劉桂英 , 葛 坤, 宋 倫 , 張瑜洋, 王年斌

(1. 遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院, 遼寧 大連 116023； 2. 遼寧省海洋環(huán)境監(jiān)測(cè)總站, 遼寧 大連 116023；3. 大連海洋學(xué)校, 遼寧 大連 116023； 4. 大連市水產(chǎn)研究所, 遼寧 大連 116023)

米氏凱倫藻(Karenia mikimotoi)常見于溫帶和熱帶淺海水域, 是一種典型的魚毒性赤潮藻。近幾年來,米氏凱倫藻與其他藻類多次在渤海引發(fā)赤潮, 污染面積和次數(shù)逐漸增大。作為一種有毒藻類, 米氏凱倫藻能分泌溶血性毒素, 危害魚類和無脊椎動(dòng)物, 引起養(yǎng)殖生物死亡, 造成漁業(yè)經(jīng)濟(jì)損失[1], 嚴(yán)重破壞了海洋生態(tài)系統(tǒng), 甚至通過食物鏈的傳播, 威脅到人類的健康。因此, 對(duì)米氏凱倫藻的監(jiān)測(cè)和研究一直是各國(guó)海洋工作者的熱點(diǎn)。本文就近年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)米氏凱倫藻在分類及鑒定、生物行為及影響因素、監(jiān)測(cè)研究、化學(xué)成分、生物活性等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 分類及鑒定研究

米氏凱倫藻(Karenia mikimotoi)屬于甲藻門(Pyrrophyta), 裸甲藻目(Gymnodiniales), 凱倫藻屬(Karenia), 中文譯名有米氏裸甲藻、米金裸甲藻和長(zhǎng)崎裸甲藻。藻體單細(xì)胞, 營(yíng)游泳生活, 細(xì)胞長(zhǎng)15.6～31.2 μm, 寬 13.2～24 μm, 是常見的有毒、有害赤潮藻。最早于1935年在日本京都Gokasho灣被發(fā)現(xiàn)[2], 隨后在美洲灣、英吉利海峽等全球海域都被發(fā)現(xiàn)[3]。1998年3～4月, 中國(guó)南海大鵬灣、深圳灣、珠江口及內(nèi)伶仃島一帶海域和香港海域發(fā)生大規(guī)模米氏凱倫藻赤潮[4], 之后, 由米氏凱倫藻引起的赤潮在中國(guó)沿海頻繁爆發(fā)。

米氏凱倫藻的經(jīng)典分類及鑒定標(biāo)準(zhǔn)主要依靠細(xì)胞的形態(tài)特征和生活史。形態(tài)特征是微藻的表形特征, 容易受環(huán)境的影響, 而且難以通過上述的檢測(cè)對(duì)形態(tài)形似的物種加以定論, 造成誤判。分子水平研究技術(shù)的出現(xiàn)和發(fā)展, 為凱倫藻屬的經(jīng)典分類及鑒定提供了更多重要的科學(xué)依據(jù)。

米氏凱倫藻的的分子鑒定方法主要有核糖體DNA序列分析法, 熒光原位雜交法, 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù), 恒溫核酸擴(kuò)增法(LAMP)等等。從分子水平鑒定藻類是近年來研究的熱點(diǎn), 解決了從形態(tài)上難以區(qū)分的藻類分類和鑒定的難點(diǎn)。但是每一方法都有自身的缺點(diǎn), 核糖體 DNA序列分析法是通過PCR擴(kuò)增并測(cè)序來檢測(cè)基因的方法, 此種方法靈敏度不夠, 所需時(shí)間較長(zhǎng), 一般 2～3 h。熒光原位雜交法非常靈敏, 但是操作步驟繁瑣, 雜交需要過夜。熒光定量 PCR方法快速, 靈敏度高, 但是熒光定量PCR儀價(jià)格昂貴。PCR法和熒光定量PCR法均需要用到 PCR儀器, 熒光原位雜交檢測(cè)周期長(zhǎng), 均不適合用于現(xiàn)場(chǎng)的快速檢測(cè), 而恒溫核酸擴(kuò)增法對(duì)引物的要求又較高, 因此, 國(guó)內(nèi)外學(xué)者根據(jù)不同的需求采用適宜的方法對(duì)米氏凱倫藻進(jìn)行研究。

目前, 采用分子生物學(xué)手段結(jié)合形態(tài)特征對(duì)米氏凱倫藻分類鑒定, 已經(jīng)成為一種普遍接受的方式。2000年, Hansen等[5]根據(jù)超微結(jié)構(gòu)和分子生物學(xué)數(shù)據(jù), 將米氏凱倫藻與短裸甲藻這兩個(gè)種區(qū)分開并從裸甲藻屬獨(dú)立出來, 建立凱倫藻屬。鄭俊斌等[6]對(duì)米氏凱倫藻的核糖體18S rDNA及其轉(zhuǎn)錄間隔(ITS) 區(qū)序列PCR擴(kuò)增并測(cè)序, 獲得18SrDNA和ITS基因序列長(zhǎng)度分別為1690 bp和654 bp。結(jié)合12種甲藻和1種硅藻作序列比較分析, 分別在 ITS1、ITS2序列尋找到適宜設(shè)計(jì)特異性引物探針區(qū)域, 并用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹, 研究各藻種間親緣關(guān)系。遺傳距離分析結(jié)果顯示米氏凱倫藻與短凱倫藻、微小卡羅藻等分類學(xué)上較近的藻種 18S rDNA序列相似度為97% ～ 99%, 遠(yuǎn)大于微小原甲藻、海洋原甲藻、塔瑪亞歷山大藻等在分類學(xué)上相距較遠(yuǎn)的藻種, 各藻種間的ITS序列平均相似度明顯低于18S rDNA序列。以18S rDNA與ITS序列構(gòu)建的進(jìn)化樹拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)相一致, 18S rDNA序列相對(duì)保守, 適合進(jìn)行屬以上關(guān)系的系統(tǒng)進(jìn)化分析, 而ITS序列變異較大, 適合種屬間鑒別分析, 且ITS1和ITS2是變異很大的區(qū)域, 適合種間的分子特異性鑒定, 這為快速鑒別赤潮多發(fā)藻米氏凱倫藻提供了依據(jù)。根據(jù)以上方法, 他們成功利用核糖體 ITS區(qū)分別設(shè)計(jì)出針對(duì)米氏凱倫藻與環(huán)狀異帽藻的特異性 PCR引物, 通過特異性引物成功鑒定了兩種外來入侵藻, 為赤潮的預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)提供分子鑒定基礎(chǔ)[7]。張鳳英等[8]利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)(LAMP)[9]技術(shù)對(duì)采自南海的米氏凱倫藻進(jìn)行檢測(cè),針對(duì)米氏凱倫藻設(shè)計(jì)了4種引物并對(duì)其LAMP反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化, 得到了較為理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果, 因此,從分子水平上鑒定藻類種間的差異是國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的焦點(diǎn)。

2 生物行為及影響因素研究

米氏凱倫藻是重要的海洋赤潮甲藻, 對(duì)海洋生態(tài)系統(tǒng)和漁業(yè)養(yǎng)殖有重要的影響。因此, 米氏凱倫藻的生物行為及影響因素對(duì)于研究赤潮的發(fā)生發(fā)展機(jī)制, 提出控制措施至關(guān)重要。

微藻生長(zhǎng)受到多種環(huán)境因子(包括光照、鹽度、溫度、營(yíng)養(yǎng)水平等)和生物因素的綜合影響, 其中氮、磷、硅等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)微藻的自養(yǎng)生長(zhǎng)起著至關(guān)重要的作用。因此, 在磷限制的富營(yíng)養(yǎng)化海域中爆發(fā)甲藻赤潮,很可能跟甲藻的一些特殊環(huán)境適應(yīng)策略有關(guān)[10], 營(yíng)養(yǎng)鹽是赤潮發(fā)生的首要物質(zhì)基礎(chǔ)[11], 海洋微藻共存在這個(gè)生態(tài)系統(tǒng)中, 共同利用同一種營(yíng)養(yǎng)鹽, 形成對(duì)營(yíng)養(yǎng)鹽的競(jìng)爭(zhēng)[12]。因此, 營(yíng)養(yǎng)鹽的變化能引起海洋微藻群落的變動(dòng), 適宜藻類將占據(jù)優(yōu)勢(shì), 而不適宜的藻類將被抑制, 甚至被淘汰。研究發(fā)現(xiàn), 米氏凱倫藻在硝酸鹽和磷酸鹽較高時(shí)能達(dá)到赤潮密度, 引發(fā)赤潮, 而且米氏凱倫藻能在赤潮密度下維持3d[13]。

米氏凱倫藻具有吞噬能力[14-15], 能夠吞噬細(xì)菌、金藻和隱藻等, 吞噬營(yíng)養(yǎng)對(duì)米氏凱倫藻生長(zhǎng)的促進(jìn)作用明顯, 混合營(yíng)養(yǎng)在甲藻赤潮的形成及發(fā)展過程中可能發(fā)揮重要作用, 因此, 開展赤潮甲藻吞噬營(yíng)養(yǎng)行為的研究有助于深入了解赤潮甲藻的營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)策略機(jī)制, 解釋某些甲藻赤潮在低營(yíng)養(yǎng)鹽濃度下爆發(fā)和長(zhǎng)時(shí)間維持的機(jī)制[16-18]。

相生相克作用又稱他感作用, 是指一種植物通過向體外分泌代謝過程中的化學(xué)物質(zhì), 對(duì)其他植物產(chǎn)生直接或間接的影響[19], 它是影響浮游植物藻間相互作用和群落演替的重要因子[20], 在影響赤潮生消中起到重要作用[21-22]。Roy等[23]發(fā)現(xiàn)某些微藻釋放的有毒他感物質(zhì)能抑制其他微藻的生長(zhǎng), 從而在競(jìng)爭(zhēng)中占據(jù)優(yōu)勢(shì)而成為赤潮爆發(fā)的潛在誘因。米氏凱倫藻和赤潮異彎藻均能產(chǎn)生具有一定細(xì)胞毒性的他感類物質(zhì)[24-25], 當(dāng)米氏凱倫藻的種群密度達(dá)到一定數(shù)量時(shí), 通過細(xì)胞的直接接觸可使赤潮異彎藻的生長(zhǎng)受到抑制。但是赤潮異彎藻對(duì)米氏凱倫藻的抑制作用遠(yuǎn)大于米氏凱倫藻對(duì)赤潮異彎藻的抑制, 這說明了赤潮異彎藻細(xì)胞除了通過釋放他感物質(zhì)到環(huán)境中, 還可以通過細(xì)胞接觸影響米氏凱倫藻的生長(zhǎng)和種群密度的大小[26]?；粼拥萚27]研究發(fā)現(xiàn)大型綠藻滸苔組織內(nèi)含有并在培養(yǎng)過程中分泌克藻物質(zhì),對(duì)米氏凱倫藻的生長(zhǎng)表現(xiàn)出致死效應(yīng)或較強(qiáng)的克生效應(yīng)。在海洋生態(tài)系統(tǒng)中, 利用大型海藻對(duì)海洋微藻的克生作用對(duì)赤潮進(jìn)行生物防治, 近年來也引起了較大關(guān)注。

3 赤潮米氏凱倫藻監(jiān)測(cè)研究

2001～2006年, 中國(guó)共發(fā)生米氏凱倫藻赤潮 59次, 累計(jì)面積25 920km2, 是中國(guó)近海赤潮第二優(yōu)勢(shì)種[28]。2009年, 東海區(qū)海域共發(fā)現(xiàn)赤潮48次, 累計(jì)影響面積7 244 km2, 主要赤潮生物有中肋骨條藻、夜光藻、東海原甲藻、米氏凱倫藻、赤潮異灣藻等10種。與2008年相比, 次數(shù)持平, 單次發(fā)生赤潮面積較小, 超過500 km2的赤潮3次, 僅占發(fā)生總次數(shù)的 6.25%[29]。米氏凱倫藻還經(jīng)常出現(xiàn)在福建沿海的赤潮群落中, 有時(shí)與東海原甲藻一起形成雙相赤潮,2001～ 2008年福建沿岸海域共發(fā)生17次米氏凱倫藻赤潮(其中 9次為第二優(yōu)勢(shì)種, 多數(shù)與東海原甲藻混合形成赤潮), 占赤潮發(fā)生總數(shù)的 9.2%, 出現(xiàn)時(shí)間為5～6月, 赤潮持續(xù)時(shí)間多數(shù)在12 d之內(nèi), 有1次在連江近岸海域的赤潮持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng), 達(dá)35 d[30]。

由于海水的富營(yíng)養(yǎng)化, 有毒、有害赤潮發(fā)生頻率和面積持續(xù)大幅度增加, 給人類造成嚴(yán)重危害, 因此, 運(yùn)用合理、全面的監(jiān)測(cè)方法, 及時(shí)有效地對(duì)引起赤潮的米氏凱倫藻生物源進(jìn)行監(jiān)測(cè), 對(duì)于赤潮的預(yù)防和治理有重要意義。

邊梅等[31]運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)檢測(cè)了2009年春(5月)、夏(8月)、秋(11月)3個(gè)季節(jié)九龍江口18個(gè)站位水樣中米氏凱倫藻的密度。這3個(gè)季節(jié)分別對(duì)應(yīng)九龍江口水域的豐水期、平水期、枯水期。結(jié)果表明, 在九龍江口水中米氏凱倫藻的檢出密度為0～2.3×104個(gè)/L, 其空間分布差異比較大, 主要分布在廈門西港海域, 其次是在高潮時(shí)的海門島附近海域； 海門島以西水域幾乎未監(jiān)測(cè)到該藻的存在。米氏凱倫藻密度的季節(jié)分布差異也很明顯, 春、夏季的密度(最高檢出值都達(dá)到了 2.3 ×104個(gè)/L)明顯高于秋季的密度(最高檢出值僅為 5.4×103個(gè)/L), 本研究結(jié)果為廈門西港以及九龍江口水域赤潮的研究與監(jiān)測(cè)提供參考。姚煒民等[32]通過對(duì)2005年5月30日發(fā)生在浙江海域米氏凱倫藻赤潮的連續(xù)監(jiān)測(cè)分析,表明米氏凱倫藻生長(zhǎng)所需最佳水溫為 23.4～23.8℃,其密度與水體中的無機(jī)氮呈負(fù)相關(guān), 與磷酸鹽呈正相關(guān)。王金輝等[33]對(duì)長(zhǎng)江口赤潮多發(fā)區(qū)的有毒藻類和貝類原產(chǎn)地赤潮毒素的連續(xù)監(jiān)測(cè), 表明米氏凱倫藻是該海域存在的多種潛在有毒藻類之一, 并于2005年 5～6月在長(zhǎng)江口海域形成大規(guī)模赤潮, 導(dǎo)致大量養(yǎng)殖魚類死亡。穩(wěn)定的溫鹽條件和富營(yíng)養(yǎng)水質(zhì)對(duì)米氏凱倫藻的生長(zhǎng)繁殖是基本而且重要的條件[30]。

米氏凱倫藻生物源的監(jiān)測(cè)方法主要是通過實(shí)地采集水樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室分析, 得到的只是點(diǎn)狀數(shù)據(jù),難以對(duì)大面積水域情況進(jìn)行計(jì)算。遙感技術(shù)是能夠識(shí)別地面(水域)物質(zhì)的性質(zhì)和運(yùn)動(dòng)狀態(tài)的現(xiàn)代化技術(shù)。目前, 遙感技術(shù)對(duì)引起赤潮的藻類生物源進(jìn)行監(jiān)測(cè)的研究已有報(bào)道[34-35], 與傳統(tǒng)監(jiān)測(cè)方法相比, 遙感監(jiān)測(cè)技術(shù)具有宏觀性、經(jīng)濟(jì)性、動(dòng)態(tài)性、時(shí)效性等特點(diǎn), 但是對(duì)于米氏凱倫藻的監(jiān)測(cè)研究還未見報(bào)道。

4 化學(xué)成分及生物活性研究

對(duì)米氏凱倫藻化學(xué)成分及生物活性的研究主要集中在米氏凱倫藻產(chǎn)生的毒素成分和毒素效應(yīng)方面,毒素成分包括溶血毒素、活性氧和細(xì)胞毒素等, 毒素效應(yīng)主要是毒素成分引發(fā)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化, 對(duì)細(xì)胞造成氧化損傷。

4.1 化學(xué)成分研究

4.1.1 溶血毒素

米氏凱倫藻產(chǎn)生的溶血毒素是造成魚類大量死亡的主要原因之一, 其主要成分為糖脂類、糖苷類和不飽和多脂肪酸類化合物, 也有少數(shù)蛋白質(zhì)和肽類物質(zhì)。Mooney[36]發(fā)現(xiàn)米氏凱倫藻可產(chǎn)生長(zhǎng)鏈脂肪酸,包括 OPA、廿二碳六烯酸、十六烷基四烯酸等, 其中大部分為不飽和脂肪酸, 部分脂肪酸具有溶血活性, OPA[37]能抑制細(xì)胞中Mg2+-ATP酶和Na+, K+-ATP酶活性, 使魚鰓組織的細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)發(fā)生變化。Parrish等[38]發(fā)現(xiàn), 從米氏凱倫藻中分離出的單半乳糖甘油二酯(MGDG)和雙半乳糖甘油二酯(DGDG)均具有溶血毒性, 占米氏凱倫藻脂類17%。Yasumoto[39]指出米氏凱倫藻溶血毒素是一種含有兩個(gè)不飽和脂肪酸的糖基二乙?；视? 水解之后產(chǎn)生一個(gè)多不飽和去糖基甘油酯和一個(gè)多不飽和脂肪酸。Parrish[38]認(rèn)為, 米氏凱倫藻中溶血活性最高的物質(zhì)是十八烷基季戊烯酸, 其次為含20∶5的二半乳糖單?；视?。

溶血毒素造成魚鰓小葉上皮細(xì)胞增生、鄰近鰓葉粘連、上皮細(xì)胞脫落、鰓血管破裂、血細(xì)胞滲出等病理現(xiàn)象, 進(jìn)一步導(dǎo)致魚類呼吸困難, 導(dǎo)致魚類死亡[40]。通過對(duì)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的米氏凱倫藻的溶血活性研究表明[41], 米氏凱倫藻的溶血活性約為 64.69 HUL-1±6.43HUL-1, 而且溶血活性隨著溫度(0～37℃)的增加而增加, 環(huán)境條件對(duì)米氏凱倫藻不同藻株溶血毒素也會(huì)產(chǎn)生影響[42]。楊維東[43]研究表明米氏凱倫藻溶血毒素的含量受其他藻類共同生長(zhǎng)的影響。

4.1.2 活性氧

Yamasaki[44]等指出米氏凱倫藻可產(chǎn)生超氧陰離子和過氧化氫, 它們通過氧化細(xì)胞膜的膜脂, 使核酸和蛋白質(zhì)變性等途徑, 最終可能導(dǎo)致魚類等動(dòng)物死亡。米氏凱倫藻細(xì)胞內(nèi)可能存在專門儲(chǔ)存H2O2的細(xì)胞器, 因?yàn)樵诿资蟿P倫藻細(xì)胞懸液中加入過氧化氫酶后, H2O2沒有檢出； 加入SOD后, 有微量H2O2檢出； 經(jīng)超聲波破裂的細(xì)胞懸液中 H2O2含量明顯高于經(jīng)SOD處理的細(xì)胞懸液。

4.1.3 細(xì)胞毒素

到目前為止, 國(guó)內(nèi)外學(xué)者從米氏凱倫藻中分離得到分子質(zhì)量比較大的梯狀聚醚類化合物[45-46], 分子由 14個(gè)以上環(huán)醚接合而成, 分子質(zhì)量超過 1000,其命名分別為Gymnocin A和Gymnocin B。Gymnocin A由14個(gè)相連的飽和醚環(huán)和2-甲基-2-丁烯的側(cè)鏈構(gòu)成, 分子式為 C55H8O18, 對(duì)小鼠淋巴瘤 P388細(xì)胞有細(xì)胞毒性, 通過研究[46]推斷它的細(xì)胞毒性與側(cè)鏈α、β一不飽和乙醛基以及分子的長(zhǎng)度有關(guān)。Gylnnocin B是Masayuki Satake 在2005年第一次從米氏凱倫藻中提取出迄今分子質(zhì)量最大的多環(huán)醚化合物, 含有15個(gè)醚環(huán), 醚環(huán)之間是以反式并合, 分子式為C62H92O20, 和Gymnocin A在結(jié)構(gòu)上有很大差異, 但它們的細(xì)胞毒性非常相近[47]。

以上研究表明, 國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)米氏凱倫藻化學(xué)成分研究主要集中在脂溶性成分上, 對(duì)水溶性成分的研究較少。目前發(fā)現(xiàn)主要成分為脂肪酸類、聚醚類等。由于米氏凱倫藻生長(zhǎng)在海洋環(huán)境中, 與陸地環(huán)境差異很大, 可能會(huì)有獨(dú)特的代謝方式和生化過程,產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎奇特的化合物, 因此, 米氏凱倫藻的次級(jí)代謝產(chǎn)物有待于進(jìn)一步研究, 為藥物的開發(fā)研制提供重要的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。

4.2 生物活性研究

米氏凱倫藻是魚毒性有害赤潮的重要原因種,國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其毒性機(jī)理和生物活性進(jìn)行了大量的研究。孫科等[48]初步研究了一株米氏凱倫藻對(duì)褶皺臂尾輪蟲、鹵蟲幼體和黑褐新糠蝦的毒性效應(yīng)和機(jī)制, 發(fā)現(xiàn)米氏凱倫藻在較低密度下能明顯減少輪蟲的種群數(shù)量； 該藻的各組分毒性比較結(jié)果顯示, 只有藻液和細(xì)胞重懸液有這種毒害作用, 而去藻過濾液和藻細(xì)胞破碎液的影響不明顯, 表明這種毒害作用可能是由于活的藻細(xì)胞引起的； 在米氏凱倫藻中鹵蟲和黑褐新糠蝦的存活數(shù)量明顯下降。陳洋[49]等通過研究米氏凱倫藻的極性脂類組分對(duì)小鼠皮膚細(xì)胞、人肝細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞和小鼠神經(jīng)瘤細(xì)胞的影響, 表明極性脂類組分對(duì) 4株細(xì)胞的增殖均有顯著的抑制作用, 而非極性組分和水溶性組分對(duì) 4株細(xì)胞的增殖無明顯的不利影響, 而且, 米氏凱倫藻內(nèi)的未知毒性物質(zhì)能夠引發(fā)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化, 對(duì)細(xì)胞造成氧化損傷, 這與OA、利瑪原甲藻脂溶性組分和相關(guān)亞歷山大藻未知毒性物質(zhì)對(duì)哺乳類細(xì)胞的影響機(jī)制明顯不同。因此, 米氏凱倫藻的毒性物質(zhì)對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制活性, 潛在的藥用價(jià)值值得去探索。Larry[50]總結(jié)凱倫藻屬至少包含12種藻類, 其中包括米氏凱倫藻, 含有生物毒素, 易于引起魚類、貝類等的大量死亡, 能否通過食物鏈對(duì)人類健康產(chǎn)生影響需要進(jìn)一步研究。

陳洋[51]最近的研究發(fā)現(xiàn), 米氏凱倫藻極性脂溶性成分通過脂質(zhì)過氧化反應(yīng)影響哺乳動(dòng)物細(xì)胞, 對(duì)人類健康可能有潛在的威脅。劉婷婷等[52]研究發(fā)現(xiàn)米氏凱倫藻的甲醇氯仿提取物具有明顯的細(xì)胞毒性,而且在細(xì)胞膜的上的作用靶點(diǎn)也比較復(fù)雜。譚成玉等[53]發(fā)現(xiàn)米氏凱倫藻 70%乙醇提取物在一定程度上抑制腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液誘導(dǎo)的 ECV304細(xì)胞的增殖。米氏凱倫藻的水提取和 70%乙醇提取物能夠抑制腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)液對(duì) ECV304遷移的促進(jìn)左右。史戰(zhàn)鵬研究[54]發(fā)現(xiàn)米氏凱倫藻提取物對(duì) Hepg2、Hela和A549等 3種腫瘤細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制作用,這種作用于細(xì)胞膜上GM1的含量無明顯相關(guān), 表明米氏凱倫藻提取物的作用靶點(diǎn)比較復(fù)雜。

通過以上研究表明, 雖然米氏凱倫藻的代謝產(chǎn)物有毒, 但卻為開發(fā)成抗腫瘤藥物或?yàn)樾滤幵O(shè)計(jì)提供了思路。

5 展望

綜上所述, 國(guó)內(nèi)外對(duì)米氏凱倫藻的研究報(bào)道主要集中在分類鑒定、生物行為、赤潮監(jiān)測(cè)、形態(tài)特征、毒性機(jī)理等方面, 并取得了一定的進(jìn)展, 但對(duì)其產(chǎn)生的有毒物質(zhì)結(jié)構(gòu)成分、制毒機(jī)制還遠(yuǎn)未闡明, 研究表明米氏凱倫藻的脂溶性成分具有溶血毒性、細(xì)胞毒性和魚毒性, 對(duì)于水溶性成分的研究尚未有報(bào)道。如能從海洋天然化學(xué)的角度, 從米氏凱倫藻中發(fā)現(xiàn)、分離新型的活性天然產(chǎn)物, 不僅可以豐富海洋天然產(chǎn)物類型, 為開發(fā)新的有價(jià)值的海洋藥物提供基礎(chǔ), 也為變廢為寶、綜合治理米氏凱倫藻赤潮提供新的模式。本文建議米氏凱倫藻的研究?jī)?nèi)容應(yīng)主要集中在以下幾個(gè)方面： (1)首先實(shí)驗(yàn)室能夠規(guī)?；囵B(yǎng)米氏凱倫藻, 為后續(xù)研究提供豐富的生物資源。(2)對(duì)米氏凱倫藻次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行深入系統(tǒng)的研究, 以期獲得新型抗腫瘤的先導(dǎo)化合物, 為尋找新藥物提供新思路。(3)深入研究米氏凱倫藻中毒性物質(zhì)的構(gòu)效關(guān)系, 從根本上闡明米氏凱倫藻的產(chǎn)毒機(jī)理, 為解決米氏凱倫藻的危害性提供科學(xué)基礎(chǔ)。(4)米氏凱倫藻生物活性多樣性的研究, 高通量活性篩選技術(shù)的發(fā)展為快速、大量測(cè)定化合物的的生物活性提供了技術(shù)支持。

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