衷敬華，王祥財(cái)，許明君，施華球，王釔力，黃 莉，張積仁

(1.贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 腫瘤科，江西 贛州 341000；2.南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院 腫瘤中心，廣東 廣州 510282)

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百令膠囊對(duì)放射性肺損傷大鼠血漿IL-6、TNF-α、TGF-β1影響的實(shí)驗(yàn)研究

衷敬華1，王祥財(cái)1，許明君1，施華球1，王釔力1，黃 莉1，張積仁2*

(1.贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 腫瘤科，江西 贛州 341000；2.南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院 腫瘤中心，廣東 廣州 510282)

目的：分析百令膠囊對(duì)放射性肺損傷大鼠血漿IL-6、TNF-α、TGF-β1含量的影響，探討百令膠囊防治放射性肺損傷效果及可能作用機(jī)制。方法：將141只6周齡SD大鼠(清潔級(jí)，雄性)隨機(jī)分對(duì)照組(n=21)、模型組(n=30)、百令預(yù)防組(n=30)、百令治療組(n=30)、地塞米松治療組(n=30)，各組大鼠均給予X射線全胸單次照射(20Gy)，正常對(duì)照組除外。每組大鼠分別于第2、4、6周不同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)處死，心臟采血約5mL，置肝素抗凝管中，采用ELISA法檢測(cè)血漿中TNF-α、IL-6、TGF-β1含量。結(jié)果：相較于模型組，地塞米松組、百令預(yù)防組、治療組大鼠第2、4、6周血漿中IL-6、TNF-α、TGF-β1含量顯著下降(P<0.01或P<0.05)；百令預(yù)防組大鼠第2、4、6周血漿中IL-6、TNF-α、TGF-β1含量低于地塞米松組和百令治療組(P<0.01)，百令治療組大鼠第2、4、6周血漿中IL-6、TNF-α、TGF-β1含量低于地塞米松治療組(P<0.01)。結(jié)論：百令膠囊可抑制或減輕放射性肺泡炎性反應(yīng)、肺纖維化進(jìn)程，可能通過降低血漿中IL-6、TNF-α、TGF-β1等細(xì)胞因子的含量實(shí)現(xiàn)。

放射性肺損傷；百令膠囊；炎癥因子；IL-6；TNF-α；TGF-β1

放射性肺損傷為胸部腫瘤放射治療最為常見并發(fā)癥之一，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，尚無理想的治療方法。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于百令膠囊預(yù)防及治療放射性肺損傷的研究鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過觀察百令膠囊對(duì)放射性肺損傷大鼠血漿IL-6、TNF-α、TGF-β1含量的影響，探討百令膠囊防治放射性肺損傷的臨床效果，并對(duì)其可能作用機(jī)制進(jìn)行探究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 6周齡SD大鼠(清潔級(jí)，雄性)141只，體重(180±20)g。

1.1.2 藥物 百令膠囊,醋酸地塞米松片。

1.1.3 儀器 直線加速器,試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 將141只6周齡SD大鼠(清潔級(jí)，雄性)隨機(jī)分為對(duì)照組(n=21)、模型組(n=30)、百令預(yù)防組(n=30)、治療組(n=30)、地塞米松組(n=30)。

1.2.2 模型制作 采用直線加速器X線全胸單次照射建立放射性肺損傷大鼠模型，300cGy/min，總劑量為20Gy。

1.2.3 給藥方法 百令預(yù)防組大鼠于照射前14天開始灌服百令膠囊，其余各組均于造模后第2天灌胃，對(duì)照組、模型組灌胃等體積生理鹽水，治療組灌服百令膠囊混懸液，地塞米松組灌胃地塞米松混懸液灌胃，每天1次。

1.3 取材方法及指標(biāo)檢測(cè)

對(duì)照組分別于照射后第2、4、6周取7只大鼠，其余各組則隨機(jī)取10只，腹腔注射10%水合氯醛麻醉后，于大鼠心臟采血5mL，置肝素抗凝管中，置-20℃冰箱保存待查。采用ELISA(雙抗體夾心法)測(cè)定血漿中IL-6、TNF-α、TGF-β1含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血漿IL-6的含量變化比較

相較于模型組，百令預(yù)防組、治療組、地塞米松組大鼠血漿IL-6的含量明顯下降(P<0.05)；百令預(yù)防組大鼠血漿IL-6的含量低于地塞米松組和百令治療組(P<0.05)，百令治療組大鼠血漿IL-6的含量低于地塞米松組(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠血漿IL-6含量變化比較

組別時(shí)間給藥前2周4周6周正常對(duì)照組(n=21)35.±4.5550.02±6.0533.96±3.5931.23±2.88肺損傷模型組(n=30)32.45±5.32350.75±13.36257.92±12.04240.32±15.40地塞米松組(n=30)36.42±5.35314.09±14.30227.06±10.01206.37±13.76百令治療組(n=30)35.67±5.54248.47±11.74159.91±9.47159.63±10.76百令預(yù)防組(n=30)34.57±3.26182.54±14.79121.00±11.87105.38±8.29

2.2 各組大鼠血漿TNF-α的含量變化比較

相較于模型組，地塞米松組、百令預(yù)防組、治療組大鼠血漿TNF-α含量均顯著下降(P<0.01)；百令預(yù)防組大鼠血漿TNF-α的含量顯著低于地塞米松組和百令治療組(P<0.01)，百令治療組大鼠血漿TNF-α的含量顯著低于地塞米松治療組(P<0.01)。見表2。

表2 各組大鼠血漿TNF-α含量變化比較

組別時(shí)間給藥前2周4周6周正常對(duì)照組(n=21)31.53±1.2532.58±0.9835.02±2.3734.02±1.93肺損傷模型組(n=30)35.20±1.32233.40±5.64179.13±9.58155.69±8.03地塞米松組(n=30)36.32±2.46181.00±17.96146.50±7.10123.41±7.17百令治療組(n=30)35.14±2.35125.88±2.75111.24±9.3290.79±4.75百令預(yù)防組(n=30)34.22±2.4385.29±6.8355.05±5.6548.76±3.98

2.3 各組大鼠血漿TGF-β1的含量變化比較

相比于模型組，地塞米松組、百令預(yù)防組、治療組大鼠血漿TGF-β1含量明顯下降(P<0.01)。百令預(yù)防組低于地塞米松組和百令治療組(P<0.01)，百令治療組低于地塞米松組(P<0.01)。見表3。

表3 各組大鼠血漿TGF-β1含量變化比較

組別時(shí)間給藥前2周4周6周正常對(duì)照組(n=21)38.68±2.3433.66±1.7144.66±2.4245.71±2.82肺損傷模型組(n=30)36.31±5.32540.34±14.84644.07±6.63858.90±7.19地塞米松組(n=30)37.53±7.35363.71±10.82460.79±11.39635.03±13.48百令治療組(n=30)32.56±4.80256.28±8.19368.76±11.16465.34±8.64百令預(yù)防組(n=30)36.45±5.63153.05±14.92209.68±14.12272.58±9.95

3 討論

越來越多研究證據(jù)表明，放射性肺炎及繼而出現(xiàn)的肺纖維化可能由肺受照射后啟動(dòng)的細(xì)胞因子瀑布(cytokine cascade)所致[1]。該種細(xì)胞因子是較為復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，研究[2]表明，肺受照射后數(shù)小時(shí)，肺照射野局部組織內(nèi)合成、分泌大量細(xì)胞因子，進(jìn)而增加炎性細(xì)胞活性而造成急性放射性肺炎的發(fā)生及發(fā)展。上述細(xì)胞因子主要分為兩類：一類是以TGF-β為主參與組織修復(fù)和器官纖維化的因子；另一類是以IL-1和TNF-α為主參與局部損傷與炎癥反應(yīng)的因子。因此，放射性肺損傷的發(fā)生可能源于多種細(xì)胞因子的協(xié)同作用[3]。TNF-α因子被認(rèn)為是放射性肺炎發(fā)生的啟動(dòng)因子，為強(qiáng)有力的促炎癥反應(yīng)因子。IL-6是多功能細(xì)胞因子，其與放射性肺損傷的發(fā)生存在一定關(guān)系。TGF-β是強(qiáng)有力的促成纖維細(xì)胞分裂因子，在纖維化的形成過程中起著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，SD大鼠照射2h后，支氣管上皮細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞出現(xiàn)TNF-α強(qiáng)表達(dá)持續(xù)至第4周后呈降低趨勢(shì)并維持較低水平。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，第2、4、6周模型組大鼠血漿中TNF-α、IL-6、TGF-β1含量均呈明顯升高的趨勢(shì)(P<0.01)。與模型組比較，第2、4、6周百令預(yù)防組、治療組大鼠血漿中IL-6含量均明顯降低(P<0.01)，地塞米松組大鼠血漿中IL-6含量亦降低(第2、4周，P<0.01；第6周，P<0.05)。與模型組比較，各治療組大鼠血漿TNF-α、TGF-β1含量均明顯降低(P<0.01)，地塞米松治療組、百令治療組、預(yù)防組大鼠血漿TNF-α、TGF-β1含量呈由高到低的順序。表明百令膠囊對(duì)促炎癥因子和促纖維化細(xì)胞因子具有抑制作用，相較于西藥地塞米松療效穩(wěn)定。因此，百令膠囊可在抑制或減輕放射性肺泡炎性反應(yīng)的同時(shí)抑制肺纖維化進(jìn)程。

[1] 山廣志.百令膠囊加味治療放射性肺炎的臨床觀察[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,1996,10(4):37.

[2] 馮勤付,VUJASKOVIC Z,BRIZEL DM,等.阿米福汀對(duì)單次肺照射的保護(hù)作用及TGF-β1活性的影響[J].中華放射腫瘤學(xué)雜志,2004,13(3):222-225.

[3] 趙艷海,李志平,陳曉梅,等.人NSCLC細(xì)胞系X-線照射后TNF-α水平變化[J].中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志,2009,24(4):313-316.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2015-10-12

江西省衛(wèi)計(jì)委中藥局基金項(xiàng)目(2014A143)

衷敬華(1981-)，男，博士，江西省贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院主治醫(yī)師，研究方向?yàn)槟[瘤靶向治療基礎(chǔ)與臨床。

張積仁(1955-)，男，南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院腫瘤中心主任醫(yī)師，研究方向?yàn)槟[瘤靶向治療基礎(chǔ)與臨床。E-mail:zhangjiren@126.com

R285

A

1673-2197(2015)24-0017-02

10.11954/ytctyy.201524007