金紅巖 西藏職業(yè)技術(shù)學(xué)院850030

李封賽 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院150030

封家旺 西藏職業(yè)技術(shù)學(xué)院850030

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在動(dòng)物性食品獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

金紅巖 西藏職業(yè)技術(shù)學(xué)院850030

李封賽 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院150030

封家旺 西藏職業(yè)技術(shù)學(xué)院850030

近年來(lái)，動(dòng)物性食品安全問(wèn)題被廣泛關(guān)注，特別是動(dòng)物性食品獸藥殘留問(wèn)題。因此，對(duì)獸藥殘留檢測(cè)方法的研究成為熱點(diǎn)，特別是獸藥殘留問(wèn)題，如何建立快速、靈敏度高和高通量的檢測(cè)技術(shù)尤其受到關(guān)注。目前，針對(duì)獸藥殘留有多種檢測(cè)方法，但多數(shù)不夠完善，存在一定弊端，相比之下，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-LC/MS）可實(shí)現(xiàn)高效分離，定性和定量準(zhǔn)確度高，日益成為獸藥殘留檢測(cè)的確證方法［1］。本文重點(diǎn)分析HPLC-LC/MS在動(dòng)物性食品獸藥殘留分析領(lǐng)域的應(yīng)用。

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；獸藥殘留；檢測(cè)

獸藥被用于動(dòng)物疾病的防控，但由于不合理的使用，導(dǎo)致獸藥在動(dòng)物體內(nèi)蓄積，人類(lèi)食入獸藥殘留超標(biāo)的食品，也會(huì)導(dǎo)致藥物蓄積于體內(nèi)，影響健康。在動(dòng)物性食品獸藥殘留檢測(cè)方法中，HPLC-LC/MS可實(shí)現(xiàn)在一級(jí)質(zhì)譜條件下獲得待見(jiàn)組分的準(zhǔn)分子離子峰，并將準(zhǔn)分子離子裂解，獲得子離子峰，準(zhǔn)確辨別目標(biāo)化合物，排除基體干擾，具備靈敏度高、進(jìn)樣量少和基體干擾小等特點(diǎn)。因此，HPLC-LC/MS已成為較先進(jìn)的動(dòng)物性食品獸藥殘留檢測(cè)方法。近年來(lái)，各國(guó)學(xué)者不斷對(duì)HPLC-LC/MS檢測(cè)方法進(jìn)行創(chuàng)新和改進(jìn)，為獸藥殘留監(jiān)控體系的建立和完善提供保障［2］。

1　獸藥殘留原因分析

導(dǎo)致動(dòng)物體內(nèi)獸藥殘留超標(biāo)的原因很多，但多數(shù)是由于養(yǎng)殖過(guò)程中用藥不合理造成的，主要體現(xiàn)在不能?chē)?yán)格執(zhí)行給藥時(shí)間和給藥劑量，不按規(guī)定部位給藥，未嚴(yán)格執(zhí)行獸藥的休藥期，為躲避宰前檢查而濫用獸藥，使用違禁獸藥和養(yǎng)殖設(shè)備遭受污染［3］等。

2　樣品前處理

（1）提取方法。索氏提?。撼浞址治鎏崛∥锏臒岱€(wěn)定性，保證不易分解。本方法無(wú)需轉(zhuǎn)移提取液，基質(zhì)效應(yīng)相對(duì)較小，但提取周期相對(duì)較長(zhǎng)，提取過(guò)程中溶劑消耗量多，通常多用于含水量少的試樣提取。超臨界流體萃?。禾崛∥锏臏囟扰c壓力超過(guò)臨界時(shí)，狀態(tài)介于氣液態(tài)，此時(shí)的狀態(tài)稱為超臨界狀態(tài)。此時(shí)其密度接近液體，擴(kuò)散系數(shù)比液體高，該流體表面張力小，更易滲透。此方法溶劑消耗量少，實(shí)驗(yàn)淋洗劑為二氧化碳。微波輔助萃?。何⒉ㄗ饔糜谠嚇樱纱┩冈嚇?，與目標(biāo)提取物充分作用，使試樣受熱均勻，提取過(guò)程中極性溶劑可吸納能量，加快高熱環(huán)境下不穩(wěn)定化合物的分離速度。微波萃取是在密閉條件下調(diào)動(dòng)溶劑分子的運(yùn)動(dòng)，提高溶劑的活性，使微波萃取過(guò)程得以優(yōu)化［4］。

（2）凈化方法。液液萃?。涸摲ㄊ歉鶕?jù)待測(cè)組分和樣品基質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)間存在差異，二者在互不相溶的兩種體系中溶解度不同，符合上述條件即可進(jìn)行液液萃取凈化。固相萃取：由于原理不同分為兩種情況，一種是待測(cè)試樣過(guò)柱后能保留樣品中雜質(zhì)，但目標(biāo)物可流出。另一種是目標(biāo)物留在柱床，干擾物質(zhì)經(jīng)洗滌后流出萃取柱。固相萃取柱的填料通常使用活性炭或弗羅里硅土，此方法節(jié)省時(shí)間、精度高、溶劑使用少、選擇性好，可用于痕量富集，避免乳化。基質(zhì)固相分散：試樣與一定量的反相鍵合硅膠混合，通過(guò)反復(fù)研磨，使樣品和吸附劑的固定顆粒混合均勻，當(dāng)混合物處于半固體狀態(tài)時(shí)裝柱，洗脫過(guò)程借鑒固相萃取法。本方法樣品凈化速度快，可減少樣品和溶劑的使用量，整合了其他提取凈化方法的優(yōu)勢(shì)，在很大程度上減少了待測(cè)樣品中目標(biāo)物的損失［5］。

3　獸藥殘留檢測(cè)

隨著集約化畜牧業(yè)的不斷發(fā)展，獸藥的使用范圍也在不斷擴(kuò)大，獸藥不僅用于治療疾病，也用于促生長(zhǎng)和提高飼料利用率，像一些抗生素、磺胺類(lèi)藥物，以及一些激素等。由于獸藥的使用范圍擴(kuò)大和用藥量的增加，必然會(huì)導(dǎo)致獸藥殘留的產(chǎn)生，獸藥殘留所檢測(cè)的樣品基質(zhì)和被檢測(cè)組分的結(jié)構(gòu)變得更加復(fù)雜，檢出限降低，這就對(duì)樣品的前處理過(guò)程提出更加嚴(yán)格的要求。由于HPLC-LC/MS分抵背景干擾能力較強(qiáng)，靈敏度相對(duì)較高，可在很大程度上簡(jiǎn)化樣品的前處理過(guò)程，像氯霉素和克倫特羅，通常是采用GC-MS檢測(cè)，前處理過(guò)程需要衍生，過(guò)程相對(duì)繁瑣，而HPLC-LC/ MS可去掉衍生步驟，使前處理過(guò)程更加簡(jiǎn)化。有研究表明，通過(guò)使用APCI離子源，HPLC-LC/MS檢測(cè)動(dòng)物組織中氯霉素，乙酸乙醋為提取液，使用C18柱固相萃取凈化，回收率大于80％，檢測(cè)限為0.02μg/kg［6］，與GC-MS相比靈敏度更高。我國(guó)學(xué)者使用HPLC-LC/MS檢測(cè)動(dòng)物組織中硝基呋喃代謝物時(shí)，為能達(dá)到歐盟委員會(huì)規(guī)定的四個(gè)確證點(diǎn)的要求，檢測(cè)過(guò)程采用2-硝基苯甲醛和2-氯苯甲醛雙衍生化處理，結(jié)果產(chǎn)生兩個(gè)分子離子峰，增加了確證信息，達(dá)到了要求的檢測(cè)限（0.5μg/kg），滿足了最低檢測(cè)限量的要求。但整個(gè)檢測(cè)過(guò)程相對(duì)繁瑣，操作過(guò)程復(fù)雜，HPLC-LC/MS可提供詳細(xì)的質(zhì)譜信息，采用NIRNI檢測(cè)模式，達(dá)到要求的難度低［7］。

隨著科學(xué)技術(shù)水平和檢測(cè)技術(shù)的不斷進(jìn)步，儀器的價(jià)格將會(huì)不斷降低，HPLC-LC/MS在獸藥殘留檢測(cè)方面的應(yīng)用會(huì)越來(lái)越廣泛，HPLC-LC/MS分析方法將會(huì)被不斷完善，HPLC-LC/MS也必將在動(dòng)物性食品獸藥殘留檢測(cè)方面發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。

［1］牛麗娟，湯樹(shù)生，郭召旭，等.復(fù)方伊維菌素和吡喹酮注射液的研制［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2010，46（3）：70-72.

［2］C.Lavaliere，G.D.Ascenzo，P.Foglia，etal.Determinationof mycotoxinsinbovinemilkbyliquidchromatographytandem massspectrometry［J］.J.ChromatogrB.2005，820：183-196.

［3］王立平，蔡雪鳳，侯翠艷.微生物抑制法檢測(cè)乳中舒巴坦含量的研究［J］.食品科技，2010，35（6）：304-306.

［4］于詠蘭，汪明.RP-HPLC檢測(cè)注射型復(fù)方驅(qū)蟲(chóng)劑中吡喹酮和伊維菌素的含量［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2010，46（1）：92-94.

［5］楊成對(duì)，宋莉暉.家禽肌肉組織中硝基咪哩類(lèi)藥物殘留的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2006，25（4）：101-103.

［6］岳振峰.食品中獸藥殘留檢測(cè)指南［M］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

［7］ShiY，PengDD，ShiCH，etal.Selectivedeterminationoftrace 17β-estradiolindairyandmeatsamplesbymolecularlyimprintedsolid-phaseextractionandHPLC［J］.FoodChem，2011，126：1916-1925.