高樹全，仲婷婷，催大鵬 (北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院肝膽外科，河北張家口075000)

胃癌是消化系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤，目前能夠從根本上治愈胃癌的方法即胃癌根治術(shù)［1］。雖然胃癌根治術(shù)能夠使胃癌患者的生活質(zhì)量提高，但治療后患者易復(fù)發(fā)，加之患者曾經(jīng)行胃癌切除手術(shù)的經(jīng)歷將使胃癌復(fù)發(fā)的概率上升，這也是我們探索胃癌復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移機制的原因。目前胃癌的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移已經(jīng)成為胃癌治療研究的新方向［2］。有文獻［3］報道缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)能夠促進血管的生成。在正常人體內(nèi)，這2 種因子的含量非常低，但胃癌患者體內(nèi)，這種因子的含量異常升高，我們推測這2 種因子的含量與胃癌腫瘤的發(fā)展呈相關(guān)性。本文使用免疫組織化學(xué)法測定胃癌組織中HIF-1α、VEGF的具體分布情況，結(jié)合測定結(jié)果分析HIF-1α、VEGF 與胃癌復(fù)發(fā)以及轉(zhuǎn)移之間的線性關(guān)系，為臨床胃癌的研究提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2011 年6 月至2014 年6 月在我院進行過胃癌根治切除手術(shù)的患者資料，術(shù)后胃癌復(fù)發(fā)患者80 例為觀察組，其中男37 例，女43 例，年齡35 ～65 歲，平均(58.5 ±5.7)歲;選取在我院行胃癌根治切除術(shù)，隨訪5 年及以上無復(fù)發(fā)病的患者50 例為對照組，其中男28 例，女22 例，年齡為38 ～63 歲，平均(57.5 ±7.4)歲;對患者進行超聲，CT 等檢測，排除第2 次原發(fā)胃癌患者，保證研究對象的所有臨床病理資料的完整性、準(zhǔn)確性以及實時性。患者簽署知情同意書，由醫(yī)院倫理委員會全程跟蹤。

1.2 方法

經(jīng)胃鏡(GIF-XP20 型)對病變部位采取組織活檢，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照病理診斷《全國胃癌協(xié)作組制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)》［4］執(zhí)行。對HIF-1α、VEGF 水平檢測采取免疫組化方法。操作步驟:用EDTA 對HIF-1α 進行熱修復(fù)20 min，對VEGF 熱修復(fù)2 min，修復(fù)后使用冷水、PBS 緩沖液沖洗。蘇木精染色后，脫水，成片。陰性對照參照代替一抗樣本的PBS1 緩沖液。對樣本參數(shù)的免疫組織進行判斷參考以下原則:①若HIF-1α 表達為陽性，我們則可以在細胞核內(nèi)見到棕黃色或黃色顆粒。VEGF 表達陽性則體現(xiàn)為黃色或棕黃色顆粒。②放大倍數(shù)100 倍，鏡下觀察細胞著色水平，將著色不同水平分成0 ～3 級，隨機選取樣本中的3個有效區(qū)域，使用放大倍數(shù)為400 倍，鏡下對細胞進行計數(shù)，以500 為一個計數(shù)單位，陽性細胞的比率在10%以下為1 級，在10% ～50%為2 級，大于50%的為3 級;③級數(shù)計算:將著色不同水平分級與陽性細胞比率分級所測得結(jié)果相乘，0 級為陰性，1 ～3 級為弱陽性，4 ～6 級為中度陽性、6 級以上為重度陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

實驗數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0 軟件包統(tǒng)計分析腫瘤發(fā)展因素與HIF-1α 與VEGF 的含量之間的關(guān)系，Spearman 分析法分析2 組患者的相關(guān)性，Cox 分析法對胃癌進行風(fēng)險模型分析，以P ＜0.05為具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 VEGF 與HIF-1α 表達情況

Spearman 法進行相關(guān)分析后，得出HIF-1α 與VEGF 呈正相關(guān)(r=0.458，P=0.000)。觀察各組胃組織中VEGF、HIF-1α 陽性表達明顯高于對照組(表1、表2)，染色結(jié)果見圖1。

表1 各組胃組織中VEGF 表達情況

表2 各組胃組織中HIF-1α 表達情況

圖1 HIF-1α 和VEGF 在胃癌組織中陽性表達

2.2 胃癌高風(fēng)險因素分析

復(fù)發(fā)組中胃癌HIF-1α 陽性率與臨床病理因素的相關(guān)性分析結(jié)果提示(表3):HIF-1α 陽性率與胃癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否、TNM 臨床分期及VEGF 表達密切相關(guān)。而胃癌1 年生存率和平均生存時間HIF-1α 陰性表達患者明顯高于陽性表達患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(表4)。通過Cox 法進行風(fēng)險模型分析，HIF-1α(OR=3.145，95%CI:1.665 ～4.027)與VEGF(OR=3.012，95%CI:1.244 ～3.886)是引起胃癌復(fù)發(fā)的重要因素。

表3 胃癌復(fù)發(fā)組HIF-1α 陽性率與臨床病理特征的相關(guān)性分析［例(%)］

表4 患者1 年生存率和平均生存時間比較

3 討論

胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，胃癌根治術(shù)為治療本病的常用方法，能明顯提高患者的生活質(zhì)量，減少痛苦［5-6］，但治療后部分胃癌患者容易復(fù)發(fā)。胃癌的早期癥狀不易表現(xiàn)出來，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)胃癌且接受根治手術(shù)治療時，胃癌已經(jīng)到了進展期［7］。在這一階段，雖然對患者進行了根治手術(shù)治療，但是胃癌復(fù)發(fā)的概率仍然較高。而如果在胃癌早期對胃癌患者進行根治手術(shù)治療，并且在之后對其進行觀測隨訪，結(jié)果表明，胃癌前期治愈后的胃癌復(fù)發(fā)率為胃癌進展期復(fù)發(fā)率的13%［8］。在胃癌進展期進行根治手術(shù)治療后復(fù)發(fā)病率高達75%［9］。所以為了提高胃癌患者手術(shù)之后的生存率，延長生存時間，我們對誘發(fā)胃癌患者根治手術(shù)治療之后復(fù)發(fā)率的相關(guān)因素進行了系統(tǒng)的分析。

根據(jù)目前的研究表明，HIF-1α、VEGF 的共同作用是導(dǎo)致胃癌根治手術(shù)之后復(fù)發(fā)的主要原因，其中促進腫瘤血管生成是促進胃癌腫瘤發(fā)展的前提條件［10］。在腫瘤患者的體細胞中，癌細胞的抑制因子與癌細胞的促進因子之間的平衡被打破，癌細胞的促進因子活躍度十分高，癌細胞的抑制因子的活躍度很低。VEGF因子在細胞中的主要作用就是促進血管的生產(chǎn)，在對正常人與腫瘤患者的檢查中發(fā)現(xiàn)，正常人VEGF 的含量非常低，但是患有腫瘤的患者VEGF 的含量往往較高［11］。除此之外，VEGF 還有其他的功能，比如加速淋巴管內(nèi)皮細胞的形成與增殖，促進淋巴管的形成，而且還可以增加淋巴血管之間的通透性，加速淋巴血管轉(zhuǎn)移，所以腫瘤惡性程度與VEGF 含量有著緊密的聯(lián)系。VEGF 可使體內(nèi)出現(xiàn)免疫識別障礙，機體認(rèn)定腫瘤組織為正常組織，從而產(chǎn)生正常的新陳代謝，促進HIF-1α生成，可強化腫瘤因子的轉(zhuǎn)錄，進一步增加VEGF 的生成量，從而進一步促進腫瘤組織的發(fā)展［12］。

胃癌復(fù)發(fā)組HIF-1α 與臨床病理特征的相關(guān)性分析顯示［8］，對胃癌復(fù)發(fā)性具有影響的因子包括胃癌分化程度、胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否、胃癌浸潤程度、胃癌TNM 分期與VEGF 的表達等。張磊等［13］對53 例胃癌復(fù)發(fā)患者組織中的HIF-1α 表達進行了測定，發(fā)現(xiàn)陽性表達率與胃癌腫瘤大小以及與肝轉(zhuǎn)移情況有直接關(guān)系。文獻報道［14］檢測HIF-1α 在胃癌組織中的表達能夠推測胃癌的遠端轉(zhuǎn)移，進而推測胃癌的復(fù)發(fā)與HIF-1α 關(guān)系密切。劉勇及蔡刁龍等［15-16］對胃癌手術(shù)患者的預(yù)后情況進行分析，發(fā)現(xiàn)己糖激酶-Ⅱ與HIF-1α 關(guān)系著胃癌分化、胃癌腫瘤的大小以及胃癌的臨床分期。可作為對胃癌術(shù)后患者復(fù)發(fā)的影響因素。本研究結(jié)果表明腫瘤發(fā)展速度與細胞體內(nèi)的HIF-1α 含量有著明顯的線性關(guān)系，HIF-1α在腫瘤的發(fā)展的過程中起到了重要的促進作用。本組實驗結(jié)果表明:與對照組相比，觀察組中HIF-1α 的陽性表達明顯更多，提示胃癌患者的HIF-1α的變化與病情狀況有關(guān);2 組VEGF 陽性表達中，觀察組明顯多于對照組，提示胃癌患者的VEGF 表達與病情狀況有關(guān)。因此，可以認(rèn)為檢測胃癌患者VEGF 和HIF-1α情況，對胃癌患者復(fù)發(fā)的預(yù)測具有重要意義。

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