蔡 萍 李躍輝 肖 娟 萬 丹 戎 寬 匡建軍

(1 湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所，長沙，410013；2 楊永華全國名老中醫(yī)藥專家傳承工作室，長沙，410013；3 湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，長沙，410006)

中藥研究

鐵包金按摩膏中鐵包金超微粉與飲片質(zhì)量對比研究

蔡 萍1，2李躍輝1，2肖 娟1，2萬 丹1，2戎 寬1匡建軍3

(1 湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所，長沙，410013；2 楊永華全國名老中醫(yī)藥專家傳承工作室，長沙，410013；3 湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，長沙，410006)

目的：采用HPLC建立鐵包金按摩膏中鐵包金中大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量測定方法，比較鐵包金超微粉與飲片中上述3種成分的含量。方法：Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.2%甲酸水溶液，梯度洗脫；流速：1.0 mL/min；檢測波長：290 nm；柱溫：25 ℃。結(jié)果：大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的線性范圍分別為1.13～51 μg/mL(r2=0.999 9)、1.27～57 μg/mL(r2=0.999 5)和2.22～40 μg/mL(r2=0.999 8)，加樣回收率分別為99.58%、99.47%和99.27%，RSD值分別為1.18%、1.49%和1.52%。結(jié)論：該方法靈敏度高，精密度好，對比超微粉末與飲片中3種成分含量發(fā)現(xiàn)，在相同提取方法中，超微粉中3種成分含量明顯高于飲片，超微粉技術(shù)可提高鐵包金中3種化學(xué)成分的提取率。

鐵包金；超微粉；HPLC法；大黃素；大黃酚；大黃素甲醚

超微粉[1-3]是指平均粒徑在1～75 μm之間的顆粒，它興起于80年代，是一門跨學(xué)科、跨行業(yè)的高新技術(shù)。該技術(shù)被引入中草藥加工領(lǐng)域，使藥材細(xì)胞破壁率達(dá)90%以上，形成微米、納米級中草藥。由于粒徑的比表面積增加，能大大提高中草藥中有效成分的溶出率[4-5]，提高中草藥利用率，減少中草藥資源的浪費(fèi)[6-7]。鐵包金按摩膏主要由鐵包金、大黃、生川烏、生草烏、木瓜、白芷、木鱉子、三棱、莪術(shù)等23味中藥精制而成。具有活血化瘀、通絡(luò)止痛的功效，鐵包金[8]作為君藥主要含有黃酮類[9]、苯酚類[10]、蒽醌類[11]、萜類[12]、木脂素類等成分。其中蒽醌類成分主要包含大黃素、大黃酚和大黃素甲醚[13]，徐煜純[14]等首次采用HPLC測定了壯藥鐵包金中大黃酚和大黃素質(zhì)量分?jǐn)?shù)，發(fā)現(xiàn)細(xì)葉勾兒茶根、莖中蒽醌類成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。研究表明[11]大黃素和大黃酚對D2半乳糖胺誘導(dǎo)的WB—F344大鼠肝表皮細(xì)胞毒性有一定保護(hù)作用，且二者具有清除氧自由基的作用，是鐵包金能夠起到抗腫瘤、肺結(jié)核咯血和黃疸型肝炎等治療作用的有效成分之一。大黃素甲醚具有很強(qiáng)的抗炎作用。Lee[15]等研究發(fā)現(xiàn)大黃素甲醚能夠抑制核因子激活內(nèi)毒素細(xì)胞和促分裂原激活蛋白激酶，從而發(fā)揮其抗炎的作用。

本文采用高效液相色譜法測定鐵包金按摩膏中鐵包金藥材中大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量，對比鐵包金超微粉與飲片中上述3種成分的提取率，探索提高其有效成分的入藥比率，為更好地開發(fā)鐵包金按摩膏的藥用價(jià)值提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；AL-204電子分析天平(Mettler Toledo)；KQ5200DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 大黃酚(批號：110796-201118)、大黃素(批號：110758-200110)大黃素甲醚(110758-201013)對照品均購自中國食品藥品檢定研究院。HPLC級甲醇、超純水；其余試劑均為分析純。鐵包金藥材由湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所鑒定為多花勾兒茶莖。

圖1 1.大黃素：2.大黃酚：3.大黃素甲醚

注：對照品溶液(A)、鐵包金飲片供試品(B)和鐵包金超微粉供試品(C)的HPLC色譜圖

2 方法

2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：A為甲醇，B為0.2%甲酸水溶液，梯度洗脫(0～30 min，65%～85% A；32～40 min，85%～100% A)；流速為1.0 mL/min；柱溫為25 ℃；檢測波長290 nm；進(jìn)樣量：10 μL；分析時(shí)間為40 min。色譜圖見圖1。

2.2 對照品制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密稱取大黃素、大黃酚和大黃素甲醚適量，置于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻。大黃素、大黃酚和大黃素甲醚濃度分別為102 μg/mL、114 μg/mL、40 μg/mL。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及線性關(guān)系考察：精密吸取上述3種對照品溶液適量，配置成混合對照品溶液，過0.45 μm微孔濾膜。注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表1。

表1 3種對照品線性方程及相關(guān)系數(shù)

2.3 樣品的制備

2.3.1 超微粉體的制備 鐵包金藥材經(jīng)粉碎成粗粉，在60 ℃干燥至水分約為6%，振幅為100 HZ，振動(dòng)粉碎時(shí)間為10 min，粉碎溫度為0～10 ℃，經(jīng)測定：粒度<75 μm的占96.59%。

2.3.2 供試品溶液的制備 精密稱取鐵包金超微粉末與飲片各約4 g，置錐形瓶中，加入甲醇25 mL，稱重，置水浴中加熱回流1 h，取出，放冷，再稱重。用甲醇補(bǔ)足減失量，搖勻、過濾置于具塞錐形瓶中，水浴蒸干至少量，精密加入8%(體積分?jǐn)?shù)，下同)HCl溶液25 mL，超聲5 min，再加入二氯甲烷25 mL，置水浴中加熱回流30 min，取出，冷卻。置于分液漏斗中，用少量二氯甲烷洗滌錐形瓶，洗液合并。取二氯甲烷層，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙狻Ｒ浦? mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻即得。鐵包金超微粉及飲片樣品圖見圖1。

2.4 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取大黃素102 μg/mL、大黃酚114 μg/mL和大黃素甲醚40 μg/m對照品溶液2.5 mL、2.5 mL和5 mL至20 mL容量瓶中，加甲醇定容，配置制成混合對照品溶液(大黃素12.75 μg/mL、大黃酚14.25 μg/mL和大黃素甲醚10 μg/mL)，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積RSD分別為3.73%、3.64%和3.43%(n=6)，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取1號鐵包金超微粉，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備得到供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12、24、48 h進(jìn)樣。計(jì)算大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量，其RSD值分別為0.83%、0.81%和1.11%，表明在48 h內(nèi)供試液穩(wěn)定性良好。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 稱取2號鐵包金超微粉末樣品4.5206 g，按照2.4.2供試品處理方法對樣品進(jìn)行處理。從供試液中吸取供試品600 μL，依次加入大黃素對照品100 μL(102 μg/mL)、大黃酚對照品100 μL(114 μg/mL)和大黃素甲醚對照品200 μL(40 μg/mL)混勻，微孔濾膜濾過，得加樣回收液，重復(fù)做6份，進(jìn)樣10 μL，測定峰面積。大黃素、大黃酚及大黃素甲醚的平均回收率分別為99.58%、99.47%和99.27%，其RSD值分別為1.18%、1.49%和1.52%，

2.7 樣品測定 本實(shí)驗(yàn)測定了湖南產(chǎn)地3個(gè)批次的樣品。樣品處理方法見“2.4.2”供試品溶液的制備，得供試品，按上述色譜條件測定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。含量測定結(jié)果見表2。

表2 鐵包金超微粉與飲片中3種化學(xué)成分含量測定結(jié)果

3 結(jié)果

從表中可以看出超微粉中大黃酚、大黃素和大黃素甲醚的含量均高于飲片。鐵包金屬于根莖類藥材，常以飲片入藥，其有效成分很難充分溶解出來，鐵包金超微粉3種成分含量高于飲片，可能由于細(xì)胞破壁率提高，促進(jìn)了細(xì)胞內(nèi)的有效成分在短時(shí)間內(nèi)大量溶出，提高了提取效率。

4 討論

本文旨在建立高效液相色譜法測定鐵包金按摩膏中鐵包金超微粉與飲片中大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量測定。主要研究鐵包金超微粉與飲片中上述3種成分對比研究實(shí)驗(yàn)。文章考察了流動(dòng)相組成甲醇和水，以及甲醇和0.2%甲酸水。實(shí)驗(yàn)表明，在水相中加入0.2%的甲酸有利于改善各個(gè)化合物的峰性。同時(shí)采用梯度洗脫，3種化合物得到快速分離。本文測定了湖南產(chǎn)地3批次鐵包金超微粉與飲片中大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，超微粉中3種成分的含量均高于同批次飲片。在同一提取方法下超微粉體技術(shù)很好地提高鐵包金藥材中這3種成分的提取率，增加入藥比率，采用超微粉碎技術(shù)可節(jié)省中藥材資源，促進(jìn)中藥產(chǎn)業(yè)長足發(fā)展。

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(2015-02-06收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

Quality Comparison between Submicron Powder and Slices in Berchemia Lineata Massage Cream

Cai Ping1, 2, Li Yaohui1, 2, Xiao Juan1, 2, Wan Dan1, 2, Rong Kuang1, Kuang Jianjun3

(1InstituteofChineseMateriaMedia,HunanAcademyofTraditionalChineseMedicine(TCM),HunanChangsha410013,China；2InheritanceStudioofYangYong-hua,HunanChangsha，410013,China；3TheAffiliatedHospitalofHunanAcademyofChineseMedicine,Changsha410006,China)

Objective:Using HPLC to determine the contents of emodin, chrysophanol, and physcion in Berchemia Lineata, which was used to produce berchemia lineata massage cream, and to compare the he extraction rates of these three components in the berchemia lineata submicron powder and slices. Methods: Using C18column (250 mm×4.6 mm, 5μm), reverse HPLC, mobile phase: water with 0.2% formic acid, ethanol. Gradient elution system were made in this methond. Flow velocity:1.0 mL/min. Column temperature: 25 ℃. Determine wavelength: 290 nm. Results: The linear range of Emodin, chrysophanol, and physcion in berchemia lineata are 1.13～51 μg/ml (r2=0.999 9), 1.27～57 μg/ml(r2=0.999 5) and 2.22～40 μg/ml (r2=0.999 8) respectively. The standard recovery of emodin, chrysophanol, and physcion are 100.67% withRSD1.59%, 99.72% withRSD1.20% and 100.29% withRSD1.09% respectively. Conclusion: This method has high accuracy and sensitivity. Also, under the same extraction method, the contents of three components in submicron powder are obviously higher than those in the slices, meaning that ultra structure-powder technique could improve the extraction efficiency of these three components.

Berchemia Lineata; Submicron powder; HPLC; Emodin; Chrysophanol; Physcion

湖南省中藥管理局項(xiàng)目(編號：2013133)

蔡萍(1975.7—)，女，碩士研究生，副研究員，研究方向：中藥制劑及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，E-mail:330343348@qq.com

匡建軍(1973.4—)，男，博士研究生，研究員，副院長，研究方向：中西結(jié)合對脊柱骨關(guān)節(jié)病的防治與研究，E-mail:973541411@qq.com

R284.2

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.11.036