洪 濤杜航空歐陽五慶

（1.陜西冠嘉高科生物技術有限公司,陜西西安 710061；2.西北農林科技大學,陜西楊凌 712100）

復方替米考星口服液有效成分含量的測定方法研究

洪 濤1杜航空1歐陽五慶2*

（1.陜西冠嘉高科生物技術有限公司,陜西西安 710061；2.西北農林科技大學,陜西楊凌 712100）

復方替米考星口服液是由替米考星、黃芪多糖、綠原酸及板藍根多糖精制而成的中西藥復方制劑，具有清熱解毒、抗菌消炎、增強機體免疫力等多重功效。臨床用于畜禽呼吸道疾病的治療，效果較好。為控制產品質量，筆者參照有關文獻，制定了復方替米考星口服液中各主要成分的含量測定方法。試驗利用紫外-可見分光光度計，分別建立了獸用高效復方替米考星口服液（TMS）中替米考星、黃芪多糖和綠原酸含量檢測的分析方法。結果顯示：不同批次間獸用高效復方替米考星口服液（TMS）中替米考星、黃芪多糖和綠原酸的標準曲線均分別在 5～50 μg·ml-1、5～30 μg·ml-1和5～50 μg·ml-1濃度范圍內線性關系良好；平均回收率為（99.18±1.89）%、（99.68±2.23）%和（99.23±1.17）%，相對標準偏差（RSD）為1.91%、2.24%和2.19%；日內精密度（RSD）為0.62%、0.65%和0.59%，日間精密度（RSD）為1.32%、1.42%和1.27%，建立的TMS分析方法回收率、重復性和精密度均滿足要求。本方法簡便、準確、專屬性強，所建質量標準可用于該制劑的質量控制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑與藥品

替米考星標準品，批號為K0311109，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供；替米考星原粉，批號為1404001，寧夏泰瑞制藥股份有限公司提供；獸用高效復方替米考星口服液（TMS）（主要成分為：替米考星、黃芪多糖、綠原酸、板藍根多糖和螯合劑等），由陜西冠嘉高科生物技術有限公司中試生產提供，產品批號為20140508；綠原酸標準品，批號為Z0260611，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。其他試劑均為分析純。

1.1.2 主要儀器

BT125D型電子天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；HH-6型數顯恒溫水浴鍋 國華電器有限公司；紫外可見分光光度計，上海精密科學儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 TMS中替米考星含量測定分析方法的建立

1.2.1.1 檢測波長的選擇

精密稱取經105℃干燥至恒重的替米考星對照品適量，加磷酸溶液溶解后，制成50 μg·ml-1的溶液，備用；精密稱取綠原酸對照品適量，加50%甲醇制成每1ml約含40μg的溶液，備用；精密稱取無水葡萄糖（黃芪多糖對照品）適量，加蒸餾水適當稀釋后備用；另量取適量空白口服液（不含藥物的TMS）加適量蒸餾水稀釋后備用；取上述四種對照品溶液及空白口服液，用紫外－可見分光光度計在200～500 nm范圍內進行掃描得知，替米考星的最大吸收波長為292 nm，黃芪多糖的最大吸收波長為490nm，綠原酸的最大吸收波長為324nm，且TMS的所用輔料在該波長處的紫外吸收對測定結果無干擾，因此確定292 nm為測定替米考星含量的檢測波長，490 nm為測定黃芪多糖含量的檢測波長，324 nm為測定綠原酸含量的檢測波長。

1.2.1.2 對照品和供試品溶液的配制

精密稱取替米考星對照品10.45 mg，用磷酸溶液溶解后定容至100 ml，得質量濃度為100μg·ml-1的替米考星對照品溶液，作為替米考星對照品供試液備用。

精密稱取替米考星原料藥10.76 mg，用磷酸溶液溶解后定容至100ml，得質量濃度為100μg·ml-1的替米考星原料供試液。

稱取黃芪多糖原料藥11.11 mg，用蒸餾水定容至100 ml，搖勻，得濃度為100μg·ml-1的黃芪多糖原料藥供試液。

稱取綠原酸原料藥11.23 mg，蒸餾水定容至100 ml，搖勻，得濃度為100μg·ml-1的綠原酸原料藥供試液。

精密量取TMS 1mL置于100 ml容量瓶中用蒸餾水定容，作為TMS供試液。同法制備空白口服液（不含替米考星的TMS）供試液。

1.2.1.3 方法專屬性試驗

分別取替米考星對照品溶液、替米考星原料藥供試液、黃芪多糖原料藥供試液、綠原酸原料藥供試液、TMS供試液和空白口服液供試液，用紫外－可見分光光度計在200～500 nm范圍內對此6種溶液進行掃描。

1.2.1.4 標準曲線建立

稱取對照品儲備液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5 ml，分別加蒸餾水定容到50ml，搖勻。在292nm波長處測定上述對照品溶液的吸收度，以對照品溶液的質量濃度（μg·ml-1）為橫坐標，紫外光吸收度為縱坐標，繪制標準曲線，求得到標準曲線回歸方程。

1.2.1.5 回收率試驗

量取替米考星對照品貯備液，置10mL容量瓶中，加入適量空白口服液，然后加入蒸餾水定容至刻度，得到濃度分別為15、20、25μg·ml-1的待測溶液，每個濃度重復3次，將測定的紫外光吸收度值代入標準曲線方程，計算出實測濃度，然后計算其回收率、平均回收率和相對標準偏差（RSD）。

1.2.1.6 進樣重復性和精密度試驗

回收率試驗其中一待檢測樣品，進行重復性試驗。分別配制低、中、高濃度為5、20、35 μg·ml-1的TMS 對照品待測液，進行日內和日間精密度測定。日內精密度試驗于1 d內不同時間點測定5次，日間精密度試驗1 次/d，連續(xù)5 d。

1.2.2 TMS中黃芪多糖含量測定的方法建立

稱取黃芪多糖對照品適量，蒸餾水溶解并制成5μg·ml-1的溶液，另分別量取適量空白口服液和TMS，蒸餾水適當稀釋后，用紫外－可見分光光度計在200～500 nm范圍內對此3種溶液進行掃描得知，黃芪多糖的最大吸收波長為490 nm，且制備口服液的輔料在該波長處的紫外吸收對測定結果無干擾，因此確定490 nm為測定黃芪多糖含量的檢測波長。

對照品和供試品溶液的配制、方法專屬性試驗、標準曲線建立、回收率試驗、進樣重復性和精密度試驗同上述“1.2.1”中的（2）、（3）、（4）、（5）和（6）。

1.2.3 TMS中綠原酸含量測定的方法建立

稱取綠原酸對照品適量，加50%色譜甲醇溶液10ml溶解，加蒸餾水制成5 μg·mL-1的溶液，另分別量取適量空白口服液和TMS，加50%色譜甲醇溶液10ml，蒸餾水適當稀釋后，用紫外－可見分光光度計在200～500 nm范圍內對此3種溶液進行掃描得知，綠原酸的最大吸收波長為324nm，且制備口服液的輔料在該波長處的紫外吸收對測定結果無干擾，因此確定324nm為測定綠原酸含量的檢測波長。

對照品和供試品溶液的配制、方法專屬性試驗、標準曲線建立、回收率試驗、進樣重復性和精密度試驗同上述“1.2.1”中的（2）、（3）、（4）、（5）和（6）。

2 結果與分析

2.1 TMS中藥物含量測定方法

2.1.1 TMS中藥物含量測定藥物專屬性考察

根據替米考星標準溶液、替米考星原料藥、黃芪多糖原料藥和綠原酸原料藥和TMS紫外吸收光譜圖結果可知，替米考星標準溶液、替米考星原料藥、黃芪多糖原料藥、綠原酸原料藥和TMS分別在292nm、490nm和324nm有最大吸收；且替米考星原料藥的最大吸收波長基本與標準品溶液一致，說明原料藥符合要求；復方內藥物間測定無相互干擾。結果表明，黃芪多糖原料藥和綠原酸原料藥對替米考星的樣品測定無干擾，顯示該方法專屬性好。

對照品濃度和吸收度值結果見表5和圖12。通過線性回歸求得測定TMPL的標準曲線方程為：A＝0.0232C+0.1751（r＝0.9994），TMPL在1～30μg·ml-1濃度范圍內線性關系良好。

2.1.2 標準曲線方程的建立

TMS中各藥物標準曲線方程見表1、表2、表3和表4。

2.1.3 回收率及精密度測定試驗

試驗中，測TMS中藥物含量方法中，替米考星、黃芪多糖和綠原酸平均回收率為：（99.18±1.89）%、（99.68±2.23）%和（99.23±1.17）%；相對標準偏差（RSD）為1.91%、2.24%和2.19%；日內精密度（RSD）為0.62%、0.65%和0.61%，日間精密度（RSD）為1.32%、1.42%和1.27%。

3 討論

3.1 替米考星、黃芪多糖、綠原酸和板藍根多糖的聯合用藥

替米考星為動物專用抗生素，具有良好的抗菌活性和藥動學特征，主要用于動物肺炎、雞慢性呼吸道病和泌乳動物的乳腺炎（郭騰等 2002）。本試驗中TMS將替米考星、黃芪多糖、綠原酸和板藍根多糖進行了配伍，發(fā)揮不同作用機制的互補作用，從而起到更強的抗菌、抗病毒、提高免疫力的效果。為克服替米考星水溶性差、生物利用度低等缺點，分別選用1，2-丙二醇和乙醇為助溶劑，提高了替米考星和綠原酸在水中的溶解度，另一方面螯合劑的使用，增加了藥物溶解穩(wěn)定性，減少了藥物與外相接觸的機會，提高制劑的治療效果，依據聯合用藥理論，將替米考星、黃芪多糖、綠原酸和板藍根多糖配伍并制備成獸用高效復方替米考星口服液制劑。

3.2 獸用高效復方替米考星口服液含量測定波長的確定

本試驗利用紫外-可見分光光度計，在200～500 nm范圍內進行波長掃描得知，替米考星的最大吸收波長為292 nm，黃芪多糖的最大吸收波長為490nm，綠原酸的最大吸收波長為324nm，且TMS的所用輔料在該波長處的紫外吸收對測定結果無干擾，因此確定292 nm為測定替米考星含量的檢測波長，490nm為測定黃芪多糖含量的檢測波長，324nm為測定綠原酸含量的檢測波長。

4 結論

獸用高效復方替米考星口服液為棕黃色澄明、均一溶液，流動性良好。結果顯示，復方替米考星口服液含量測定方法重現性和專屬性強，為控制該制劑藥品質量提供了試驗依據。

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表1 不同濃度替米考星溶液的紫外吸收度

表2 不同濃度黃芪多糖溶液的紫外吸收度

表3 不同濃度綠原酸溶液的紫外吸收度

農業(yè)科技成果轉化資金項目（2013GB2G000475）

洪濤（1982-），女陜西商南人，碩士研究生，從事新獸藥研究。

歐陽五慶（1960-），男，陜西鳳翔人，教授，博導。