王曉潤(rùn)，劉增加，馬睿麟，張 芳，沈艷麗，趙全邦

（1.青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，青海 西寧 810001；2.蘭州軍區(qū)疾病預(yù)防控制中心，甘肅 蘭州 730030）

萊姆病（Lyme disease）,是一種全球性自然疫源性人、畜共患疾病，從1977 年美國(guó)Stere 博士發(fā)現(xiàn)以來(lái)，五洲均報(bào)道新發(fā)現(xiàn)此病，且發(fā)病區(qū)域有擴(kuò)展趨勢(shì)，已成為世界性衛(wèi)生問(wèn)題，被世衛(wèi)組織列為必須加以防控的人、畜共患病。

我國(guó)于1986 年首次在東北遼寧報(bào)道人感染萊姆病，目前已有29 個(gè)省、市、自治區(qū)報(bào)道人感染此病。

青海省是我國(guó)西部幅員遼闊、地貌復(fù)雜，高海拔的省區(qū)，全省平均海拔達(dá)3 000 m 以上，擁有林地面積280 萬(wàn)km2，地貌特征為東低西高，東部農(nóng)區(qū)海拔低、西南部牧區(qū)海拔高，自然環(huán)境植被方面有很大的差異。青海省人間感染萊姆病早有報(bào)道，劉光潤(rùn)[2]、姜雙應(yīng)[3]、岳建寧[4]等報(bào)道了青海檢測(cè)地區(qū)人患萊姆病陽(yáng)性率達(dá)15%，證實(shí)在檢測(cè)地區(qū)人的萊姆病血清學(xué)陽(yáng)性率較高。特別是劉增加[6]等研究報(bào)告，在與青海省南部接壤的甘肅西部森林草原地帶牦牛萊姆病自然感染率高達(dá)70%、旱獺50%和野兔25%。而且青海省內(nèi)棲息眾多的小型嚙齒動(dòng)物和蜱類(lèi)昆蟲(chóng)；結(jié)合孫毅，許榮滿，劉增加等（中華硬蜱、越原血蜱和青海血蜱經(jīng)期傳播萊姆病螺旋體的實(shí)驗(yàn)研究），青海省具備萊姆病的生態(tài)學(xué)和生物學(xué)基礎(chǔ)。

根據(jù)青海省未見(jiàn)有動(dòng)物感染報(bào)道的情況，我們?cè)?011-2012 年分別選擇農(nóng)區(qū)2 個(gè)縣，牧區(qū)4 個(gè)縣對(duì)牛、蜱、鼠類(lèi)進(jìn)行了萊姆病流行病學(xué)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查縣和調(diào)查對(duì)象 我們?cè)?011-2012 年分別選擇農(nóng)區(qū)2 縣（地貌為森林和小灌木草場(chǎng)，適宜青海血蜱生長(zhǎng)）和牧區(qū)4 縣（環(huán)青海湖草甸沼澤草場(chǎng)及祁連山高山森林草場(chǎng)，適宜草原革蜱生長(zhǎng)），對(duì)周邊牦牛、黃牛、鼠、蜱帶菌情況進(jìn)行了監(jiān)測(cè)。

1.2 標(biāo)本來(lái)源 牦牛、黃牛血清采集當(dāng)?shù)剞r(nóng)區(qū)圈養(yǎng)黃牛、牧區(qū)放牧牦牛的靜脈血5 mL，靜置或離心分離出血清置4 ℃冰箱待檢；對(duì)捕獲鼠無(wú)菌取心、肝、脾、腎、腦冷凍待檢；采集蜱用布旗法在各類(lèi)草場(chǎng)和牛體表捕捉相結(jié)合的方法（農(nóng)區(qū)為青海血蜱、牧區(qū)為草原革蜱），共采集蜱227 只。

1.3 樣品處理 將蜱標(biāo)本去除吸血蜱，置70 度酒精浸泡，用生理鹽水洗3 次，濾紙吸干。將單只蜱放入0.5 mL 離心管中，加入TE 50 μL，破碎后100 ℃水煮10 min，離心半徑10 cm，5 000 r/min 離心5 min，取上清-20 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 試驗(yàn)材料來(lái)源 B31 標(biāo)準(zhǔn)菌株、抗原片、抗B31 熒光IgG 抗體、BSK 培養(yǎng)基、陽(yáng)性血清、PCR 檢測(cè)萊姆病試劑盒，直接免疫熒光試劑盒均通過(guò)合作單位蘭州軍區(qū)購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所。

1.5 檢測(cè)方法 萊姆病伯氏螺旋體檢測(cè)，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）；伯氏疏螺旋體直接熒光法(DFA)；血清抗體（IgG）檢測(cè)，采用間接免疫熒光法（IFA）。

2 結(jié)果

2.1 牛血清用間接熒光抗體法（IFA）將血清用PBS（0.01 mol/L pH 值7.4）從1∶16 開(kāi)始稀釋?zhuān)∠♂尯玫难宓渭佑诳乖字校?7 ℃孵育45 min，取出用PBS（0.01 mol/L pH 值7.4）及蒸餾水沖洗晾干，點(diǎn)上FITC標(biāo)記的熒光二抗，37 ℃孵育45 min，沖洗晾干后，置熒光顯微鏡下觀察。結(jié)果判定：萊姆病血清效價(jià)≥128，判為陽(yáng)性。統(tǒng)計(jì)分析：應(yīng)用X2檢驗(yàn)比較不同地區(qū)陽(yáng)性率的差異，統(tǒng)計(jì)處理應(yīng)用SPSS10.0軟件。共檢測(cè)血清200 份，陽(yáng)性29 份，陽(yáng)性結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 蜱帶伯氏疏螺旋體直接熒光法（DFA）檢查結(jié)果 對(duì)各調(diào)查點(diǎn)采集的處理好的樣品蜱227只經(jīng)DFA處理，熒光顯微鏡檢查，其中有53 只蜱攜帶典型萊姆病螺旋體，蜱平均帶菌率達(dá)23.35%，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 鼠類(lèi)標(biāo)本（PCR）檢測(cè)結(jié)果 萊姆病伯氏螺旋體檢測(cè)，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)捕獲鼠類(lèi)102 只，陽(yáng)性21 份，平均陽(yáng)性率20.59%，結(jié)果見(jiàn)表1。

以上結(jié)果顯示，牛萊姆病平均感染率14.7%，蜱蟲(chóng)平均帶菌率牧區(qū)23.34%，鼠類(lèi)萊姆病平均感染率20.58%。

表1 青海省6縣動(dòng)物萊姆病流調(diào)結(jié)果 頭/只

3 討論

本次調(diào)查采用現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查采樣、血清學(xué)、分子生物學(xué)、臨床學(xué)、病原學(xué)等綜合手段，證實(shí)了上述采樣縣具備萊姆病自然疫源地，根據(jù)參考文獻(xiàn)和本次調(diào)查及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，家畜牛和鼠類(lèi)是萊姆病的重要宿主動(dòng)物之一，同時(shí)蜱蟲(chóng)和鼠類(lèi)感染高于人類(lèi)和牛只，青海省蜱蟲(chóng)從4 月下旬開(kāi)始出現(xiàn)，5月底為高峰，6 月底基本消失。本次調(diào)查也證實(shí)了青海省畜間牛只有萊姆病的感染，同時(shí)，對(duì)于萊姆病的獨(dú)立自然疫源循環(huán)“鼠-蜱”維持，還有待進(jìn)一步調(diào)查研究，對(duì)于省內(nèi)大量的野生動(dòng)物是否也是伯氏疏螺旋體的儲(chǔ)存宿主，省內(nèi)小型嚙齒動(dòng)物（鼠類(lèi)）是否為“哨點(diǎn)動(dòng)物”，還需進(jìn)一步檢測(cè)。對(duì)畜間如何避蜱放牧，提出有效防控此病的措施，需要進(jìn)一步搞好人間、畜間防疫部門(mén)的協(xié)調(diào)，以便更好的控制此病對(duì)人、畜的危害。

該項(xiàng)研究結(jié)果表明，本次調(diào)查采樣的6 縣存在萊姆病自然疫源地，這將對(duì)于公共衛(wèi)生及人畜健康造成極大損害，應(yīng)當(dāng)引起上級(jí)有關(guān)部門(mén)的警覺(jué)，早日將防控萊姆病安排到議事日程上，部署對(duì)此病的防控。

[1]張哲夫，竇桂蘭.中國(guó)萊姆病螺旋體生物媒介的初步調(diào)查[J].中華流行病學(xué)雜志，1992（5）：13.

[2]劉光潤(rùn)，馬秀蘭.青海省三縣林區(qū)萊姆病血清流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)公共衛(wèi)生學(xué)報(bào)，1995（4）：46.

[3]姜雙應(yīng)，易虎，鞏天祥，等.青海省同德縣萊姆病血清流行病學(xué)調(diào)查分析）[J].青海醫(yī)藥雜志，2001（12）：56

[4]岳建寧.石燕，青海省部分林區(qū)萊姆病流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志，2009（4）：17-19.

[5]孫毅，許榮滿，劉增加，等.中華硬蜱、越原血蜱和青海血蜱經(jīng)期傳播萊姆病螺旋體的實(shí)驗(yàn)研究[J].昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2003（6）：66-67.

[6]劉增加，華滿堂，石淑珍.西北部分地區(qū)萊姆病與人、家養(yǎng)動(dòng)物、嚙齒動(dòng)物關(guān)系的研究[J].醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制，2000，16（6）：298-301.