洪麗萍 黃加秀 蔡亞蘭 宗艷艷 謝春娟

（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，江蘇 泰州 225321）

H PLC測(cè)定清潔驗(yàn)證殘留物非諾貝特的含量

洪麗萍 黃加秀 蔡亞蘭 宗艷艷 謝春娟

（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，江蘇 泰州 225321）

目的：建立清潔驗(yàn)證中殘留物非諾貝特含量測(cè)定的高效液相色譜法。方法：色譜柱為 Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為水（磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5）-乙腈（30∶70），檢測(cè)波長(zhǎng)：286 nm，流速：1.0 mL/min，柱溫：25℃，進(jìn)樣量：20 μL。結(jié)果：非諾貝特在0.09～ 0.90 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r2=0.999 4；回收率：99.69%，RSD=0.16%（n=9）。結(jié)論：該法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，可以用于清潔驗(yàn)證殘留物非諾貝特的定量分析。

高效液相色譜法；清潔驗(yàn)證；殘留物；非諾貝特

非諾貝特是降低三酰甘油的首選藥物之一[1]，為第2代苯氧芳酸類藥物，與吉非貝齊、苯扎貝特同屬于貝特類調(diào)脂藥物，于1998年在美國(guó)上市。非諾貝特可顯著降低三酰甘油（TG）、適度降低總膽固醇（TC）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平，并能升高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平，發(fā)揮良好的調(diào)脂作用，因而在臨床上得到了廣泛應(yīng)用。其制劑非諾貝特緩釋片是揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)的主打暢銷品種，用于調(diào)血脂，適用于經(jīng)適當(dāng)和正規(guī)飲食療法不能控制的高膽固醇血癥和/或高三酰甘油血癥，因其顯著療效而受到廣大患者的一致好評(píng)。本研究主要圍繞非諾貝特緩釋片清潔驗(yàn)證中的殘留物非諾貝特開展研究，本研究參考《中華人民共和國(guó)藥典》[2]和原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBH04472014對(duì)主要活性成分非諾貝特的含量方法進(jìn)行了研究，通過對(duì)非諾貝特緩釋片生產(chǎn)用設(shè)備清潔驗(yàn)證的檢驗(yàn)，確定該方法可以用于該產(chǎn)品清潔驗(yàn)證殘留物的檢測(cè)，保證清潔驗(yàn)證的準(zhǔn)確性，并對(duì)每個(gè)驗(yàn)證參數(shù)設(shè)立可接受標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果表明高效液相色譜法（HPLC）簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，可以用于清潔驗(yàn)證殘留物非諾貝特的定量分析。

揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)非諾貝特緩釋片的固體制劑生產(chǎn)車間，是根據(jù)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》及可生產(chǎn)品種特性、工藝流程及相應(yīng)法律制度要求，對(duì)廠房、生產(chǎn)設(shè)施和設(shè)備進(jìn)行了合理設(shè)計(jì)和布局，設(shè)計(jì)為多品種共線生產(chǎn)。依據(jù)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》第四十六條（為降低污染和交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)，廠房、生產(chǎn)設(shè)施和設(shè)備應(yīng)當(dāng)根據(jù)所生產(chǎn)藥品的特性、工藝流程及相應(yīng)潔凈度級(jí)別要求合理設(shè)計(jì)、布局和使用，并符合要求）規(guī)定，對(duì)生產(chǎn)安全和有效性進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，以期對(duì)生產(chǎn)安全風(fēng)險(xiǎn)能正確認(rèn)識(shí)并采取降低安全風(fēng)險(xiǎn)意見的控制措施，使生產(chǎn)質(zhì)量及風(fēng)險(xiǎn)降低到可以接受的水平。進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估所用的方法遵循失效模式與影響分析技術(shù)（FMEA），包括：①分析藥物活性成分（APIs）及活性物質(zhì)溶解度是否為該生產(chǎn)線所生產(chǎn)品種中最低的，即是否為最難清潔的成份；②理論殘留限度是否為參照物組中最低限；③根據(jù)①、②分析，得出初步結(jié)論，評(píng)估是否需要開展清潔驗(yàn)證。

根據(jù)《藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南》，本次采用生物學(xué)活性限度，即最低日治療劑量（MTDD）的1/1 000作為確定最低殘留量的依據(jù)。清潔的目的是保證在使用產(chǎn)品B時(shí)，不出現(xiàn)A產(chǎn)品的生理作用。B產(chǎn)品每天服用次數(shù)多，安全性下降，因此，上述MTDD的l/1 000系指B產(chǎn)品最多日使用制劑數(shù)中允許A產(chǎn)品殘存的量，不超過因服用B產(chǎn)品而帶入體內(nèi)的A產(chǎn)品的最低日治療劑量的l/1 000。MTDD數(shù)據(jù)來(lái)自藥品標(biāo)簽和使用說(shuō)明書上的有關(guān)數(shù)據(jù)計(jì)算：

MTDD＝ 每次給藥片（粒）數(shù) ×每片有效成分含量 ×每日最少給藥次數(shù)。

根據(jù)MTDD計(jì)算單位面積殘留物限度的過程如下：

①將相關(guān)設(shè)備生產(chǎn)的所有產(chǎn)品列表，在表中相應(yīng)位置填寫MTDD（mg），最小生產(chǎn)批量B（kg），單個(gè)制劑的質(zhì)量Uw（g）和每日最多使用制劑數(shù)Dd；

②計(jì)算設(shè)備內(nèi)表面積SA（cm2）；

③取最小批量B為計(jì)算參數(shù)；

④取對(duì)應(yīng)產(chǎn)品單位制劑質(zhì)量Uw和日最大使用成品（制劑數(shù)）Dd為計(jì)算參數(shù)；

⑤計(jì)算該批產(chǎn)品理論成品數(shù)U：

U＝1 000 B/Uw；

⑥計(jì)算設(shè)備表面殘留物限度Ld：

Ld＝ 允許殘留物總量/SA；

公司共線產(chǎn)品相關(guān)信息見表1。公司共線產(chǎn)品化學(xué)殘留計(jì)算結(jié)果見表2。

表1 共線產(chǎn)品信息

表2 公司共線產(chǎn)品化學(xué)殘留計(jì)算結(jié)果

經(jīng)對(duì)以上所列2個(gè)產(chǎn)品進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，鹽酸西替利嗪片的設(shè)備與非諾貝特緩釋片共用，清潔方法較非諾貝特緩釋片易清潔，能滿足限度要求，無(wú)交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)，因而需對(duì)非諾貝特緩釋片進(jìn)行清潔驗(yàn)證，并對(duì)殘留物非諾貝特進(jìn)行檢測(cè)以確定殘留量是否超過限度，從而評(píng)價(jià)清潔是否有效，找到準(zhǔn)確可靠的定量檢測(cè)非諾貝特殘留量的方法并通過對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證考察，可確認(rèn)目前揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司采取的防止污染和交叉污染、防止混淆與差錯(cuò)的措施適用于公司日常生產(chǎn)操作，可以確定該公司固體制劑生產(chǎn)車間用于多產(chǎn)品的生產(chǎn)是可行的，無(wú)交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。

DES都是通過氫鍵受體和氫鍵供體通過氫鍵連接成的混合鹽溶液。最常用的氫鍵受體是季銨鹽類的氯化膽堿，氯化膽堿價(jià)格低廉、可生物溶解、安全無(wú)毒，可以從生物質(zhì)能源或者化石能源中提取。氯化膽堿可以與尿素、丙三醇、多元醇等安全廉價(jià)的氫鍵供體結(jié)合形成DES(見圖5)。

非諾貝特緩釋片生產(chǎn)用設(shè)備清潔驗(yàn)證的效果評(píng)價(jià)是通過HPLC進(jìn)行的，采用擦拭法取樣。

擦拭取樣的殘留量=設(shè)備中的總殘留限度/設(shè)備總內(nèi)表面積，

計(jì)算得出非諾貝特緩釋片清潔驗(yàn)證中殘留物非諾貝特的殘留限度L=0.059 μg/cm2，試驗(yàn)中模擬設(shè)備材質(zhì)的平板面積為100 cm2，溶于10 mL的乙醇中，其Ld值為0.59 μg/mL，因此以0.59 μg/mL作為殘留物非諾貝特的取樣回收率試驗(yàn)濃度。

1 試驗(yàn)儀器與試驗(yàn)樣品

瑞士 Mettler Toledo XP205電子天平，美國(guó)GF315振蕩器，美國(guó)安捷倫公司的Agilent1260高效液相色譜儀。

非諾貝特對(duì)照品（批號(hào)：100733-200401，含量：100.0%，來(lái)源：中國(guó)食品藥品檢定研究院）；乙醇（AR，批號(hào)：20141023，廠家：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；磷酸（AR，批號(hào)：20140305，廠家：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；乙腈（HPLC，批號(hào)：1734530416，廠家：默克公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

流動(dòng)相配制：水（磷酸調(diào)節(jié) pH至 2.5）-乙腈（30∶70）；色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；進(jìn)樣體積：20 μL；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：286 nm。

2.2 線性關(guān)系試驗(yàn)

Y=52.956 X＋ 0.344 9，

相關(guān)系數(shù)r2=0.999 4；結(jié)果表明該方法在0.09～ 0.903 8 μg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，考慮進(jìn)樣體積為20 μL，表明該方法進(jìn)樣量在1.8～ 18 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表3 線性溶液的配制

表4 線性溶液的配制

2.3 定量限

線性研究中合適濃度的溶液逐步稀釋，確定定量限：移取線性檢測(cè)項(xiàng)下L8溶液1 mL置于10 mL容量瓶中，配制成濃度為0.090 4 μg/mL的溶液，作為定量限檢測(cè)溶液，結(jié)果定量限為 1.8 ng；S/N=10.3。

2.4 精密度試驗(yàn)

取濃度為 0.6 μg/mL的非諾貝特對(duì)照品溶液，按方法操作，重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果6次測(cè)定的RSD值為0.2%，表明該方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取濃度為 0.602 5 μg/mL的供試品溶液,在 25℃下放置考察，放置0，4，8，24 h之后分別測(cè)定1次，共測(cè)定4次，4次峰面積值的RSD值為0.5%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 回收率試驗(yàn)

取已知含量的非諾貝特對(duì)照品溶液9份，分別精密加入一定量的非諾貝特對(duì)照品溶液（濃度為0.48，0.60，0.72 μg/mL）各3份，按上述色譜條件分別進(jìn)樣20 μL，根據(jù)測(cè)得峰面積值計(jì)算測(cè)得濃度，測(cè)得濃度與理論濃度之比即為回收率，計(jì)算RSD值，計(jì)算得平均回收率為99.69%，RSD為 0.16%，結(jié)果見表5。

表5 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

3 結(jié)論

非諾貝特緩釋片清潔驗(yàn)證中HPLC測(cè)定非諾貝特定量限為1.8 ng，即0.09 μg/mL。線性濃度范圍為0.09～ 0.90 μg/mL；樣品在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。試驗(yàn)的驗(yàn)證結(jié)果表明HPLC測(cè)定清潔驗(yàn)證殘留物非諾貝特的含量紫外光度法（UV）測(cè)定可行，該方法可用于非諾貝特的定量分析。

同時(shí)在清潔驗(yàn)證中需要注意：①要不斷加強(qiáng)對(duì)員工在日常工作中的培訓(xùn)與管理，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作的意識(shí)和行為，確保有效的清潔和清潔狀態(tài)維護(hù)。②在清潔驗(yàn)證工作中，需做好清潔驗(yàn)證中清潔效果的有效性及可行性確認(rèn)工作，特別是對(duì)于新增的產(chǎn)品、改變批量的產(chǎn)品、變更設(shè)備等重要情況需要作好質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估以確定驗(yàn)證內(nèi)容的范圍和深度以及在新的情況下生產(chǎn)車間多產(chǎn)品共用的可行性，重點(diǎn)放在檢查防止污染和交叉污染、防止混淆與差錯(cuò)的措施并評(píng)估其適用性和有效性上。

[1] 李芳，俸靈林，閻超.非諾貝特制劑研究進(jìn)展[J].世界臨床醫(yī)藥，2011，32（9）：552-557.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

Determination of Fenofibrate Residues in Cleaning Validation of Fenofibrate Sustained-release Tablets by HPLC

Hong Liping，Huang Jiaxiu，Cai Yalan，Zong Yanyan，Xie Chunjuan（Yangtz River Pharmacitical Group Co.，Ltd.，Jiangsu Taizhou 225321，China）

Objective：To establish a method for the content determination of fenofibrate residues in the cleaning validation of fenofibrate sustained-release tablets by HPLC.Methods:Separation was carried out using Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）column with phosphoric acid solution（pH=2.5）-acetonitrile（30∶70）as the mobile phase，the detection wavelength was at 286 nm，the flow was 1.0 mL/min and the column temperature was at 25℃ with sample size of 20 μL.Results:The linear range of fenofibrate concentration was from 0.09 to 0.90 μg/mL and the correlation coefficient was 0.999 4.The average recovery of samples was 99.69%and RSD was 0.16%（n=9）.Conclusion:This method is convenient and accurate without interference and is suitable for the quantitative determination of fenofibrate residues in the cleaning validation of fenofibrate sustained-release tablets.

HPLC；Cleaning Validation；Residue；Fenofibrate

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.08.007

2015-05-28）

洪麗萍，女，藥師。研究方向：藥物分析和標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：hongliping@yangzijiang.com