姚 薇，楊 超，梁偉峰，劉 云

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030）

犬乳腺腫瘤的發(fā)病率僅次于皮膚腫瘤[1]，其中良性腫瘤占50%以上，但惡性腫瘤的發(fā)病率逐年上升，是造成病犬死亡的重要原因。乳腺腫瘤多發(fā)生于母犬，是母犬全部腫瘤性疾病的50%，占母犬生殖系統(tǒng)疾病的82%[2]。有文獻(xiàn)報(bào)道，表皮生長(zhǎng)因子受體-2（HER-2）在腫瘤的形成及生長(zhǎng)過(guò)程中起著重要的調(diào)控作用，其超表達(dá)能阻止腫瘤細(xì)胞凋亡并促進(jìn)其生長(zhǎng)[3]。抑癌基因p53 與人類(lèi)的半數(shù)腫瘤相關(guān)，當(dāng)該基因受到刺激后可發(fā)揮細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞凋亡、維持基因組穩(wěn)定等功能[4]。這兩種基因在正常情況下表達(dá)量極低，不易檢測(cè)，而在腫瘤發(fā)生的時(shí)候有明顯的蛋白過(guò)表達(dá)，在惡性腫瘤中表達(dá)量更高。雖然這兩種基因的蛋白檢測(cè)在臨床上已經(jīng)有所應(yīng)用，卻并沒(méi)有資料顯示腫瘤類(lèi)型與兩種基因的過(guò)表達(dá)的關(guān)系。本文通過(guò)觀察44 例犬乳腺腫瘤的組織學(xué)形態(tài)，將其分類(lèi)，并用免疫組化法檢測(cè)HER-2 與p53 的蛋白表達(dá)，分析兩種基因的表達(dá)與犬乳腺腫瘤的病理學(xué)關(guān)系，旨在分析腫瘤類(lèi)型與兩種基因的表達(dá)量及表達(dá)強(qiáng)度的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 本材料來(lái)源于東北農(nóng)業(yè)大學(xué)附屬動(dòng)物醫(yī)院。一抗：RAB-0156 即用型C-erbB-2 兔抗人多克隆抗體，購(gòu)自Maixin 公司；BS6437 p53 多克隆抗體，購(gòu)自Bioword 公司。

SA1022 兔IGg-免疫組化試劑盒（SABC即用型），購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 組織學(xué)形態(tài)的觀察 將腫瘤組織分割成大小約1 cm 左右的小塊，用4%多聚甲醛溶液固定24 h后，進(jìn)行修塊、脫水處理，石蠟包埋，備用。蠟塊作4 μm 連續(xù)切片。H.E.染色，常規(guī)病理學(xué)觀察。

1.2.2 HER-2、p53 蛋白表達(dá)的檢測(cè) 免疫組化法檢測(cè)HER-2、p53 蛋白的表達(dá)，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.3 試驗(yàn)結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn) 病理分類(lèi)：腫瘤的病理分類(lèi)根據(jù)WHO分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)[5]。

免疫組化：p53 以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性；HER-2 以細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。高倍視野下隨意計(jì)數(shù)100 個(gè)腫瘤細(xì)胞，（-）完全沒(méi)有著色或少于10%腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞膜著色；（+）大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)微弱、不完整的細(xì)胞膜著色；（++）大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)弱至中度完整的細(xì)胞膜著色；（+++）大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)的、完整的細(xì)胞膜著色[6]。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 組織形態(tài)學(xué)觀察 44 例犬乳腺腫瘤病理組織切片中，通過(guò)H.E.染色共觀察到9 種類(lèi)型腫瘤，其分類(lèi)及所占比例如表1 所示。

2.2 HER-2、p53 蛋白表達(dá) 42 例犬乳腺腫瘤中HER-2、p53 蛋白的表達(dá)情況如圖2 所示，從表2中可以發(fā)現(xiàn)HER-2 在良性腫瘤中無(wú)表達(dá)，在惡性腫瘤中的表達(dá)率為38.9%；p53 在犬乳腺腫瘤中的表達(dá)可達(dá)78.6%，而在惡性腫瘤中的表達(dá)更是高達(dá)100%。從表達(dá)強(qiáng)度來(lái)看，p53 在18 例惡性腫瘤中15 例為（+++），3 例（++）；在24 例良性腫瘤中，有20 例為（+）。HER-2 在18 例惡性腫瘤中，3 例（+），4 例（++）。

表1 44例犬乳腺腫瘤分類(lèi)情況

表2 HER-2與p53在犬乳腺腫瘤中的表達(dá)情況

3 討論

姚華等曾在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤的發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于良性[7]。本試驗(yàn)所收集的44 例乳腺腫瘤中，良性腫瘤占54.5%，惡性達(dá)45.5%，兩者比例相接近。腫瘤的分類(lèi)及惡性程度對(duì)預(yù)后有一定影響。患良性腫瘤的犬在切除后基本無(wú)復(fù)發(fā)，惡性腫瘤的犬則有不同程度的復(fù)發(fā)。腫瘤的大小對(duì)其是否復(fù)發(fā)有很大影響，如腫瘤大于5 cm，其復(fù)發(fā)較快且復(fù)發(fā)率高；對(duì)于有淋巴轉(zhuǎn)移的患犬，往往在手術(shù)后很快復(fù)發(fā)，且1-2年內(nèi)死亡；浸潤(rùn)性癌在預(yù)后方面效果不佳。

研究表明，30%的人類(lèi)腫瘤中存在HER-2 基因的擴(kuò)增/過(guò)表達(dá)，乳腺癌中HER-2 的擴(kuò)增和過(guò)表達(dá)，對(duì)于評(píng)價(jià)預(yù)后、預(yù)測(cè)化療與內(nèi)分泌治療反應(yīng)及是否選擇Herceptin 治療意義重大[8]。臨床經(jīng)驗(yàn)表明，HER-2 的表達(dá)較低且全部出現(xiàn)于惡性腫瘤中，對(duì)臨床診斷有相當(dāng)?shù)膬r(jià)值。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，HER-2 在良性腫瘤中無(wú)表達(dá)，在惡性腫瘤的陽(yáng)性表達(dá)為38.9%。這一結(jié)果與Dutra AP[9]和Gama A[10]報(bào)道的結(jié)果相似。在惡性腫瘤的表達(dá)中，浸潤(rùn)性癌、黏液癌及混合樣癌中均有HER-2 的表達(dá)，但在髓樣癌中無(wú)表達(dá)；在表達(dá)強(qiáng)度上，浸潤(rùn)性癌和混合樣癌中表達(dá)量較高且強(qiáng)，HER-2 的檢測(cè)可在這兩種類(lèi)型的腫瘤的診斷上有指導(dǎo)意義。

Helal 等（2000）研究發(fā)現(xiàn)，p53 的表達(dá)與腫瘤組織的惡性程度有關(guān)，王坤等[11]測(cè)得正常乳腺組織中p53 蛋白呈陰性，而在乳腺癌中p53 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為65.63%。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，p53 在各類(lèi)型的惡性腫瘤中均有表達(dá)，其表達(dá)量可達(dá)100%；強(qiáng)陽(yáng)性（+++）結(jié)果出現(xiàn)在小葉癌、導(dǎo)管癌和髓樣癌中，占全部惡性腫瘤中的83.3%。，可見(jiàn)p53 的表達(dá)強(qiáng)度與乳腺腫瘤的惡性度及腫瘤類(lèi)型有關(guān)，可用作乳腺腫瘤診斷與分級(jí)的參考指標(biāo)，對(duì)臨床預(yù)后判斷有一定意義。

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