孫克讓 李 健

(河北省玉田縣中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 玉田 064100)

在當(dāng)今社會(huì)，結(jié)核病仍然是困擾人們的傳染病之一，給人類的身體健康帶來不利影響，病死率依舊很高［1］。中國死于結(jié)核病的人數(shù)位居世界前列，并且感染人數(shù)也較多，由于藥物使用不當(dāng)，還出現(xiàn)了耐藥結(jié)核病，造成結(jié)核病難以治愈，給患者的身體帶來不可逆?zhèn)?，影響患者的健康。為了減少疾病的發(fā)生，如何檢測(cè)病原體就成為醫(yī)學(xué)專家研究的重點(diǎn)。本研究通過進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌H37Rv結(jié)合肽的篩選試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌與結(jié)合肽的親和力較強(qiáng)，可以有效檢測(cè)出結(jié)核分枝桿菌，為結(jié)核病體外檢測(cè)提供了方便快捷的方法，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010－10—2013－10于河北省玉田縣中醫(yī)醫(yī)院就診的肺結(jié)核患者，將從他們痰液中提取不同的結(jié)核分枝桿菌用于篩選試驗(yàn)。同時(shí)選取非分枝桿菌進(jìn)行篩選，與分枝桿菌進(jìn)行對(duì)比。所選的分枝桿菌有結(jié)核分枝桿菌H37Rv、膿腫分枝桿菌、金色分枝桿菌等，非分枝桿菌選擇的是白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌。對(duì)所有菌體進(jìn)行篩選試驗(yàn)，觀察其與結(jié)合肽的結(jié)合能力。

1.2 篩選方法 將所有菌體在液體培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，并進(jìn)行滅活，再把菌體進(jìn)行5 000×g離心10 min、0.9%氯化鈉注射液洗滌2次后進(jìn)行篩選。從第2輪篩選開始將恥垢分枝桿菌加入H37Rv結(jié)合肽菌液，用非特異性洗脫緩沖液進(jìn)行洗滌后得到特性結(jié)合的結(jié)核分枝桿菌噬菌體，之后開始脫氧核糖核酸(DNA)單鏈擴(kuò)增，將最后提純的單鏈DNA進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)。比較不同菌種對(duì)與結(jié)合肽的親和力，試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察記錄不同菌體結(jié)合肽的結(jié)合活性，并記錄ELISA檢測(cè)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采取t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料率的比較采取χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

ELISA檢測(cè)結(jié)果見表1。

表1 不同桿菌ELISA檢測(cè)結(jié)果

由表1可見，結(jié)核分枝桿菌與H37Rv結(jié)合肽的結(jié)合能力最強(qiáng)，其余分枝桿菌(除結(jié)核分枝桿菌外的分枝桿菌)較弱，非分枝桿菌的親和力最弱，接近于無，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

對(duì)于結(jié)核病的治療最主要還是在于早發(fā)現(xiàn)、早治療，為了解決這個(gè)問題，許多專家都致力于研究結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè)［5］。為了能準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)病菌，本研究通過觀察結(jié)核分枝桿菌H37Rv結(jié)合肽的篩選，得到了有效的檢測(cè)方法，可以在體外準(zhǔn)確檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的存在，為結(jié)核患者及早診斷提供了有效檢查手段，為治療提供了有力保障。結(jié)核分枝桿菌，H37Rv結(jié)合肽的篩選可以發(fā)現(xiàn)滅活結(jié)核分枝桿菌，H37Rv靶分子的親和力最強(qiáng)［6］，有利于檢測(cè)的進(jìn)行。

通過肽庫進(jìn)行篩選檢驗(yàn)結(jié)核分枝桿菌H37Rv結(jié)合肽，能夠有效的對(duì)其親和力進(jìn)行檢測(cè)，可以將噬菌體富集起來，明顯看出親和力的程度。在篩選時(shí)加入恥垢分枝桿菌進(jìn)行特異性結(jié)合后［7］，可以使菌體的特異性提高，但不會(huì)影響最終結(jié)果。因?yàn)榻Y(jié)核分枝桿菌的生長方式是慢性生長，而恥垢分枝桿菌的生長方式是快速生長的，可以區(qū)分開來。采用ELISA對(duì)結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn)，增加準(zhǔn)確性［9］，并且簡單易行，是有效的輔助檢查手段。在熒光顯微鏡下可以發(fā)現(xiàn)，結(jié)核分枝桿菌H37Rv的熒光效果最強(qiáng)，其余分枝桿菌效果不明顯［8］，非分枝桿菌無熒光效應(yīng)，可以明顯的區(qū)分桿菌的種類。通過本研究的結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，結(jié)合分枝桿菌H37Rv結(jié)合肽是一種良好的體外檢測(cè)結(jié)核桿菌方法。

綜上所述，結(jié)核分枝桿菌H37Rv結(jié)合肽的篩選有助于體外檢測(cè)結(jié)核桿菌，并且可以發(fā)現(xiàn)H37Rv結(jié)合肽與結(jié)核分枝桿菌的親和力最好，能準(zhǔn)確檢測(cè)出結(jié)核桿菌，是有效的體外檢測(cè)方法，對(duì)于結(jié)核患者病菌及早發(fā)現(xiàn)提供了有效檢測(cè)方法，是值得臨床上進(jìn)行使用的輔助檢查方法。

［1］ 楊華，張麗婷，李連青，等.結(jié)核分枝桿菌H37Rv結(jié)合肽的篩選研究［J］.中華結(jié)核和呼吸雜志，2011，34(3):192－196.

［2］ 張麗婷，胡忠義，李連青，等.結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白64抗原模擬表位的篩選研究［J］.中華結(jié)核和呼吸雜志，2010，33(5):382－383.

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［6］ 何霞，譚守勇，羅春明，等.應(yīng)用MPT64為靶標(biāo)快速檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌生長的研究［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2010，31(2):222－224.

［7］ 陸學(xué)東，孫會(huì)平，張銀輝.免疫印跡技術(shù)在臨床結(jié)核病血清學(xué)診斷中的應(yīng)用［J］.中華結(jié)核和呼吸雜志，1993，16(6):357－359.

［8］ 王盛蘭，陳玲，張建勇，等.結(jié)核分枝桿菌廣泛耐藥株與耐多藥株菌體蛋白質(zhì)組學(xué)比較研究［J］.中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2011，27(9):820－824.