīng)末梢[13-14]。CB1通過(guò)抑制性G蛋白(Gi/Go)抑制腺苷酸環(huán)化酶(adenylyl cyclase，AC)的活性，使細(xì)胞內(nèi)環(huán)腺苷酸水平下降，激活絲裂元活化蛋白激酶發(fā)揮作用，也可以通過(guò)鈣離子通道和鉀離子通道來(lái)發(fā)揮作用[10]。

大麻素類物質(zhì)具有多種作用，主要包括對(duì)食物攝取(促進(jìn)食欲和降低飽食感)、能量平衡(調(diào)節(jié)能量攝入和能量消耗)、睡眠/覺醒(減少覺醒)、內(nèi)環(huán)境(調(diào)節(jié)脂肪生成、蓄積和生熱作用，以及調(diào)節(jié)脂肪連接蛋白和胰島素耐受性等)的調(diào)節(jié)，以及對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)(抑制神經(jīng)遞質(zhì)釋放、降低神經(jīng)元興奮性)[12,15]。但大麻素同時(shí)也存在認(rèn)知/記憶力減退、焦慮/欣快、幻覺、食物攝入增加、刺激脂肪生成、導(dǎo)致脂肪堆積等不良反應(yīng)[10]。隨著人們對(duì)內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)，人工合成的大麻素激動(dòng)劑/拮抗劑/大麻相關(guān)復(fù)合物逐漸出現(xiàn)，被認(rèn)為是有治療價(jià)值的。盡管其作用機(jī)制尚不完全明確，但已經(jīng)用于或有待用于治療多種疾病，包括厭食、嘔吐、疼痛、多發(fā)性硬化、神經(jīng)變性病(PD、AD、Huntington病、抽動(dòng)穢語(yǔ)綜合征)、癲癇、青光眼、骨質(zhì)疏松、精神分裂癥、心血管疾病、腫瘤、肥胖和代謝綜合征等[1-2]。

2 食欲素和食欲素受體OX1

食欲素是一對(duì)興奮性神經(jīng)肽激素的合稱，包括Orexin A和Orexin B，在1998年由兩個(gè)不同的研究小組同時(shí)從大鼠下丘腦中分離出來(lái)。因?yàn)槠渲饕植加谙虑鹉X攝食中樞，作用與攝食有關(guān)，所以被命名為食欲素[13,16]。在發(fā)現(xiàn)食欲素的同時(shí)，食欲素受體1(orexin receptor 1，OX1)和食欲素受體2(orexin receptor 2，OX2)也被發(fā)現(xiàn)。Orexin陽(yáng)性神經(jīng)元廣泛分布于整個(gè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)，如下丘腦、穹窿、海馬等部位；在外周，主要分布在周圍神經(jīng)結(jié)構(gòu)，包括迷走神經(jīng)、腸神經(jīng)系統(tǒng)以及其他結(jié)構(gòu)，如胃腸道內(nèi)彌散神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、胰腺、胃、小腸黏膜，在睪丸、腎上腺、腎、胎盤中也有發(fā)現(xiàn)[17-18]。在生物學(xué)重要性方面，Orexin A比Orexin B更重要。Orexin A較Orexin B穩(wěn)定，其在組織或血液中的含量顯著高于Orexin B。并且，Orexin A較Orexin B有更好的脂溶性，更容易穿透血腦屏障[19]。

OX1和OX2都是7次跨膜G蛋白偶聯(lián)受體，分別由1號(hào)和6號(hào)染色體編碼，兩者有64%序列同源性。而且，人類與大鼠的OX1和OX2具有高度同源性(分別為94%和95%)。OX1受體選擇性作用于Orexin A；而OX2受體為非選擇性，與Orexin A或Orexin B均可以結(jié)合[20]。

最初食欲素被認(rèn)為是神經(jīng)遞質(zhì)，在中樞刺激攝食，其后不久便發(fā)現(xiàn)它們的作用范圍非常廣泛，參與調(diào)節(jié)能量平衡(增加能量消耗)、睡眠/覺醒(增加覺醒)、神經(jīng)內(nèi)分泌(調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺軸)、獎(jiǎng)賞系統(tǒng)及食物與藥物成癮、心血管、生殖、胃腸蠕動(dòng)及胃、腸、胰腺分泌等[20-22]。開發(fā)OX1激動(dòng)劑及拮抗劑等藥物對(duì)于治療睡眠障礙、肥胖癥、藥物成癮等有廣闊的前景。目前基于食欲素系統(tǒng)開發(fā)的新藥，有OX1激動(dòng)劑用來(lái)治療發(fā)作性睡病，OX1拮抗劑用來(lái)治療失眠和肥胖癥[23-25]。最新研究表明食欲素對(duì)于癲癇發(fā)作亦有影響，但是研究尚少且結(jié)果存在矛盾，有待進(jìn)一步研究[26-27]。

3 CB1/OX1-GPCR異聚體及其交叉激活作用

CB1和OX1均屬G蛋白偶聯(lián)受體家族，分布在細(xì)胞膜上，作用位點(diǎn)非常接近[13,28]。Cristino等[4]應(yīng)用電鏡顯示內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)成分在OX神經(jīng)元上表達(dá)。Hilairet等[5]證實(shí)CB1和OX1同時(shí)分布在細(xì)胞膜上，作用位點(diǎn)接近，足以形成異聚體，強(qiáng)烈提示兩受體之間存在某種聯(lián)系。有證據(jù)顯示CB1和OX1有交叉激活作用，當(dāng)兩個(gè)受體同時(shí)表達(dá)時(shí)，CB1增強(qiáng)食欲素介導(dǎo)的有絲分裂激活蛋白激酶活性，給予特異性CB1拮抗劑可阻斷上述反應(yīng)[5]。目前對(duì)于CB1/OX1相互作用的研究主要集中在調(diào)節(jié)鎮(zhèn)痛、食欲、覺醒、肥胖和成癮性方面。

Haj-Dahmane和Shen[6]采用膜片鉗技術(shù)研究食欲素的覺醒作用時(shí)，意外發(fā)現(xiàn)Orexin B誘導(dǎo)的抑制谷氨酸釋放作用可由CB1受體激動(dòng)劑(WIN55，212-2)模擬出來(lái)，并被CB1受體拮抗劑(AM251)阻斷。提示Orexin B誘導(dǎo)抑制5-羥色胺神經(jīng)元谷氨酸神經(jīng)遞質(zhì)釋放的作用，是通過(guò)內(nèi)源性大麻素逆行信使介導(dǎo)。Ho等[7]研究Orexin A在大鼠中腦腹外側(cè)導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)的鎮(zhèn)痛機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，Orexin A產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛作用是通過(guò)激活突觸后OX1受體，刺激內(nèi)源性大麻素合成、逆行作用于突觸前膜CB1受體，從而抑制GABA的釋放，抑制GABA能抑制性突觸后電位。這一過(guò)程可以通過(guò)OX1拮抗劑阻斷，而不是被OX2阻斷。Orexin A介導(dǎo)的抑制性突觸后電位可以被CB1受體激動(dòng)劑(WIN55，212-2)模擬出來(lái)，并被CB1受體阻滯劑(AM251)阻斷。

在對(duì)攝食的研究中，Huang等[8]采用膜片鉗技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，食欲素神經(jīng)元可釋放內(nèi)源性大麻素，大麻素通過(guò)逆行信使作用減少突觸前谷氨酸的釋放，降低食欲素神經(jīng)元的活性。CB1受體激動(dòng)劑(WIN55，212-2)使鄰近食欲細(xì)胞超極化，減少其自發(fā)放電，這一效果可以被AM251阻斷。WIN55，212-2作用于細(xì)胞的軸突，減少自發(fā)的抑制性突觸后電位的頻率但是不減少其波幅。WIN55，212-2介導(dǎo)的放電頻率降低歸因于突觸前膜谷氨酸釋放的減少，從而減少了興奮性突觸后電位的頻率。

Cristino等[4]研究CB1和肥胖之間的關(guān)系時(shí)，發(fā)現(xiàn)在消瘦的小鼠中，CB1的表達(dá)絕大多數(shù)是興奮性的。通過(guò)共聚焦超微顯微鏡分析，觀察到在瘦素敲除的肥胖小鼠和食物過(guò)剩引發(fā)肥胖的小鼠中，食欲素神經(jīng)元主要接受CB1表達(dá)的抑制性輸入信號(hào)，同時(shí)過(guò)表達(dá)2-AG合成所需酶，這些反過(guò)來(lái)抑制了CB1能突觸末梢的突觸傳遞。膜片鉗結(jié)果顯示，對(duì)于瘦素基因敲除小鼠的食欲素神經(jīng)元，CB1抑制性神經(jīng)支配增加。Flores等[29]在研究食欲素對(duì)于大麻素成癮性的調(diào)節(jié)作用時(shí)，發(fā)現(xiàn)OX1的激活可以增強(qiáng)CB1受體激動(dòng)劑(WIN55，212-2)的作用，這一發(fā)現(xiàn)在OX1基因敲除小鼠中得以證實(shí)。關(guān)于CB1/OX1交叉激活作用的機(jī)制，近期多項(xiàng)研究表明突觸后食欲素神經(jīng)元可以釋放內(nèi)源性大麻素2-AG，通過(guò)逆行信使作用于突觸前CB1，繼而激活磷脂酶C和二?；视椭竵?lái)發(fā)揮作用，有待于進(jìn)一步研究證實(shí)[7,30-33]。

4 結(jié)語(yǔ)

CB1和OX1同屬GRCRs，兩者均廣泛分布在中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等，均參與調(diào)節(jié)攝食、能量平衡、睡眠/覺醒、癲癇發(fā)作及食物/藥物的成癮性等。兩者作用位點(diǎn)接近，作為異聚體參與多種功能的調(diào)節(jié)，其表現(xiàn)出的交叉激活作用值得進(jìn)一步探討。針對(duì)CB1/OX1-GPCR異聚體進(jìn)行新藥研發(fā)有一定意義。

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Advances in CB1/OX1-GPCR heterodimer and their cross-talk interaction

ZHU Fei, WANG Xiangqing, CHEN Yanan, LANG Senyang, ZHANG Jiatang
Department of Neurology, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China

LANG Senyang. Email: langsy@263.net; WANG Xiangqing. Email: bjxqwang@yahoo.com.cn

Cannabinoid receptor 1 (CB1) and orexin receptor 1 (OX1) belong to the GPCRs superfamily, and both of them are widely distributed in the body. They participate in modulating food-intake, energy balance, sleep/awake and food/drug addiction, etc. Former experiments reveal that the distribution of CB1 and OX1 are close enough to form heterodimer. They have "cross-talk" interaction in many aspects. The function of CB1/OX1 and their “cross-talk” interaction are summarized in this article, in order to make a deeply recognition of CB1/OX1-GPCR which may offer entirely novel sets of potential therapeutic targets.

cannabinoid receptor 1; orexin receptor 1; G-protein-coupled receptors; cross-priming

Q428；Q493；Q423

A

2095-5227(2015)01-0094-03

10.3969/j.issn.2095-5227.2015.01.029

時(shí)間：2014-08-15 10:32

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20140815.1032.002.html

2014-06-30

基金課題：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81271438)

Supported by the National Natural Science Foundation of China (81271438)

朱飛，女，在讀博士，醫(yī)師。研究方向：癲癇。Email: zhufei327@163.com

郎森陽(yáng)，女，博士，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師。Email: langsy@263.net；王湘慶，女，博士，副教授，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師。Email: bjxqwang@yahoo.com.cn