楊慶芳郭春燕，2

(1. 晉中職業(yè)技術(shù)學(xué)院,山西晉中 030600; 2.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院,新疆石河子 832000)

黑雞與普通肉雞免疫球蛋白IgG差異分析

楊慶芳1郭春燕1，2

(1. 晉中職業(yè)技術(shù)學(xué)院,山西晉中 030600; 2.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院,新疆石河子 832000)

為了探究黑雞和普通肉雞免疫球蛋白IgG的差異。分別分離黑雞和普通商品肉雞的血清,采用鹽析法從中提取免疫球蛋白IgG。然后進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳,通過對比相同濃度下,黑雞和普通商品肉雞IgG的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳輕鏈和重鏈的蛋白量,通過試驗得出普通商品雞IgG的輕鏈和重鏈的蛋白量都比和田黑雞多,說明普通商品雞血清中IgG的含量要比和田黑雞的多。

黑雞;免疫球蛋白;IgG

1 前言

黑雞（尼雅型）是民豐縣一種古老、珍貴而獨特的地方家禽品種，隨著當(dāng)?shù)貙ζ渲鹊奶岣?，目前黑雞廣泛受到關(guān)注。免疫球蛋白（immuno globulin，IG），是由抗體（antibody）和其相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性結(jié)合而生成的一類生物活性物質(zhì)[1]。它是機(jī)體對抗原物質(zhì)產(chǎn)生免疫應(yīng)答而產(chǎn)生的重要產(chǎn)物，具有多種免疫功能?？贵w（本質(zhì)為IG）根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗原性差異，將其分為IgG、IgM、IgA等。其中免疫球蛋白IgG在動物體的血清中含量最高（占血清IG含量的75%左右）[2]，是動物體內(nèi)免疫最關(guān)鍵的組成物質(zhì)之一[3]。其被廣泛應(yīng)用于預(yù)防獸醫(yī)的疾病預(yù)防、臨床獸醫(yī)診療、獸藥生物制藥和疫苗等各個領(lǐng)域。因此，本文將黑雞的免疫球蛋白IgG與普通肉雞進(jìn)行對比，以期探索黑雞與普通肉雞的免疫差異，為黑雞的推廣提供理論依據(jù)。

2 材料與方法

2.1 試驗材料及主要儀器

試驗所選普通商品肉雞和購自民豐縣的和田黑雞。試驗所用試劑為：枸櫞酸鈉、Hark’s液（無Ca2+和Mg2+）、磷酸緩沖鹽溶液（pH=7.4）、硫酸銨溶液（飽和）、硫酸銨溶液（50%）、磷酸緩沖液（0.005mol/L，pH=8.0）、瑞氏染液、工作緩沖液、姬姆薩工作染液、奈氏試劑（Nesslers reagent）、雞紅細(xì)胞（CRBC）抗體（溶血素）（效價的1/2）及1mmol/L EDTA。蛋白電泳所用試劑為：30%丙稀酰胺、Tris（pH=8.8和6.8）、10% SDS（pH=7.2）、10% 過硫酸銨（現(xiàn)配現(xiàn)用）、DTT及TEMED。雞細(xì)胞懸液：用一定量的抗凝雞血離心，取壓積的CRBC和Hark’s液（無Ca2+和Mg2+）配置成4% CRBC懸液（濃度約為2×108/mL）。

試驗所用主要儀器：超低溫冰柜（-80℃） DN-HW328 型美菱有限責(zé)任公司；超凈工作臺 SW-CJ-2F 型 上海博訊實業(yè)有限公司；雪花制冰機(jī) FM180 型 北京長流科技儀器公司；電熱恒溫水浴鍋 OK-S26 型 上海精宏有限公司；高速臺式冷凍離心機(jī) Neofuge15R 型 力康發(fā)展有限公司；低速臺式離心機(jī) TDL-5 型 上海安亭科學(xué)儀器廠；垂直板狀電泳儀 DYC2-24DIV 型 北京六一儀器制造廠；電腦三恒多用電泳儀 DYY-10C 型；全自動生物顯微鏡 DP70-olysLIA 型 日本奧林巴斯公司；紫外可見分光光度計Golds 54型 上海棱光有限公司

2.2 試驗方法

（1）采血，先在注射器中抽入2mL的抗凝劑枸櫞酸鈉再分別從供試雞頸靜脈抽取20mL的新鮮血液（血液與抗凝劑10：1）。（2）分離淋巴細(xì)胞[4]，取上述抗凝血10mL加入等量的Hark’s液，混勻，吸取2mL該液，再加入1mL淋巴細(xì)胞分離液，離心（2000 rpm，35min）（3）IgG的分離和純化參照安燁等的方法進(jìn)行[5]。（4）IgG濃度的測定[6]，利用紫外可見分光光度計測定OD280。（5）SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（包括灌制、點樣、電泳、剝膠、染色、脫色、成像）按照林范天等的方法制作[7]。

3 結(jié)果與分析

3.1 兩種雞血細(xì)胞分離圖及免疫球蛋白IgG濃度

試驗表明兩種雞經(jīng)過分離均顯現(xiàn)出明顯的血漿液層、淋巴細(xì)胞層和紅細(xì)胞層，經(jīng)過紫外可見分光光度計測定兩種雞的OD280為1.78（普通商品肉雞）和1.76（黑雞），因此可判斷兩種雞的免疫球蛋白IgG濃度近似一致。

3.2 兩種雞SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析

通過IgG的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳試驗，可以看出普通商品肉雞與黑雞跑出兩條清晰的條帶。Mark為蛋白量的“標(biāo)尺”。通過對比相同濃度下，普通商品肉雞與黑雞IgG的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳重鏈（H鏈）和輕鏈（L鏈）的蛋白量，H鏈條帶在（44.3～97.2）KDα之間，L鏈條帶在（20.1～29.0）KDα之間，該結(jié)果符合IgG的H鏈帶和L鏈帶的分子量?？煽闯銎胀ㄉ唐冯uIgG的H鏈和L鏈的蛋白量都比和田黑雞多。說明普通商品肉雞血清中IgG的含量要比和田雞的多。

4 結(jié)論與討論

IgG是一種以單體分子形式存在的免疫球蛋白分子。所有種類的免疫球蛋白單體分子結(jié)構(gòu)都是相像的，即有兩條相同的H鏈和L鏈及四條肽鏈構(gòu)成的“Y”字形的分子[8]。其中，H鏈分子量為50000～77000D，大約由420～440個氨基酸（AA）組成。其分為H鏈的可變區(qū)（VH）和恒定區(qū)（CH）。在H鏈的可變區(qū)，有四個區(qū)域（殘基位置分別位于31～37，51～58，84～91，101～110）的AA變異度最大，稱為高變區(qū)，其余的AA變化相對較小，將其稱為骨架區(qū)。L鏈的分子量大約為22500D，由213～214個AA組成。L鏈與H鏈相似，分為L鏈的可變區(qū)（VL）和L鏈的恒定區(qū)（CL）。在L鏈的VL內(nèi)部有三個高變區(qū)（AA殘基位置位于26～32，48～55，90～95），其AA變化特別大，其余AA變化較小的區(qū)域，將其稱為骨架區(qū)[9]。所以對于同種動物，H鏈主要決定了免疫球蛋白的差異，本試驗普通肉雞免疫球蛋白IgG量高于黑雞，說明其免疫能力可能高于黑雞。

本研究僅對兩種雞免疫球蛋白IgG的差異進(jìn)行了分析，其余免疫球蛋白IgA、IgM、IgD等在動物體免疫能力方面也發(fā)揮著重要作用，所以，希望在今后的研究中繼續(xù)加強(qiáng)對于黑雞免疫蛋白的研究，以期為黑雞的推廣提供依據(jù)。

[1] 李友昌.復(fù)方微量元素注射液“生命元”對波爾山羊免疫功能的影響研究[D].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

楊慶芳（1973—），女，碩士，講師，研究方向：動物病理。

郭春燕（1979—），女，碩士，從事專業(yè)：畜牧獸醫(yī)專業(yè)的教學(xué)與研究。