易杰群，鄒志文*，張古忍

(1.南昌大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，南昌 330031;2.中山大學(xué)有害生物控制與資源利用國家重點實驗室/昆蟲研究所，廣州 510275)

昆蟲耐寒性已被廣泛研究，大量的報道圍繞抗凍保護劑、抗凍蛋白和熱激蛋白等幾類物質(zhì)來解釋其機理(Graether et al.，2000;Yocum，2001;Fuller，2004)，但Miyazaki 等人(2006)卻證實蔥蠅Delia antique(Meigen)的耐寒性與抗凍保護劑無關(guān)，顯然，昆蟲耐寒性體系是一個多抗寒物質(zhì)系統(tǒng)(Clark and Worland，2008)，有必要更全面地進行研究和探討。

脂肪作為構(gòu)成生物的三大基礎(chǔ)物質(zhì)之一，對生物體有極重要的作用。它不僅是機體重要的組成成分，廣泛分布于各個組織中，也是重要的貯能、供能物質(zhì)，還具有一些其它功能，如保溫、保水等。在昆蟲中，它不僅可以作為供能物質(zhì)，還可以保護其它組織，同時在耐寒性上也起到了非常重要的作用，如供能(Canavoso et al.，2001)、影響過冷卻點和冰點(張瑞和馬紀(jì)，2013)以及結(jié)合自由水(常志光等，2007)等，此前已有眾多文獻(xiàn)報道了昆蟲耐寒性與脂肪含量之間的關(guān)系(Steinbauer，1998;陳永杰等，2005;Bemani et al.，2012;Behroozi et al.，2012;Lehmann et al.，2012;Rousseau et al.，2012)。而作為脂肪合成的底物，脂肪酸也影響昆蟲耐寒性，生物一般通過提高不飽和脂肪酸與飽和脂肪酸的比例，以此增加低溫下細(xì)胞膜的流動性(Ko?tál et al.，2003;Michaud and Denlinger，2006;Khani et al.，2007)，而不飽和脂肪酸的合成是通過脂肪酸脫飽和酶催化完成的，其與昆蟲耐寒性也有著緊密的聯(lián)系。

1 脂肪含量變化及耐寒性的關(guān)系

昆蟲耐寒性與其脂肪含量有著緊密的聯(lián)系，通常通過增加脂肪含量以提高其耐寒性。如黑足黑守瓜Aulacophora nigripennis(Motschulsky)等在短光照下飼養(yǎng)脂肪積累要比長光照下多，在越冬初期(9月至10月初)急劇上升(Watanabe and Tanaka，1998);在桑螟 Diaphania pyloalis(Walke)越冬幼蟲體內(nèi)發(fā)現(xiàn)結(jié)合脂肪的含量越冬期高于越冬初期(陳永杰等，2005);楊大榮等(1988)指出蟲草蝠蛾 Thitarodes armoricanus(Oberthür)幼蟲越冬初期體內(nèi)脂肪增加;筆者研究團隊也發(fā)現(xiàn)西藏野外生長的蒲氏鉤蝠蛾Thitarodes pui(Zhang et al.)幼蟲脂肪總量隨著土壤溫度的升高而降低(鄒志文，2009)，在低溫培養(yǎng)下的劍川無鉤蝠蛾Ahamus jianchuanensis(Yang)幼蟲體內(nèi)脂肪含量顯著高于較高溫度培養(yǎng)的個體(Zou et al.，2010)。這些報道均證實了昆蟲通過增加脂肪含量抵抗寒冷。有趣的是，越冬昆蟲體內(nèi)的脂肪也存在不同的響應(yīng)，如Arimania comaroffi(Ragonot)與粗角螟Ocneria terebinthina Strg.越冬期間由于分解脂肪獲得能量，從而導(dǎo)致含量顯著下 降(Bemani et al.，2012;Behroozi et al.，2012)，在紅翅大小蠹Dendroctonus rufipennis Kirby成蟲體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)脂肪含量從9月份到1月份持續(xù)下降(Rousseau et al.，2012)。

昆蟲通過增加體內(nèi)脂肪含量抵御寒冷，這主要是由于，其一，脂肪是生物重要的貯能、供能物質(zhì)，在低溫條件下可以為昆蟲提供能量，為昆蟲合成抗寒物質(zhì)及適應(yīng)低溫產(chǎn)生的一系列生理反應(yīng)提供能量(Canavoso et al.，2001)，大量的冬眠動物在冬季來臨之前都會在體內(nèi)貯藏豐富的脂肪，昆蟲也不例外，如越冬的苜蓿切葉蜂Megachile rotundata(F.)會積累大量的脂肪(Buckner et al.，2004)。其二，昆蟲體液過冷卻點是衡量其耐寒性的重要指標(biāo)，體內(nèi)自由水含量與其過冷卻點成反比關(guān)系，因此過冬時昆蟲會減少體內(nèi)自由水的含量，增加結(jié)合水的含量(常志光等，2007)，而脂肪能通過影響昆蟲體內(nèi)自由水含量(Canavoso et al.，2001)，從而改變昆蟲耐寒性，如低溫下Gelonus tasmanicus(Le Guillou)和Amorbus obscuricornis(Westwood)體內(nèi)脂肪含量增加與含水量下降的現(xiàn)象證實了脂肪能夠降低自由水的含量(Steinbauer，1998)，這更有利于昆蟲抵抗寒冷。其三，游離脂肪與過冷卻點有著緊密的聯(lián)系，常志光等(2007)發(fā)現(xiàn)越冬意蜂 Apis mellifera ligustica(Spinola)蟲體游離脂肪含量從十月開始積累，二月達(dá)到最高，并且證實了其過冷能力的變化與體內(nèi)游離脂肪的含量變化呈正相關(guān)。此外，作為脂肪代謝產(chǎn)物的甘油是一種重要的小分子抗寒物質(zhì)，能降低昆蟲體內(nèi)液體的冰點及過冷卻點(張瑞和馬紀(jì)，2013)，保護昆蟲組織(Izumi et al.，2006)，這一點在二化螟Chilo suppressalis Walker 以及適應(yīng)低溫的白蠟窄吉丁 Agrilus planipennis Fairmaire 中都得到了證實(Ishiguro et al.，2007;Crosthwaite et al.，2011)。

作為生物體內(nèi)三大基礎(chǔ)物質(zhì)之一，脂肪參與生物體內(nèi)各種代謝反應(yīng)，直接或間接地從各個方面影響生物體生理狀態(tài)。因此昆蟲脂肪含量變化影響昆蟲耐寒性的機制也有很多種。但目前，脂肪與昆蟲耐寒性的關(guān)系尚有待進一步的研究。

2 昆蟲脂肪酸與耐寒性的研究

隨著溫度的降低，不僅生物體脂肪總量會發(fā)生改變，脂肪酸組成也隨之改變。一般情況下，當(dāng)環(huán)境溫度降低時，生物體內(nèi)的不飽和脂肪酸(unsaturated fatty acid，UFA)含量上升，飽和脂肪酸(saturated fatty acid，SFA)含量下降。細(xì)菌、藻類、原生動物、植物和魚類都有此現(xiàn)象(Los and Murata，2004)，昆蟲也不例外。

研究發(fā)現(xiàn)蘋果蠹蛾Cydia pomonella(L.)及兩種蝽Dolycoris baccarum(L.)和Piezodorus lituratus(F.)的冬季滯育個體比活躍個體UFA 更豐富(Bashan and Cakmak，2005;Khani et al.，2007);越冬期的麥紅吸漿蟲Sitodiplosis mosellana Gehin 幼蟲UFA 含量顯著高于越冬后的幼蟲個體，而SFA含量則正好相反(Wu et al.，2001)。Eysarcoris inconspicuous(Herrich-Schaffer)成蟲的甘油三酯(Triacylglycerol，TAG)及磷脂(Phospholipid，PL)中均發(fā)現(xiàn)UFA/SFA 比值在秋季上升，隨后在溫度最低的1、2月份達(dá)到最大值(?akmak，2010);不同季節(jié)的蒲氏鉤蝠蛾幼蟲體內(nèi)PL 脂肪酸組成呈現(xiàn)波動性，但UFA/SFA 比值在溫度最高的7月最低，而低溫月份該值都高于高溫月份(鄒志文，2009);晚秋的頸利虱蠅Lipoptena cervi(L.)體內(nèi)UFA 也顯著高于8月(Nieminen et al.，2013);氣溫下降時二化螟末齡幼蟲體內(nèi)磷脂酰乙醇胺中UFA 上升到了80%，8月到10月其幼蟲體內(nèi)UFA 顯著增加(Izumi et al.，2009)。在極少數(shù)昆蟲中存在UFA 含量與上述情況相反的調(diào)節(jié)，如秋季滯育的紅蝽Pyrrhocoris apterus(L.)成蟲隨溫度的降低UFA 比例下降(Hodková et al.，1999)。

低溫時UFA 的增加及SFA 的減少不僅發(fā)生在自然條件下，也存在于人工低溫馴化。5℃下快速冷馴化(1 h、2 h、3 h)及長期低溫(24 h、48 h、72 h)處理的白符跳 Folsomia candida Willem個體UFA/SFA 比值持續(xù)上升(Waagner et al.，2013);冷適應(yīng)后的果蠅Chymomyza costata Zetterstedt 脂肪體和肌肉組織中UFA 也有不同程度的提高(Ko?tál et al.，2003);在快速冷馴化的黑腹果蠅Drosophila melanogaster Meigen 細(xì)胞膜上磷脂UFA 增加(Overgaard et al.，2005)。不同溫度培養(yǎng)下的劍川無鉤蝠蛾幼蟲脂肪酸組成呈現(xiàn)明顯的規(guī)律性，隨著溫度的降低，UFA/SFA 從1.13 升至1.40，UFA 與培養(yǎng)溫度呈現(xiàn)顯著地負(fù)相關(guān)關(guān)系;對跳蟲Orchesella cincta(L.)進行實驗發(fā)現(xiàn)在將15℃飼養(yǎng)的個體在低溫下5℃下飼養(yǎng)4 周后UFA/SFA 比值上升，在恒溫下(5℃和20℃)飼養(yǎng)同樣發(fā)現(xiàn)低溫下UFA 含量更高(van Dooremalen and Ellers，2010;van Dooremalen et al.，2011);類似的現(xiàn)象也發(fā)生在低溫誘導(dǎo)后的北極跳蟲Megaphorura arctica Tullberg 極性脂質(zhì)中(Purac'et al.，2011)。

大量的研究指出，昆蟲低溫耐受與膜脂組成成分變化有關(guān)(Ko?tál et al.，2003;Tomcala et al.，2006)，這是由于細(xì)胞膜從液相變?yōu)槟z相的轉(zhuǎn)變是未結(jié)冰條件下造成凍傷的重要原因(Michaud and Denlinger，2006)。而UFA 的增加對低溫下維持細(xì)胞膜液相具有重要作用。為了維持流動性，磷脂膜中的脂肪酸需要進一步不飽和，幫助維持細(xì)胞膜的動態(tài)特性(Teets and Denlinger，2013)。膜脂成分的這種改變是冷血變溫動物為了適應(yīng)環(huán)境溫度而做出的一種適應(yīng)性調(diào)節(jié)(Ko?tál，2010)，其細(xì)微改變足夠引起膜物理特性以及相伴的機體耐寒性的極大改變(Hazel，1995)。上述昆蟲中磷脂UFA 含量的增加，對于提高其低溫環(huán)境下細(xì)胞膜的流動性，增強耐寒性有著極其重要的作用。

膜脂的組成對于細(xì)胞的生物功能有著至關(guān)重要的作用(Ko?tál，2010)，如C16∶1、C18∶1、C18∶2 等，它們在昆蟲氣溫響應(yīng)中起到非常重要的作用，在脂肪酸組成中占有非常大的比重。25℃下未滯育紅尾肉蠅Sarcophaga crassipalpis Macquart的磷脂中C16∶1、C18∶1 和C18∶2 的含量甚至占脂肪酸總量的50% 以上(Michaud and Denlinger，2006)，而生活在青藏高原的蒲氏鉤蝠蛾體內(nèi)甘油三脂中此三者含量占脂肪酸總量的近70%，在磷脂中也占60%左右。作為不飽和脂肪酸，C16∶1?；湹碾p鍵存在于鏈的中心部位，這對單個雙鍵來說是最大限度地提高鏈末端橫向位移的最好位置，有助于提高膜流動性(Overgaard et al.，2005)，當(dāng)溫度降低時，在黑腹果蠅、蔥蠅等昆蟲體內(nèi)都會發(fā)現(xiàn)C16∶1 含量增加(Overgaard et al.，2006;Kayukawa et al.，2007)。與C16∶1 作用類似，C18∶1 不僅可以提高昆蟲低溫下細(xì)胞膜的流動性，還可以為膜關(guān)鍵蛋白(膜ATPases)提供適宜的環(huán)境，當(dāng)C18∶1 存在于膜中時，這種酶可以達(dá)到最佳反應(yīng)環(huán)境(Starling et al.，1993)。因此，許多昆蟲會在低溫下增加C18∶1 含量，4℃快速馴化8 h 時的紅尾肉蠅中C18∶1的比例從30%上升到47%(Michaud and Denlinger，2006);在寒冷季節(jié)金針癭蚊Eurosta solidaginis(Fitch)幼蟲中也發(fā)現(xiàn)了C18∶1 含量顯著增加(Joanisse and Storey，1996);寒冷季節(jié)二化螟末齡幼蟲體內(nèi)UFA 含量的提高主要是由C18∶1 增加引起的(Izumi et al.，2009)。作為細(xì)胞膜的組分之一，C18∶2 的主要功能就是降低相變溫度(Overgaard et al.，2005)，維持膜的正常流動性與滲透性(Khani et al.，2007)，如越冬前的蘋果蠹蛾Cydia pomonella 體內(nèi)C18∶2 含量從夏季的16.1%上升到29.9%。這類報道也出現(xiàn)在冷適應(yīng)的果蠅C.costata 幼蟲及冷馴化后的黑腹果蠅中(Ko?tál et al.，2003)。

此外，脂肪酸鏈的長度對膜脂的流動性也有影響:隨著脂肪酸鏈的增長，鏈尾相互作用的機會增多，易于凝集(相變溫度增高)，流動性下降。脂肪酸在長期低溫下的變化與短期低溫適應(yīng)中的變化不一樣:長期低溫適應(yīng)會影響脂肪酸鏈的長度，而短期內(nèi)的適應(yīng)只會增加脂肪酸的不飽和程 度(Hodková et al.，1999;Ohtsu et al.，1998)。如在果蠅體內(nèi)存在冷耐受性增強后就存在C18 脂肪酸減少而C16 脂肪酸增加的情況(Ohtsu et al.，1998)。

3 脂肪酸脫飽和酶與耐寒性的關(guān)系

3.1 昆蟲脂肪酸脫飽和酶的種類及基本結(jié)構(gòu)

脂肪酸脫飽和酶(fatty acid desaturase，F(xiàn)AD)是一類在脂肪酸鏈上將碳碳單鍵轉(zhuǎn)化為碳碳雙鍵的酶。FAD 分布廣泛，幾乎存在于所有的生物中(曾碩士等，2008)。昆蟲中FAD種類非常多，除常見的FAD9(Δ9 脂肪酸脫飽和酶)外，Cripps等人(1986)還發(fā)現(xiàn)家蟋等14種昆蟲中均存在FAD12。此外，Stanley 等(2000)年發(fā)現(xiàn)家蟋有能力從頭合成花生四稀酸，這表明家蟋體內(nèi)有Δ9、Δ12、Δ6、Δ5 等FAD 的存在。目前在大多數(shù)昆蟲中發(fā)現(xiàn)的FAD 都屬于FAD9 或FAD11，而在少數(shù)昆蟲中則還存在出一些不常見的FAD，如Δ10、Δ14、Δ12、Δ15 等(Hao et al.，2002;Roelofs et al.，2002)。這些FAD 分別催化脂肪酸鏈在不同的位置形成雙鍵。

現(xiàn)有研究表明，大部分昆蟲FAD 都是膜結(jié)合蛋白，序列在兩端保守性低，但中間部分存在兩個相對保守的疏水區(qū)，富含3個極保守的組氨酸基序和4 次跨膜結(jié)構(gòu)域，這3個極保守的組氨酸基序與酶活性中心的形成相關(guān)，主要是螯合金屬離子，結(jié)合氧(Nakamura and Nara，2004)。不同種類FAD 之間結(jié)構(gòu)稍有差異。除了有3個保守的組氨酸富含區(qū)外，動物中的?；?COA 脫飽和酶、植物及真菌中的?；?脂肪酸去飽和酶都還存在一個細(xì)胞色素b5 的區(qū)域，主要是作為電子供體，而酰基-ACP 脫飽和酶則無該結(jié)構(gòu)(Pereira et al.，2003)。

3.2 昆蟲脂肪酸脫飽和酶及其基因與耐寒性的關(guān)系

FAD 作為合成不飽和脂肪酸的關(guān)鍵酶，對動植物耐寒性有極重要的影響。在藍(lán)藻、黃瓜、油菜和馬鈴薯等許多植物中都存在FAD 及其基因的研究(范妙華等，2007)。Amiri 等(2010)指出轉(zhuǎn)入了FAD12 基因的馬鈴薯株系在-7℃實驗條件下，損傷指數(shù)最高為44.22%，這個結(jié)果顯著小于對照組的66.96%。動物中也存在著大量相應(yīng)的報道，Zerai 等(2010)發(fā)現(xiàn)12℃-14℃飼養(yǎng)7 d 的羅非魚Oreochromis niloticus 肌肉組織及鰓組織中的FAD9 基因表達(dá)量分別比照組高了16 倍和2 倍。此外，Tiku 等(1996)也指出在鯉魚肝臟對于寒冷的適應(yīng)中，F(xiàn)AD9 基因表達(dá)量上增加了10 倍。在遮目魚及草魚(Hsieh and Kuo，2005)等其它動物中也存在有類似的現(xiàn)象。而在昆蟲中，這類報道同樣存在，譬如，在從室溫降到15℃時，家蟋Acheta domesticus(L.)體內(nèi)的FAD12 活性顯著提高(Batcabe et al.，2000)。

在昆蟲FAD 基因研究方面，自1997年首次從果蠅中克隆得到了FAD 基因desat1 以來，F(xiàn)AD9 及其基因已在許多昆蟲中報道出來。迄今為止，大部分的昆蟲FAD9 基因都是從雙翅目(Dallerac et al.，2000)和鱗翅目(Knipple et al.，1998)中克隆得到的。研究表明該類基因在昆蟲中的同源性十分高(陳麗君等，2011)。盡管FAD9 基因與耐寒性的關(guān)系已在各種生物中被報道，但是此前在昆蟲中卻并未有此類報道。直到2007年FAD9 與耐寒性的關(guān)系才首次在蔥蠅D.antique 中被證實(Kayukawa et al.，2007)。目前，這個結(jié)論也僅在白紋伊蚊Aedes albopictus 及紅尾肉蠅S.crassipalpis 等幾種昆蟲中被證實(Rinehart et al.，2010;Reynolds et al.，2012)。在這些昆蟲中，此類FAD 經(jīng)鑒定均為FAD9。

Kayukawa et al.(2007)報道了在蔥蠅體內(nèi)FAD9 基因與耐寒性相關(guān)，這也是在昆蟲中首個證實該基因與昆蟲耐寒性相關(guān)的報道，他們發(fā)現(xiàn)，當(dāng)溫度降低時，在蔥蠅大腦、馬氏管、中腸等組織中該基因表達(dá)量上升了2-10 倍，這表明了昆蟲的耐寒性與 FAD9 的正相關(guān)性關(guān)系。此后，Rinehart 等(2010)利用抑制性消減雜交技術(shù)對紅尾肉蠅滯育相關(guān)基因進行分析，同樣發(fā)現(xiàn)了FAD9基因表達(dá)量上升，這也證實了該基因與耐寒性相關(guān)。2012年Reynolds 等利用實時熒光定量PCR 技術(shù)對滯育白紋伊蚊的21個基因進行分析，發(fā)現(xiàn)在低溫下滯育6 d 的白紋伊蚊Δ9 脫飽和酶基因表達(dá)量是未滯育的1.8 倍;Waagner 等(2013)在對彈尾目跳蟲耐寒性的研究中發(fā)現(xiàn)，5℃下48 h 后，F(xiàn)AD9 基因d9des 表達(dá)量上升了5 倍，這些均表明昆蟲可以通過增加FAD9 基因的表達(dá)量來提高其耐寒性。

FAD9 基因能影響昆蟲耐寒性的主要原因是，F(xiàn)AD9 是UFA 合成通路中的首個酶，它對C18∶1及C18∶2 的合成有重要作用。這兩種UFA 對生物膜流動性有重要作用(Miyazaki et al.，2006;Khani et al.，2007)。因此FAD9 在UFA/SFA 比值增加、脂肪酸代謝以及調(diào)整細(xì)胞流動性方面起到關(guān)鍵性作用，在生物適應(yīng)低溫中起到非常重要的作用。當(dāng)溫度降低時膜脂流動性減少，以此為信號激活FAD9 合成UFA，用以增加昆蟲耐寒性。FAD9 在低溫下的調(diào)節(jié)機制有兩種(Tiku et al.，1996):在初步降溫時，F(xiàn)AD 活性增加，但表達(dá)量不變，這可以說是機體內(nèi)已有的FAD9 活性的激活;第二種機制就是當(dāng)溫度降至更低時，F(xiàn)AD9 基因表達(dá)量增加，酶活性的進一步增加。當(dāng)溫度進一步從17℃降到10℃時，酶活性不能再激活，但SFA 還在減少，可能有另一種機制參與(Hazel et al.，1987)。此外FAD9 不僅與耐寒性相關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)饑餓時，在家蟋體內(nèi)FAD9 活性下降(Batcabe et al.，2000);在鯉魚體內(nèi)發(fā)現(xiàn)兩種FAD9 基因，其相似度達(dá)91%，編碼兩種FAD，與低溫相關(guān)的只有一種(Cds2)，而另一種(Cds1)在低溫下卻消失不見，已證實與饑餓有關(guān)(Trueman et al.，2000);跳蟲亦存在2種FAD9(z9des 和d9des)，前者在低溫下表達(dá)量差異不顯著，后者則上升了5 倍;在冬蟲夏草寄主蒲氏鉤蝠蛾體內(nèi)同樣存在2種FAD9 基因TpdesatA 和TpdesatB，前者隨氣溫的降低而升高，而后者在季節(jié)變化過程中卻存在一個相反的趨勢(Zou et al.，2011)，出現(xiàn)上述情況有可能是2種基因可能催化不同的底物(Dallerac et al.，2000)。FAD9 不僅與溫度、饑餓相關(guān)，還有報道指出FAD9 基因還在蛾類性信息素腺體中廣泛表達(dá)(Knipple et al.，1998)，與昆蟲信息素合成相關(guān)。

FAD12 是另一種重要的FAD，主要作用是將雙鍵引入C18∶1，合成C18∶2，這種脂肪酸的主要功能是降低細(xì)胞膜相變溫度(Overgaard et al.，2005)，因此FAD12 對生物耐寒性有著重要的作用。FAD12 的存在在早期家蟋等14種昆蟲中就得到了證實(Batcabe et al.，2000)。Overgaard(2005)也證實C18∶2 不僅可以來自于食物中，在黑腹果蠅中C18∶2 也可以自身合成。然而，有關(guān)FAD12 基因的研究卻少之又少，直到2008年，Zhou 才首次在家蟋和赤擬谷盜Tribolium castaneum Herbst 中證實FAD12 基因的存在，這也是昆蟲中僅有的有關(guān)FAD12 基因的報道，但是該基因與昆蟲耐寒性關(guān)系的研究尚未開展;該報道還發(fā)現(xiàn)家蟋的FAD12 基因AdD12Des 可能來源于原始的FAD9 基因(Zhou et al.，2008)。然而這些都是基于現(xiàn)象的分析，并未給出更深層次的解釋，詳細(xì)情況還有待更深入的工作。

4 展望

昆蟲脂肪酸脫飽和酶可促進不飽和脂肪酸形成，在低溫下維持細(xì)胞膜的流動性，增強昆蟲適應(yīng)低溫環(huán)境能力。因此該類酶及基因可用于基因工程，如通過增強益蟲體內(nèi)的誘導(dǎo)及表達(dá)，提高其適應(yīng)惡劣環(huán)境的能力，同時亦可用生物制劑等阻斷害蟲體內(nèi)該類酶的催化或表達(dá)過程，降低其耐寒能力，達(dá)到調(diào)控害蟲的目的。這為資源昆蟲的保護和利用、害蟲的防控提供新的思路，在今后應(yīng)用中具有廣泛的前景。

References)

Amiri RM，Yur'eva NO，Shimshilashvili KR，et al.Expression of Acyl-lipid Δ12-desaturase gene in prokaryotic and eukaryotic cells and its effect on cold stress tolerance of potato［J］.Journal of Integrative Plant Biology，2010，52(3):289-297.

Bashan M，Cakmak O.Changes in composition of phospholipid and triacylglycerol fatty acids prepared from prediapausing and diapausing individuals of Dolycoris baccarum and Piezodorus lituratus(Heteroptera:Pentatomidae)［J］.Annals of the Entomological Society of America，2005，98(4):575-579.

Batcabe JP，Howell JD，Blomquist GJ，et al.Effects of developmental age，ambient temperature，and dietary alterations on Δ12 desaturase activity in the house cricket，Acheta domesticus［J］.Archives of Insect Biochemistry and Physiology，2000，44(3):112-119.

Behroozi E，Izadi H，Samih MA，et al.Physiological strategy in overwintering larvae of pistachio white leaf borer，Ocneria terebinthina Strg.(Lepidoptera:Lymantriidae)in Rafsanjan，Iran［J］.Italian Journal of Zoology，2012，79(1):44-49.

Bemani M，Izadi H，Mahdian K，et al.Study on the physiology of diapause，cold hardiness and supercooling point of overwintering pupae of the pistachio fruit hull borer，Arimania comaroffi［J］.Journal of Insect Physiology，2012，58(7):897-902.

Buckner JS，Kemp WP，Bosch J.Characterization of triacylglycerols from overwintering prepupae of the alfalfa pollinator Megachile rotundata(Hymenoptera:Megachilidae)［J］.Archives of Insect Biochemistry and Physiology，2004，57(1):1-14.

?akmak O.Seasonal changes in fatty acid composition of Eysarcoris inconspicuous(Herrich-Schaffer，1844)(Heteroptera:Pentatomidae)adults［J］.Turkiye Entomoloji Dergisi-Turkish Journal of Entomology，2010，34(1):15-27.

Canavoso LE，Jouni ZE，Karnas KJ，et al.Fat metabolism in insects［J］.Annual Review of Nutrition，2001，21(1):23-46.

Chang ZG，Gao HX，Ge Y，et al.Relation between variation of water，fat，glycerol in vivo of over-wintering Apis mellifera and cold hardiness［J］.Apiculture of China，2007，58(2):17.［常志光，高洪學(xué)，葛英，等.越冬意蜂體內(nèi)水分，蛋白質(zhì)，脂肪的變化與抗寒性的關(guān)系［J］.中國蜂業(yè)，2007，58(2):17-17］

Clark MS，Worland MR.How insects survive the cold:molecular mechanisms-a review［J］.Journal of Comparative Physiology B，2008，178(8):917-933.

Crosthwaite JC，Sobek S，Lyons DB，et al.The overwintering physiology of the emerald ash borer，Agrilus planipennis Fairmaire(Coleoptera:Buprestidae)［J］.Journal of Insect Physiology，2011，57(1):166-173.

Chen LJ，Du MF，An SH，et al.Molecular identification of Helicoverpa armigera acyl-CoA delta-9 desaturase gene［J］.Journal of Henan Agricultural University，2011，45(5):552–557.［陳麗君，杜孟芳，安世恒，等.棉鈴蟲酰基輔酶A△9 去飽和酶基因的分子鑒定［J］.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2011，45(5):552-557］

Chen YJ，Sun XG，Zhang WG，et al.Relation between variation of water，fat，glycerol in vivo of over-wintering Diaphania pyloalis Walker larvae and cold hardiness［J］.Science of Sericulture，31(1):22–25.［陳永杰，孫緒艮，張衛(wèi)光，等.桑螟越冬幼蟲體內(nèi)水分，脂肪，甘油的變化與抗寒性的關(guān)系［J］.蠶業(yè)科學(xué)，2005，31(1):22-25］

Cripps C，Blomquist GJ，de Renobales M.De novo biosynthesis of linoleic acid in insects［J］.Biochimica et Biophysica Acta(BBA)-Lipids and Lipid Metabolism，1986，876(3):572-580.

Dallerac R，Labeur C，Jallon JM，et al.A Δ9 desaturase gene with a different substrate specificity is responsible for the cuticular diene hydrocarbon polymorphism in Drosophila melanogaster［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences，2000，97(17):9449-9454.

van Dooremalen C，Ellers J.A moderate change in temperature induces changes in fatty acid composition of storage and membrane lipids in a soil arthropod［J］.Journal of Insect Physiology，2010，56(2):178-184.

van Dooremalen C，Suring W，Ellers J.Fatty acid composition and extreme temperature tolerance following exposure to fluctuating temperatures in a soil arthropod［J］.Journal of Insect Physiology，2011，57(9):1267-1273.

Fan MH，Li JY，F(xiàn)an ZQ.Characteristics of plants fatty acid desaturases and progress of transgenetic［J］.Biotechnology Bulletin，2008，6:16-20.［范妙華，李紀(jì)元，范正琪.植物脂肪酸脫飽和酶特性及轉(zhuǎn)基因研究進展［J］.生物技術(shù)通報，2008，6:16-20］

Fuller BJ.Cryoprotectants:the essential antifreezes to protect life in the frozen state［J］.Cryoletters，2004，25(6):375-388.

Graether SP，Kuiper MJ，Gagné SM，et al.β-Helix structure and ice-binding properties of a hyperactive antifreeze protein from an insect［J］.Nature，2000，406(6793):325-328.

Hao G，Liu W，O'Connor M，et al.Acyl-CoA Z9-and Z10-desaturase genes from a New Zealand leafroller moth species，Planotortrix octo［J］.Insect Biochemistry and Molecular Biology，2002，32(9):961-966.

Hazel JR，Hagar AF，Pruitt NL.The temperature dependence of phospholipid deacylation/reacylation in isolated hepatocytes of thermally acclimated rainbow trout(Salmo gairdneri)［J］.Biochimica et Biophysica Acta(BBA)-Lipids and Lipid Metabolism，1987，918(2):149-158.

Hazel JR.Thermal adaptation in biological membranes:is homeoviscous adaptation the explanation?［J］.Annual Review of Physiology，1995，57(1):19-42.

Hodková M，?imek P，Zahradncˇková H，et al.Seasonal changes in the phospholipid composition in thoracic muscles of a heteropteran，Pyrrhocoris apterus［J］.Insect Biochemistry and Molecular Biology，1999，29(4):367-376.

Hsieh SL，Kuo CM.Stearoyl–CoA desaturase expression and fatty acid composition in milkfish(Chanos chanos)and grass carp(Ctenopharyngodon idella)during cold acclimation［J］.Comparative Biochemistry and Physiology Part B，2005，141(1):95-101.

Ishiguro S，Li Y，Nakano K，et al.Seasonal changes in glycerol content and cold hardiness in two ecotypes of the rice stem borer，Chilo suppressalis，exposed to the environment in the Shonai district，Japan［J］.Journal of Insect Physiology，2007，53(4):392-397.

Izumi Y，Sonoda S，Yoshida H，et al.Role of membrane transport of water and glycerol in the freeze tolerance of the rice stem borer，Chilo suppressalis Walker(Lepidoptera:Pyralidae)［J］.Journal of Insect Physiology，2006，52(2):215-220.

Izumi Y，Katagiri C，Sonoda S，et al.Seasonal changes of phospholipids in last instar larvae of rice stem borer Chilo suppressalis Walker(Lepidoptera:Pyralidae)［J］.Entomological Science，2009，12(4):376-381.

Joanisse DR，Storey KB.Fatty acid content and enzymes of fatty acid metabolism in overwintering cold-hardy gall insects［J］.Physiological Zoology，1996，69(5):1079-1095.

Kayukawa T，Chen B，Hoshizaki S，et al.Upregulation of a desaturase is associated with the enhancement of cold hardiness in the onion maggot，Delia antique［J］.Insect Biochemistry and Molecular Biology，2007，37(11):1160-1167.

Khani A，Moharramipour S，Barzegar M，et al.Comparison of fatty acid composition in total lipid of diapause and non‐ diapause larvae of Cydia pomonella(Lepidoptera:Tortricidae)［J］.Insect Science，2007，14(2):125-131.

Knipple DC，Rosenfield CL，Miller SJ，et al.Cloning and functional expression of a cDNA encoding a pheromone gland-specific acyl-CoA Δ11-desaturase of the cabbage looper moth，Trichoplusia ni［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences，1998，95(26):15287-15292.

Ko?tál V，Berková P，?imek P.Remodelling of membrane phospholipids during transition to diapause and cold-acclimation in the larvae of Chymomyza costata(Drosophilidae)［J］.Comparative Biochemistry and Physiology(Part B)，2003，135(3):407-419.

Ko?tál V.Cell structural modifications in insects at low temperatures［J］.Low Temperature Biology of Insects，2010:116-140.

Lehmann P，Lyytinen A，Sinisalo T，et al.Population dependent effects of photoperiod on diapause related physiological traits in an invasive beetle(Leptinotarsa decemlineata)［J］.Journal of Insect Physiology，2012，58(8):1146-1158.

Los DA，Murata N.Membrane fluidity and its roles in the perception of environmental signals［J］.Biochimica et Biophysica Acta(BBA)-Biomembranes，2004，1666(1):142-157.

Michaud MR，Denlinger DL.Oleic acid is elevated in cell membranes during rapid cold-hardening and pupal diapause in the flesh fly，Sarcophaga crassipalpis［J］.Journal of Insect Physiology，2006，52(10):1073-1082.

Miyazaki S，Kayukawa T，Chen B，et al.Enhancement of cold hardiness by acclimation is stage-specific in the non-diapausing pupae of onion maggot Delia antiqua(Diptera:Anthomyiidae)［J］.European Journal of Entomology，2006，103(3):691–694.

Nakamura MT，Nara TY.Structure，function，and dietary regulation of Δ6，Δ5，and Δ9 desaturases［J］.Nutrition，2004，24.

Nieminen P，K?kel? R，Paakkonen T，et al.Fatty acid modifications during autumnal cold-hardening in an obligatory ectoparasite，the deer ked(Lipoptena cervi)［J］.Journal of Insect Physiology，2013，59(6):631-637.

Ohtsu T，Kimura MT，Katagiri C.How Drosophila species acquire cold tolerance［J］.European Journal of Biochemistry，1998，252(3):608-611.

Overgaard J，S?rensen JG，Petersen SO，et al.Changes in membrane lipid composition following rapid cold hardening in Drosophila melanogaster［J］.Journal of Insect Physiology，2005，51(11):1173-1182.

Overgaard J，S?rensen JG，Petersen SO，et al.Reorganization of membrane lipids during fast and slow cold hardening in Drosophila melanogaster［J］.Physiological Entomology，2006，31(4):328-335.

Pereira SL，Leonard AE，Mukerji P.Recent advances in the study of fatty acid desaturases from animals and lower eukaryotes［J］.Prostaglandins，Leukotrienes and Essential Fatty Acids，2003，68(2):97-106.

Purac' J，Pond DW，Grubor-Laj?ic' G，et al.Cold hardening induces transfer of fatty acids between polar and nonpolar lipid pools in the Arctic collembollan Megaphorura arctica［J］.Physiological Entomology，2011，36(2):135-140.

Reynolds JA，Poelchau MF，Rahman Z，et al.Transcript profiling reveals mechanisms for lipid conservation during diapause in the mosquito，Aedes albopictus［J］.Journal of Insect Physiology，2012，58(7):966-973.

Rinehart JP，Robich RM，Denlinger DL.Isolation of diapause-regulated genes from the flesh fly，Sarcophaga crassipalpis by suppressive subtractive hybridization［J］.Journal of Insect Physiology，2010，56(6):603-609.

Roelofs WL，Liu W，Hao G，et al.Evolution of moth sex pheromones via ancestral genes［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences，2002，99(21):13621-13626.

Rousseau J，Bauce é，Lavallée R，et al.Winter mortality and supercooling point of the spruce beetle(Coleoptera:Curculionidae)not affected by host tree vigor in Nova Scotia，Canada［J］.Journal of the Acadian Entomological Society，2012，8:1-10.

Stanley DW.Eicosanoids in Invertebrate Signal Transduction Systems［M］.Princeton:Princeton University Press，2000.

Starling AP，East JM，Lee AG.Effects of phosphatidylcholine fatty acyl chain length on calcium binding and other functions of the calcium-magnesium-ATPase［J］.Biochemistry，1993，32(6):1593-1600.

Steinbauer MJ.Seasonal fluctuations in bodyweight，lipid content and the starvation-longevity of Amorbus obscuricornis(Westwood)and Gelonus tasmanicus(Le Guillou)(Hemiptera:Coreidae)［J］.Australian Journal of Entomology，1998，37(1):90-96.

Teets NM，Denlinger DL.Physiological mechanisms of seasonal and rapid cold-hardening in insects［J］.Physiological Entomology，2013，38(2):105-116.

Tiku PE，Gracey AY，Macartney AI，et al.Cold-induced expression of Δ9-desaturase in carp by transcriptional and posttranslational mechanisms［J］.Science，1996，271(5250):815-818.

Tomcala A，Tollarová M，Overgaard J，et al.Seasonal acquisition of chill tolerance and restructuring of membrane glycerophospholipids in an overwintering insect:triggering by low temperature，desiccation and diapause progression［J］.Journal of Experimental Biology，2006，209(20):4102-4114.

Trueman RJ，Tiku PE，Caddick MX，et al.Thermal thresholds of lipid restructuring and delta(9)-desaturase expression in the liver of carp(Cyprinus carpio L.)［J］.Journal of Experimental Biology，2000，203(3):641-650.

Waagner D，Holmstrup M，Bayley M，et al.Induced cold-tolerance mechanisms depend on duration of acclimation in the chill-sensitive Folsomia candida(Collembola)［J］.The Journal of Experimental Biology，2013，216(11):1991-2000.

Watanabe M，Tanaka K，1998.Adult diapause and cold hardiness in Aulacophora nigripennis(Coleoptera:Chrysomelidae)［J］.Journal of Insect Physiology，44(11):1103-1110.

Wu JX，Yuan F，Zhang YM.Changes of fatty acids in larvae of the wheat blossom midge，Sitodiplosis mosellana(Gehin)(Diptera:Cecidomyiidae)［J］.Insect Science，2001，8(4):315-322.

Yang DR，Shen FR，Yang YX，et al.Study on ecology of Hepialidae III.The overwinter larva and its physiological regulation［J］.Zoological Research，1988，9(S1):43-47.［楊大榮，沈發(fā)榮，楊躍雄，等.蟲草蝠蛾生態(tài)學(xué)的研究Ⅲ.幼蟲越冬與生理調(diào)節(jié)［J］.動物學(xué)研究，1988，9(S1):43-47］

Yocum GD.Differential expression of two HSP70 transcripts in response to cold shock，thermoperiod，and adult diapause in the Colorado potato beetle［J］.Journal of Insect Physiology，2001，47(10):1139-1145.

Zhang R，Ma J.Insect supercooling point and its influence factors［J］.Tianjin Agricultural Sciences，2013，19(11):76-84.［張瑞，馬紀(jì).昆蟲過冷卻點的影響因素概述［J］.天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，19(11):76-84］

Zeng SS，Jiang LM，Yuan DJ.Research and dvelopment of fatty acid desaturase［J］.Chinese Bulletin of Life Sciences，2008，20(5):816-820.［曾碩士，江黎明，元冬娟.脂肪酸去飽和酶的研究進展［J］.生命科學(xué)，2008，20(5):816-820］

Zerai DB，F(xiàn)itzsimmons KM，Collier RJ.Transcriptional Response of Delta-9-Desaturase Gene to Acute and Chronic Cold Stress in Nile Tilapia，Oreochromis niloticus［J］.Journal of the World Aquaculture Society，2010，41(5):800-806.

Zhou XR，Horne I，Damcevski K，et al.Isolation and functional characterization of two independently-evolved fatty acid Δ12-desaturase genes from insects［J］.Insect Molecular Biology，2008，17(6):667-676.

Zou ZW.On the Insects of the Genus Thitarodes in Mt.Sejila of Tibet［D］.Guangzhou:Sun Yat-sen University，2009.［鄒志文.西藏色季拉山鉤蝠蛾屬Thitarodes 昆蟲研究［D］.廣州:中山大學(xué)，2009］

Zou ZW，Liu X，Wang JH，et al.Effects of low temperatures on the fatty acid composition of Hepialus jianchuanensis larvae［C］.In:Biomedical Engineering and Informatics(BMEI)，2010 3rdInternational Conference on.IEEE，2010，6:2560-2564.