李奉京 蒲志群 北京藍(lán)譜生物技術(shù)開發(fā)有限公司

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種嚴(yán)重影響人類健康的慢性傳染病。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，目前全球有約三分之一( 20 億) 人口受感染，每年新發(fā)結(jié)核患者達(dá)900 多萬，死亡人數(shù)約 300 萬。中國是全球22 個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，結(jié)核患者數(shù)僅次于印度位居世界第二。為加強(qiáng)全球結(jié)核病防控工作，聯(lián)合國制定了千年防治目標(biāo)，要求全球結(jié)核病控制至2015 年結(jié)核病的患病率和死亡率均降低50%，但結(jié)核病防治工作中肺結(jié)核病人的發(fā)現(xiàn)仍是難點(diǎn)和重點(diǎn)。目前結(jié)核病的診斷仍然依賴于臨床資料、痰涂片鏡檢和細(xì)菌培養(yǎng)。然而，涂片法靈敏度低，分離培養(yǎng)方法耗時(shí)長，隨著全球結(jié)核病防治工作的進(jìn)展，現(xiàn)有的細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)方法已不能滿足臨床和防治工作要求。為提高肺結(jié)核病人的發(fā)現(xiàn)率，新的基于分子生物檢測(cè)的方法不斷的涌現(xiàn)，其中熒光定量PCR 方法，XPERT 方法需要昂貴的儀器設(shè)備，在設(shè)施簡陋技術(shù)缺乏的基層實(shí)驗(yàn)室條件尚不能滿足這些方法的開展。而 LAMP 方法不需要昂貴的儀器，操作步驟相對(duì)簡單，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的條件設(shè)備要求不高，因此，該方法有望成為結(jié)核病診斷方法中新的寵兒。

全球結(jié)核病流行狀況（WHO report，2013）

LAMP 法是一種全新的DNA 擴(kuò)增方法，具有簡單、快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高等特點(diǎn)，采用2 對(duì)引物在等溫條件下即可完成DNA 的擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)果可通過肉眼觀察熒光或濁度進(jìn)行判定，同時(shí)采用封閉系統(tǒng)減少了工作區(qū)域擴(kuò)增子的污染，且整個(gè)反應(yīng)過程需時(shí)較短。PURE-LAMP 檢測(cè)試劑盒就是日本榮研公司與FIND 基金合作開發(fā)出的一種基于LAMP 技術(shù)速高效檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的試劑盒，被WHO 推薦為最適合現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)結(jié)核病的重要產(chǎn)品之一。該試劑盒采用的是干粉試劑，可常溫運(yùn)輸和保存，配合簡單的前處理試劑，操作簡便，無需復(fù)雜的技術(shù)要求，一臺(tái)簡單的恒溫裝置就可以在一個(gè)小時(shí)之內(nèi)完成檢測(cè)，直接通過肉眼觀察熒光進(jìn)行結(jié)果判定，可以說為設(shè)備簡陋的基層實(shí)驗(yàn)室提供了分子檢測(cè)平臺(tái)。

最近，中國疾病預(yù)防控制中心結(jié)核病預(yù)防控制中心的歐喜超、趙雁林等，帕斯適宜衛(wèi)生科技組織（PATH）的張治英、李俊晨等，香港中文大學(xué)的Man Kam，蓋茨基金會(huì)項(xiàng)目北京辦的池俊英，中國人民解放軍總醫(yī)院的張志堅(jiān)等科研機(jī)構(gòu)的專家們聯(lián)合發(fā)表于國際著名期刊《PLOS ONE》上的一篇文章報(bào)道了PRUE-LAMP 檢測(cè)試劑盒在中國區(qū)縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用評(píng)估結(jié)果。研究者們收集了來自中國兩個(gè)縣級(jí)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室的1378 份肺結(jié)核疑似病例，排除不合格樣本后可供研究分析的共有1329 份。采集三個(gè)時(shí)期的痰液（時(shí)痰，晚痰和早痰）樣本用于檢測(cè)。將PURE-LAPM與標(biāo)準(zhǔn)L-J 培養(yǎng)法做對(duì)照。研究結(jié)果顯示，在供試樣本中，PURE-LAMP 法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的靈敏度達(dá)到70.67%。同時(shí)，PURE-LAMP 法在基于涂片陽性培養(yǎng)呈陽性，涂片陰性培養(yǎng)呈陽性的病患中靈敏度分別為92.12%和53.81%。PURE-LAMP 法在檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌中的特異性為98.32%。并且，與固體培養(yǎng)法相比，PURE-LAMP 能顯著降低污染率。

PURE-LAMP 法具有較高的靈敏度和特異性。其具有高效、快速和安全的優(yōu)點(diǎn)，適合在基層及偏遠(yuǎn)地區(qū)廣泛推廣使用。