劉榮森，張長水

（1.河南林業(yè)職業(yè)學院，河南洛陽471002；2.河南科技大學化工與制藥學院，河南洛陽471003）

頭孢曲松鈉（Ceftriaxone Sodium）是第三代頭孢菌素類抗生素，用于敏感致病菌所致的下呼吸道感染、尿路、膽道感染，以及腹腔感染、盆腔感染、皮膚軟組織感染、骨和關節(jié)感染、敗血癥、腦膜炎等及手術期感染預防。測定頭孢曲松鈉的含量對藥品質量的控制及指導臨床用藥都具有極其重要的意義。

目前，已報道的測定頭孢曲松鈉的方法有：可見光分光光度法[1-3]、紫外分光光度法[4]、流動注射化學發(fā)光分析法[5，6]、毛細管區(qū)帶電泳法[7]、共振銳利散射光譜法[8]、高效液相色譜法[9]等。但基于生成普魯士藍來測定頭孢曲松鈉的方法還未見報道。

研究表明：在一定溫度下，Fe3+能被頭孢曲松鈉還原為Fe2+，Fe2+與鐵氰化鉀生成可溶性普魯士藍，通過測定普魯士藍的吸光度間接測定頭孢曲松鈉的含量。本法和其他分光光度法相比，由于使用無毒、價格便宜的鐵氰化鉀進行顯色，使測試成本低廉；采用FeCl3在一定條件下直接氧化頭孢曲松鈉，由于分析步驟少，使分析誤差較低；使用可見光分光光度法進行分析，具有測試儀器簡單、操作容易等優(yōu)點；本法還具有靈敏度高，線性范圍較寬等特點。用于市售頭孢曲松鈉針劑中頭孢曲松鈉含量的測定，結果令人滿意。可用于基層醫(yī)藥檢驗部門對頭孢曲松鈉的檢測。

1 實驗部分

1.1 材料、儀器與試劑

注射用頭孢曲松鈉粉針劑（市售）。

TU-1900 雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；電熱水浴鍋（鄭州科工貿公司）；電子天平（上海奧豪斯儀器有限公司）；pH-3C 型精密酸度計（上海大普儀器有限公司）。

頭孢曲松鈉對照品（大連美侖生物技術有限公司），用二次水配成100μg·mL-1的標準溶液，4℃冷藏避光保存；FeCl3（A.R.）:加入適量HCl，用二次水配制成1.500×10-2mol·L-1的溶液；鐵氰化鉀（AR）:用二次水配置成1.500×10-2mol·L-1的溶液。

1.2 實驗方法

在12.50mL 比色管中，加入2.00mL 1.500×10-2mol·L-1FeCl3溶液，一定量的頭孢曲松鈉標準溶液或待測溶液，在100℃水浴中加熱30min。冷卻至室溫，加入0.80mL 1.500×10-2mol·L-1鐵氰化鉀，加水至刻度，室溫放置20min。以試劑空白為參比，在733nm 處測定溶液的吸光度。

2 結果和討論

2.1 最大吸收波長

按照1.2 實驗方法配制試劑空白溶液（不加入頭孢曲松鈉）。以蒸餾水為參比溶液，掃描了試劑空白在500～900nm 范圍內的吸收光譜（圖1 曲線b）；以試劑空白為參比，掃描了頭孢曲松鈉與FeCl3在100℃水浴中加熱30min 后與鐵氰化鉀反應生成普魯士藍的吸收光譜（圖1 曲線a），最大吸收波長為733nm，而試劑空白在733nm 處吸收很小。故本試驗以試劑空白為參比，在733nm 處測定生成的普魯士藍的吸光度。

圖1 吸收光譜Fig.1 Absorption spectrum

2.2 FeCl3 氧化頭孢曲松鈉反應的溫度和時間對吸光度的影響

考察了反應溫度和反應時間對FeCl3氧化頭孢曲松鈉的影響。固定反應時間為30min，測定了FeCl3氧化頭孢曲松鈉反應溫度分別為為25、30、50、70、90、100℃的吸光度。隨著反應溫度逐漸升高，溶液吸光度隨著增大，溫度達到100℃時，溶液的吸光度達到最大。故選擇頭孢曲松鈉與FeCl3反應溫度為100℃。

固定反應溫度為100℃，考察了FeCl3氧化頭孢曲松鈉的反應時間對吸光度的影響，在5～80min 時間范圍內，每隔5min 測定一次吸光度。當反應時間到30min 時，溶液的吸光度最大。故選擇頭孢曲松鈉與FeCl3反應時間為30min。

2.3 FeCl3 用量對吸光度的影響

FeCl3作為氧化劑，需把頭孢曲松鈉氧化完全，實驗表明，當FeCl3用量達到1.80mL 時，溶液吸光度最大，若FeCl3的用量繼續(xù)增大，溶液的吸光度幾乎保持不變。為保證頭孢曲松鈉完全被氧化，FeCl3需稍過量，使故本實驗選擇加入2.00mLFeCl3（1.500×10-2mol·L-1）。

2.4 鐵氰化鉀用量的選擇

固定FeCl3用量為2.00mL，考察了鐵氰化鉀用量對吸光度的影響，隨著鐵氰化鉀用量的增大，吸光度也增大，當鐵氰化鉀用量達到0.80mL 時達到最大，再增加鐵氰化鉀用量，溶液吸光度幾乎不變，說明當鐵氰化鉀用量為0.80mL 時已與還原生成的Fe2+反應完全。本實驗選擇加入0.80mL 鐵氰化鉀（1.500×10-2mol·L-1）。

2.5 顯色時間的影響

FeCl3與頭孢曲松鈉反應后，冷卻至室溫，加入0.80mL 的鐵氰化鉀溶液，在室溫下放置顯色，隨著放置時間的延長，溶液的吸光度增大，當顯色時間到20min 時，吸光度達到最大。20min 到60min，溶液的吸光度基本不變，說明顯色反應已完成。故顯色時間選擇室溫下放置20min。

2.6 溶液中過量的Fe3+對吸光度的影響

考察了過量的Fe3+對吸光度的影響。按照試驗方法，分別加入2.00mL 1.500×10-2mol·L-1FeCl3溶液，但不加入頭孢曲松鈉，在100℃水浴中加熱30min。冷卻至室溫，加入0.80mL 1.500×10-2mol·L-1鐵氰化鉀，加水至刻度，以蒸餾水為參比，每隔5min 測定其在733nm 處的吸光度，從5 到60min 吸光度都很小且基本不變。故選擇試劑空白為參比，過量的Fe3+不影響本試驗的測定結果。

2.7 工作曲線

配制頭孢曲松鈉含量分別0.1、0.3、0.6、1.0、1.5、2.0、2.6、3.2、4.0、4.8、5.6、6.4、7.2μg·mL-1的標準溶液，按照1.2 的實驗方法測定吸光度，并繪制標準曲線。頭孢曲松鈉含量在0.11～7.20 μg·mL-1范圍內與吸光度呈良好線性關系，線性回歸方程A=0.2717ρ（μg·mL-1）+0.0325，相關系數R=0.9992，表觀摩爾系數ε=1.8×105L·（mol·cm）-1。選擇頭孢曲松鈉含量為1.00μg·mL-1的標準溶液，進行11 次重復測定，相對標準偏差為1.32 %。檢測限（3σ/k）為0.014μg·mL-1。

2.8 樣品測定

用市售頭孢曲松鈉粉針劑進行含量的測定。準確稱取適量的頭孢曲松鈉針劑（相當于頭孢曲松鈉0.1000g），加水溶解，轉移至100mL 容量瓶中，稀釋至刻度。按照最優(yōu)實驗條件進行測定，結果見表1。產品平均加標回收率為100.5%，結果令人滿意。

表1 樣品的測定及回收率的試驗（n=6）Tab.1 Determination results of samples and recovery（n=6）

3 結論

本研究利用生成普魯士藍的反應間接測定頭孢曲松鈉的含量，選擇了最佳實驗條件。結果表明：頭孢曲松鈉含量在0.11～7.20μg·mL-1范圍內與吸光度呈良好線性關系,平均回收率達到100.5%。能用于市售頭孢曲松鈉粉針劑含量的測定。

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