劉 威 張洪娟
(黑龍江科倫制藥有限公司·慶安 152400)
丹芪腦血康膠囊是在多年臨床應(yīng)用基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)而成的現(xiàn)代中藥制劑,處方由丹參、黃芪、人工牛黃、三七、川芎、大黃等十余味中藥組成,具有補(bǔ)氣、活血、通絡(luò)功效,用于氣虛血瘀型中風(fēng)后半身不遂,口眼歪斜,語(yǔ)言蹇澀,口角流涎;或截癱,下半身痿廢等癥候。按照中藥新藥研究技術(shù)要求,在原有的部分藥效學(xué)和臨床初步研究基礎(chǔ)上,進(jìn)行了制劑和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等藥學(xué)研究,現(xiàn)將其研究?jī)?nèi)容報(bào)告如下:
多功能粉碎機(jī);中試多功能提取罐;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;藥用膠囊;KQ-300DB型超聲儀;十萬(wàn)分之一電子天平;恒溫水浴。試劑均為分析純;大黃、川芎對(duì)照藥材,大黃素、黃芪甲苷、丹參酮ⅡA、豬去氧膽酸、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;藥品:自制中試樣品。
處方藥味,黃芪、三七、人工牛黃粉碎成細(xì)粉,備用;丹參、川芎、大黃等酌予碎斷加五倍量90%乙醇于25~30℃浸提48小時(shí),濾過(guò),濾液減壓回收乙醇,濃縮至相對(duì)密度為1.22~1.25(60℃測(cè))的浸膏。藥渣再加水煎煮兩次,分別為2小時(shí)和1小時(shí),合并煎液,濾過(guò),濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.22-1.25(60℃測(cè))的清膏。上述浸膏與清膏與黃芪、三七及人工牛黃細(xì)粉混勻,加適量淀粉,制粒、干燥,裝膠囊,即得。
2.2.1 丹參的鑒別 取本品內(nèi)容物3g,加乙酸乙酯20ml,超聲處理10分鐘,濾過(guò),濾液濃縮至1ml,作為供試品溶液。另取丹參酮ⅡA對(duì)照品,加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。將制劑處方藥味去掉丹參,按照制劑工藝制成丹參空白樣品,以下操作同供試品處理方法制成丹參空白對(duì)照液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各10ul,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯(19:1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),空白對(duì)照液色譜則無(wú)對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)。
2.2.2 黃芪的薄層鑒別 取本品內(nèi)容物2.5g,加甲醇40ml,索氏提取器回流提取4小時(shí),濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0ml溶解,加水飽和正丁醇振搖提取3次,每次20ml,合并正丁醇提取液,用氨試液洗2次,每次15ml,棄去氨試液,再用正丁醇飽和水洗2次,每次15ml,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml溶解,作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。將制劑處方藥味去掉黃芪,按照制劑工藝制成黃芪空白樣品,以下操作同供試品處理方法制成黃芪空白對(duì)照液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各10ul,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以氯仿-甲醇-水(13:6:2)10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),空白對(duì)照液色譜則無(wú)對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)。
2.2.3 川芎的鑒別 取本品內(nèi)容物2.5g,加乙醚30ml,超聲處理5分鐘,濾過(guò),濾液揮干,殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解,作為供試品溶液。另取川芎對(duì)照藥材,加乙醚20ml,同法制成對(duì)照藥材溶液。將制劑處方藥味去掉川芎,按照制劑工藝制成川芎空白樣品,以下操作供試品處理方法制成川芎空白對(duì)照液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各4ul,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以正己烷-乙酸乙酯(9:1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn),空白對(duì)照液色譜則無(wú)對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)。
2.2.4 人工牛黃的鑒別 取本品內(nèi)容物3g,加甲醇30ml,超聲處理10分鐘,靜置,取上清液作為供試品溶液。另取豬去氧膽酸對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。將制劑處方藥味去掉人工牛黃,按照制劑工藝制成人工牛黃空白樣品,以下操作同供試品處理方法制成人工牛黃空白對(duì)照液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品、人工牛黃空白各溶液10~15μl,對(duì)照品溶液2~5μl分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇(20:25:2:3)上層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),空白對(duì)照液色譜則無(wú)對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)。
2.2.5 三七的鑒別 取本品內(nèi)容物8g,加水飽和的正丁醇60ml,超聲處理20分鐘,濾過(guò),濾液用正丁醇飽和的水洗滌2次,每次20ml,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液。另取人參皂苷對(duì)照品Rg1及三七皂苷R1對(duì)照品,加甲醇分別制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。將制劑處方藥味去掉三七,按照制劑工藝制成三七空白樣品,以下操作同供試品處理方法制成三七空白對(duì)照液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各4ul,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),空白對(duì)照液色譜則無(wú)對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)。
2.2.6 大黃的鑒別 取本品內(nèi)容物5g,加甲醇30ml,超聲處理15分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,加水10ml使溶解,再加鹽酸1ml,置水浴上加熱30分鐘,立即冷卻,用乙醚提取2次,每次20ml,合并乙醚液,蒸干,殘?jiān)勇确?ml使溶解,作為供試品溶液。另取大黃對(duì)照藥材0.1g,同法制成對(duì)照藥材溶液。再取大黃素對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。將制劑處方藥味去掉大黃,按照制劑工藝制成大黃空白樣品,以下操作同供試品處理方法制成大黃空白對(duì)照液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn),吸取對(duì)照品溶液及對(duì)照藥材溶液各4μl,供試品、空白溶液10~15μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(30~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置氨蒸氣中熏后,日光下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的紅色斑點(diǎn);在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,相同的五個(gè)紅色主斑點(diǎn),空白對(duì)照液色譜則無(wú)對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)。
(1)制劑工藝研究中,處方中三七、人工牛黃為貴細(xì)藥材不適于提取,而黃芪粉性較強(qiáng)可以充當(dāng)一部分賦形劑,考慮以生藥形式入藥;丹參、川芎等藥材為兼顧脂溶性和水溶粉性成分,考慮設(shè)計(jì)以90%乙醇提取后藥渣再進(jìn)行水煎處理,以保證藥材的全成分,更好的發(fā)揮藥效。通過(guò)藥效學(xué)驗(yàn)證以及穩(wěn)定性考核該工藝穩(wěn)定、可行。
(2)上述丹參等六味藥的薄層鑒別方法,通過(guò)空白對(duì)照試驗(yàn),陰性液無(wú)干擾,具備專屬性,可作為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別方法。
[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社出版,《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部.
[2] 韋文俊,羅遠(yuǎn). 救爾心膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥,2009,31(11):1801-1803.
[3] 王曉飛,金向群,等. 紫丹銀屑膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 [J].中成藥,2007,29(12):1872-1874.