王小艷，陳星宇，朱玲玲，逄明杰，張洪英

（山東省青島市市立醫(yī)院，青島 266011）

在臨床中，我們應(yīng)用白芍總苷膠囊（TGP，商品名帕夫林，寧波立華制藥有限公司生產(chǎn)）治療銀屑病取得了較好的療效，但其作用機(jī)制尚未明確。通過(guò)既往研究可以知道，TGP 可通過(guò)p38-MAPK 途徑抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、IL-23，從而參與抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖[1]?？梢种瓢准?xì)胞介素（IL）-18 mRNA和蛋白的表達(dá)，ERK1/2 信號(hào)途徑可能介導(dǎo)這一抑制作用[2]。尋常型銀屑病的發(fā)病與異常免疫反應(yīng)相關(guān)，特別是IL-12 參與Th1 細(xì)胞在銀屑病發(fā)生中的免疫反應(yīng)[3]。IL-12 可誘導(dǎo)Th1 細(xì)胞分泌干攏素（IFN）-γ，促使Th0 細(xì)胞向Th1 細(xì)胞分化，加劇Th1/Th2失衡，還可以增加T 細(xì)胞表面皮膚淋巴細(xì)胞抗原的表達(dá)，促進(jìn)其向皮膚炎癥部位的定向歸巢[4]。IL-35 是IL-12 家族新成員，是由EB13 和IL-12 p35 亞基組成的異源二聚體[5]。在炎癥后期迅速高表達(dá)IL-35[6]。在本研究中，主要觀察急性期尋常型銀屑病患者服用TGP 后外周血IL-12、IL-35 的變化，并設(shè)置健康對(duì)照組，進(jìn)一步探討TGP 治療尋常型銀屑病的作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 臨床資料 急性期尋常型銀屑病患者26例，男12 例，女14 例，年齡22~56 歲，平均39.5 歲；病程2 周~16 年，平均8 年；所選病例按照《皮膚性病學(xué)》進(jìn)行分期[7]。所有受檢患者近2 個(gè)月均未接受系統(tǒng)治療，未使用生物制劑、免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素、維A 酸類制劑，均無(wú)肝、腎等其他系統(tǒng)性疾病，未合并其他自身免疫性疾病，非懷孕及哺乳期婦女，無(wú)非婚性接觸史。給予口服白芍總苷（3 次/d，2粒/次），連服2 個(gè)月后評(píng)估效果。根據(jù)銀屑病皮損面積嚴(yán)重程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)PASI 進(jìn)行皮損面積（%）和嚴(yán)重程度評(píng)分，結(jié)果26 例患者，PASI 積分均下降60%~90%。健康對(duì)照組25 例，均來(lái)自我院健康體檢者，其性別及年齡與病例組相匹配。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受檢者簽署知情同意書(shū)。

1.1.2 主要試劑與儀器 人IL-12、IL-35 ELISA 試劑盒購(gòu)自美國(guó)Stancruz 公司。酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)BioTek 公司。

1.2 方法

1.2.1 制備血清 無(wú)菌條件下抽取銀屑病患者服藥前后及健康對(duì)照者外周靜脈血2 mL，室溫下充分凝血，室溫1 500 轉(zhuǎn)/min（離心半徑15 cm）10 min，分離血清，標(biāo)記姓名和編號(hào)，-80 ℃冰凍保存待測(cè)。

1.2.2 IL-12、IL-35 檢測(cè) 用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清中IL-12、IL-35 水平，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。將加樣板置于波長(zhǎng)450 nm 的酶標(biāo)儀讀取各孔吸光度，并根據(jù)標(biāo)本的吸光度所對(duì)應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17．0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，2 組間比較采用兩獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清IL-12 表達(dá)量 急性期尋常型銀屑病患者外周血IL-12 表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-5.60，P=0.00），服用TGP后，表達(dá)水平下降至（130.79±10.23）pg/mL，與服藥前比較，t 值=43.48，P=0.00，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01），與健康對(duì)照組相比，t 值=-0.12，P=0.91，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。見(jiàn)表1。

2.2 各組血清IL-35 表達(dá)量 急性期尋常型銀屑病患者血清IL-35 表達(dá)與健康對(duì)照組相比，t 值=-3.155，P=0.3，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），分別為（24．40±3．81）pg/mL，（28．20±4．04）pg/mL。銀屑病組服TGP 后，IL-35 表達(dá)水平上升至（55.76±11.62）pg/mL，與健康對(duì)照組相比，t 值=-5.21，P=0.00，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01）。見(jiàn)表1。

表1 TGP 治療急性期尋常型銀屑病患者前后血清IL-12、IL-35 的表達(dá)（±s）

表1 TGP 治療急性期尋常型銀屑病患者前后血清IL-12、IL-35 的表達(dá)（±s）

注：t1（P1）為與健康對(duì)照組比較；t2（P2）為與治療前比較。

組別 n IL-12（pg/mL） IL-35（pg/mL）健康對(duì)照組 25 131.14±9.83 28.20±4.04 TGP 治療前 26 288.69±12.92a 24.40±3.81 t1（P1） 5.60（0.00） 3.16（0.3）TGP 治療后 26 130.79±10.23b 55.76±11.62c t1（P1） 0.12（0.91） 5.21（0.00）t2（P2） 48.34（0.00） 10.39（0.00）

3 討論

銀屑病是一種臨床常見(jiàn)的以紅斑鱗屑為基本表現(xiàn)的慢性炎癥性皮膚疾病，發(fā)病機(jī)制尚未闡明，但多數(shù)研究認(rèn)為其可能是一種由多基因遺傳背景下的T 細(xì)胞異常的免疫性疾病，異常的T 細(xì)胞功能導(dǎo)致繼發(fā)性表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的過(guò)度增殖，Th 細(xì)胞亞群分化失衡，活化T 細(xì)胞的Th1 型細(xì)胞因子表達(dá)增強(qiáng)[8]。IL-12 是一種由p35 和p40 組成的異二聚體結(jié)構(gòu)的細(xì)胞因子，主要由抗原遞呈細(xì)胞產(chǎn)生，其中單核/ 巨噬細(xì)胞和B 細(xì)胞是產(chǎn)生IL-12 的主要細(xì)胞，有很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用，能誘導(dǎo)NK 和T 細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ、IL-2 等細(xì)胞因子,促進(jìn)初始Th0 細(xì)胞向Thl 細(xì)胞分化、增殖和成熟，抑制Th2 細(xì)胞活性，從而使炎性細(xì)胞活化，引發(fā)炎癥。作為重要的免疫調(diào)節(jié)分子，IL-12 是誘導(dǎo)Th1 型免疫應(yīng)答最主要的細(xì)胞因子之一，其最具特色的功能是調(diào)節(jié)Th1/Th 2 平衡[9]。IL-12 具有刺激或抑制免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)Th0 向Th1 分化的作用，甚至可將部分分化完成的Th2 轉(zhuǎn)化為T(mén)h1[10]。Torti 等[11]研究顯示銀屑病病變處表達(dá)高水平的IL-12，并發(fā)現(xiàn)IL-12 在小鼠銀屑病樣皮損發(fā)病機(jī)制中具有重要作用，這些均提示IL-12 在銀屑病中的作用。IL-35 屬于Ⅰ型細(xì)胞因子超家族成員，IL-12 家族的新成員，由p35 和EBI3 2 個(gè)亞基所組成[12]。Collison 等[13]初步證實(shí)IL-35 主要由Treg 細(xì)胞分泌，對(duì)免疫反應(yīng)具有負(fù)向抑制作用，可抑制炎癥反應(yīng)、防止過(guò)度的自身免疫反應(yīng)的發(fā)生。目前已有的研究顯示，IL-35 能有效增強(qiáng)Treg 細(xì)胞亞群的功能，并且有效抑制Th17 細(xì)胞的增殖分化，抑制機(jī)體過(guò)度的免疫反應(yīng)，阻止炎癥對(duì)機(jī)體的免疫損傷的作用。

本研究結(jié)果顯示，尋常型銀屑病進(jìn)展期患者血清中IL-12 表達(dá)水平均顯著高于健康對(duì)照組，提示IL-12 與銀屑病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，這與Arican、郭志麗等[14-15]的研究相符合，銀屑病患者IL-12 分泌表達(dá)量顯著高于正常健康人，表達(dá)量的異常增高，引起Th1/Th2 平衡紊亂，使Th1 占優(yōu)勢(shì)，從而引起銀屑病的發(fā)生。經(jīng)過(guò)TGP 治療后，患者血清中的IL-12 表達(dá)水平下降，與治療前差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明TGP 能很好地控制尋常型銀屑病的發(fā)展。本研究結(jié)果還顯示，尋常型銀屑病急性期患者血清IL-35表達(dá)與健康對(duì)照組相比較，經(jīng)TGP 治療后，IL-35上升，與治療前及健康對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-35 在炎癥后期迅速高表達(dá)，與Li 等[6]研究結(jié)果相似。推測(cè)IL-35 在尋常型銀屑病的發(fā)病過(guò)程中可能起了一定的抗炎作用，是一種保護(hù)性因素。對(duì)免疫反應(yīng)具有負(fù)向抑制作用，可抑制炎癥反應(yīng)、防止過(guò)度的自身免疫反應(yīng)的發(fā)生。

TGP 作用機(jī)制廣泛，有抗炎、調(diào)節(jié)免疫等功能，影響細(xì)胞增殖、止痛及保肝等作用。通過(guò)本研究，我們初步探討了TGP 可能是通過(guò)調(diào)節(jié)外周血中IL-12、IL-35 的水平而發(fā)揮其對(duì)銀屑病的治療作用的。在今后的研究中，我們會(huì)通過(guò)檢測(cè)不同時(shí)期尋常型銀屑病患者血清或皮損中IL-12、IL-35 的表達(dá)，來(lái)進(jìn)一步明確TGP 治療銀屑病的作用機(jī)制。

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