李 莉（邯鄲市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北邯鄲 056004）

溴甲東莨菪堿片在臨床常用于治療胃及十二指腸潰瘍、胃炎、潰瘍性結(jié)腸炎、腸蠕動(dòng)亢進(jìn)等疾病。其檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)收載于《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第15冊(cè)[1]。該標(biāo)準(zhǔn)采用容量法測(cè)定其含量。此方法操作煩瑣，終點(diǎn)不易判定，且操作過(guò)程中使用了有劇毒的有機(jī)物硝基苯。為此，筆者建立了采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定溴甲東莨菪堿片含量的方法，以為其質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010型HPLC儀，包括紫外（UV）檢測(cè)器、LC-solution色譜工作站（日本島津公司）；AE240型電子天平（瑞士梅特勒-托利多有限公司）。

1.2 藥品與試劑

溴甲東莨菪堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100476-200301，純度：99.4%）；溴甲東莨菪堿片（廣州白云山光華制藥股份有限公司，批號(hào)：130701、130902、130303，規(guī)格：1 mg/片）；甲醇為色譜純，庚烷磺酸鈉、冰醋酸為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果[2]

2.1 色譜條件

色譜柱：Shim-pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.5%庚烷磺酸鈉溶液（含0.5%冰醋酸）（35∶75，V/V）[3]；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 取本品100片（約10.673 g），研細(xì)，精密量取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于溴甲東莨菪堿0.025 g），置于50 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液。

2.2.2 對(duì)照品溶液 取溴甲東莨菪堿對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加水溶解并定量稀釋制成1 ml中約含0.5 mg的溶液。

2.2.3 空白樣品溶液 取不含溴甲東莨菪堿的空白樣品，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備，即得空白樣品溶液。

2.3 空白干擾試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下供試品溶液、對(duì)照品溶液、空白樣品溶液各20 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，詳見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，供試品溶液與對(duì)照品溶液色譜在相應(yīng)位置處有相同的色譜峰，而空白樣品溶液色譜中無(wú)此峰，表明空白樣品溶液對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱(chēng)取溴甲東莨菪堿對(duì)照品0.500 9 g，置于50 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取上述對(duì)照品貯備液各1.0、2.0、5.0、10.0、15.0 ml，置于100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度（x，mg/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得溴甲東莨菪堿的回歸方程為y＝2.136×103+3.478×105x（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，溴甲東莨菪堿質(zhì)量濃度在0.100 2～1.502 7 mg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

圖1 高效液相色譜圖A.對(duì)照品溶液；B.供試品溶液；C.空白樣品溶液；1.溴甲東莨菪堿Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference solution；B.test solution；C.blank sample solution；1.methscopolamine bromide

取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果，溴甲東莨菪堿峰面積的RSD為0.6%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液適量，分別于室溫下放置1、2、6、10、12 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果，溴甲東莨菪堿峰面積的RSD為0.9%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：130701）適量，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果，溴甲東莨菪堿含量的RSD為0.7%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品（批號(hào)：130701）適量，共9份，精密加入一定量的溴甲東莨菪堿對(duì)照品，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.9 樣品含量測(cè)定

精密吸取“2.2”項(xiàng)下供試品溶液、對(duì)照品溶液各20μl，注入色譜儀，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中溴甲東莨菪堿的占標(biāo)示量百分含量，并與筆者前期采用容量法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果，HPLC法測(cè)得的結(jié)果與容量法基本相同，詳見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

根據(jù)溴甲東莨菪堿在水中易溶解、在甲醇中微溶的性質(zhì)[2]，筆者分別采用流動(dòng)相及水作為溶劑進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，溴甲東莨菪堿均可溶解，但用水作為溶劑時(shí)，溶解時(shí)間少、回收率高、成本低，故采用水作為本研究的溶劑。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

本研究發(fā)現(xiàn)，溴甲東莨菪堿對(duì)照品溶液在230 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，空白樣品溶液在230 nm波長(zhǎng)處幾乎沒(méi)有吸收，故選230 nm為本研究的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 流動(dòng)相的選擇[4-5]

筆者分別比較了以甲醇-水（40∶60，V/V）、0.04%戊烷磺酸鈉溶液-甲醇（60∶40，V/V）、甲醇-0.5%庚烷磺酸鈉溶液（含0.5%冰醋酸）（35∶75，V/V）等為流動(dòng)相時(shí)的分離度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以甲醇-0.5%庚烷磺酸鈉溶液（含0.5%冰醋酸）（35∶75，V/V）為流動(dòng)相時(shí)的分離效果較好，故選擇其作為本研究的流動(dòng)相。

3.4 溴甲東莨菪堿與東莨菪堿相比

東莨菪堿在臨床上以氫溴酸東莨菪堿常見(jiàn)。氫溴酸東莨菪堿含量測(cè)定收載于2010年版《中國(guó)藥典》[6]，以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.25%十二烷基硫酸鈉溶液（磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5）-乙腈為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。但實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，辛烷基硅烷鍵合硅膠應(yīng)用較少，乙腈毒性較大，且210 nm波長(zhǎng)處易出現(xiàn)（甲醇）末端吸收。故本研究采用較為常見(jiàn)的C18柱；采用以甲醇-0.5%庚烷磺酸鈉溶液（含0.5%冰醋酸）（35∶75，V/V）為流動(dòng)相，配制簡(jiǎn)單，不需調(diào)節(jié)pH；采用230 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，避免了（甲醇）末端吸收。筆者采用本研究的色譜條件對(duì)氫溴酸東莨菪堿的含量進(jìn)行測(cè)定，又采用氫溴酸東莨菪堿的色譜條件對(duì)溴甲東莨菪堿的含量進(jìn)行測(cè)定，因二者所采用的色譜柱、檢測(cè)波長(zhǎng)、流動(dòng)相均不相同，測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者分離度及柱效均較低、峰形較差，故建議二者色譜條件不互換。

綜上所述，本方法準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)便，可用于溴甲東莨菪堿片的含量測(cè)定。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)編.WS-10001-（HD-1447）國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)：化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：第15冊(cè)[S].2003：152.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)編.WS-10001-（HD-0579）國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)：化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：第6冊(cè)[S].2002：245.

[3]劉文英.藥物分析[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：80-83.

[4]李莉，張鋼平，李曉敏，等.平喘鎮(zhèn)咳類(lèi)中成藥中非法添加4種化學(xué)藥品的檢驗(yàn)方法[J].中國(guó)藥房，2008，9（19）：676.

[5]李發(fā)美.分析化學(xué)[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：417-440.

[6]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：二部[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：560.