王軍 溫達雄 黃秀凡 黃慧敏 溫惠娟

結(jié)直腸癌組織E-cadherin表達及其與病理臨床特征關(guān)系

王軍 溫達雄 黃秀凡 黃慧敏 溫惠娟

目的探討結(jié)直腸癌患者E鈣粘蛋白(E-cadherin)的表達及其意義。方法免疫組化技術(shù)檢測130例結(jié)直腸癌患者癌組織及30例癌旁正常組織E-cadherin的表達情況, 觀察E-cadherin表達與患者病理臨床特征間的關(guān)系。結(jié)果癌組織中E-cadherin的表達明顯下降, 與癌旁正常組織比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；E-cadherin的低表達與發(fā)病部位、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；與性別、年齡、浸潤深度無關(guān)。結(jié)論E-cadherin蛋白低表達可能促進了結(jié)直腸癌的惡性進展及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移, 觀察E-cadherin的表達情況, 有助于了解結(jié)直腸癌的惡性程度及判斷預(yù)后。

E鈣粘蛋白；結(jié)直腸癌；分化；轉(zhuǎn)移

結(jié)直腸癌(colorectal cancer, CRC)包括結(jié)腸癌和直腸癌,是發(fā)病率和致死率較高的惡性腫瘤之一,2014年美國癌癥協(xié)會(ACS)最新統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示, 在癌癥死亡中, 男性占8%, 女性占9%, 均排在第三位。2014年預(yù)計有160萬新增癌癥患者,結(jié)直腸癌位于所有人群惡性腫瘤發(fā)病率的第三位[1]。近期研究表明[2], 我國城鄉(xiāng)人群結(jié)直腸癌發(fā)病率均呈上升趨勢, 并預(yù)測我國結(jié)直腸癌新發(fā)病例仍將逐年增多。CRC的發(fā)生發(fā)展是一個多步驟、多環(huán)節(jié)、多基因參與的復(fù)雜過程, E-cadherin是一種鈣依賴性細胞粘附分子, 存在于正常上皮細胞中以維持組織結(jié)構(gòu)的完整性, E-cadherin的下調(diào)與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。本文觀察E-cadherin在結(jié)直腸癌組織中的表達, 探討其在結(jié)直腸癌的發(fā)生、浸潤及轉(zhuǎn)移的機制, 發(fā)展過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集河源市人民醫(yī)院2011年1月1日～2013年12月31日病歷資料完整的結(jié)直腸癌手術(shù)切除標本共130例, 取癌旁正常組織作為對照(30例), 標本均經(jīng)病理檢查確診。所有患者術(shù)前均未接受任何治療。

1.2 實驗方法 所有標本常規(guī)取材, 經(jīng)10%中性福爾馬林固定, 石蠟包埋,4 μm厚連續(xù)切片, 貼于用多聚賴氨酸處理的玻片上,60℃烘烤4 h備用。免疫組化標記采用S-P法, 常規(guī)石蠟切片脫蠟水化,3%過氧化氫溶液, 室溫下孵育10 min,以滅活內(nèi)源性過氧化物酶, 高壓鍋內(nèi)進行高溫抗原修復(fù), 每張切片滴加抗E-cadherin(即用型)、Ki-67(即用型)抗體,4℃冰箱孵育過夜, PBS沖洗, 用PBS代替一抗做陰性對照, 滴加二抗, 室溫30 min, DBA顯色, 蘇木素復(fù)染, 常規(guī)脫水、透明、干燥、封片。E-cadherin鼠抗人單克隆抗體、Ki-67及其他免疫組化試劑均購自廣州安必平醫(yī)藥科技有限公司。

1.3 結(jié)果判讀 標本低倍鏡(×100)下選取具有代表性陽性染色視野, 每張切片選擇觀察5個高倍(×400)視野, 每視野100個細胞, 計數(shù)陽性細胞百分數(shù)及染色強度, 取平均值。E-cadherin染色結(jié)果采用半定量積分法, 陽性表達為細胞膜和(或)細胞漿呈棕黃色顆粒著色。陽性細胞數(shù)：0分(陽性率≤5%),1分(6%～25%),2分(26%～50%),3分(51%～75%),4分(＞75%)；染色強度依次為：0分(無色),1分(淡黃色),2分(棕黃色),3分(棕褐色)；兩者乘積, ≤3分為陰性(-),＞3分為陽性(+)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床病理特征 收集病歷資料完整的結(jié)直腸癌手術(shù)患者130例, 其中男79例, 女51例；男性最小年齡29歲, 最大年齡96歲, 平均年齡66.13歲；女性最小年齡27歲, 最大年齡88歲, 平均年齡64.63歲。發(fā)病部位及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移統(tǒng)計顯示：回盲部12例, 升結(jié)腸9例, 結(jié)腸肝曲2例, 橫結(jié)腸7例, 降結(jié)腸3例, 直乙交界5例, 乙狀結(jié)腸27例(以上各部位淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移共12例), 直腸65例(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例)?？傮w轉(zhuǎn)移率為21.54%(28/130), 其中直腸癌轉(zhuǎn)移率占轉(zhuǎn)移總數(shù)的57.14%(16/28)。分化程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系顯示：高分化6例, 0例轉(zhuǎn)移；中分化88例,15例轉(zhuǎn)移, 轉(zhuǎn)移率為17.05%(15/88)；低分化36例,13例轉(zhuǎn)移, 轉(zhuǎn)移率為36.11%(13/36), 其中低分化以粘液腺癌為主要類型。

2.2 結(jié)直腸癌組織中E-cadherin的表達情況 結(jié)果顯示E-cadherin在癌旁正常組織中表達率為93.33%, 而在結(jié)直腸癌組織中表達為40.00%, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=27.733, P＜0.01), 癌組織中E-cadherin的表達明顯下降。見表1。

2.3 結(jié)直腸癌組織中E-cadherin的表達與病理臨床特征關(guān)系 E-cadherin陽性蛋白表達率與患者的性別(χ2=0.264, P＞0.05)、年齡(χ2=1.901, P＞0.05)及腫瘤的浸潤深度(χ2=0.513, P＞0.05)無關(guān)；與腫瘤的部位(χ2=6.282, P＜0.01)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=8.024, P＜0.05)有關(guān)；高、中、低分化各組E-cadherin的表達總體比較, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.079, P＞0.05), 而高+中分化組及中分化組與低分化組E-cadherin的表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.668, P＜0.05；χ2=4.949, P＜0.05)。見表2。

表1 結(jié)直腸癌組織中E-cadherin的表達情況(n, %)

表2 結(jié)直腸癌組織中E-cadherin的表達與病理臨床特征關(guān)系(n, %)

3 討論

E-cadherin是Takeichi最早發(fā)現(xiàn)的一種介導(dǎo)細胞間相互聚集的粘附分子, 定位于人染色體16q21.22, 由CDH1基因編碼的跨膜糖蛋白, 分子量124 kDa, 在細胞外Ca2+的參與下, E-cadherin通過胞質(zhì)連環(huán)素與細胞骨架蛋白相連, 介導(dǎo)上皮細胞之間及細胞與細胞外基質(zhì)的粘附[3], 維持上皮組織結(jié)構(gòu)完整性和極性。研究表明, 多種上皮源性腫瘤組織中, E-cadherin表達明顯減少[4], 而且其表達下降與惡性腫瘤的分化、局部侵襲及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[5]。表1結(jié)果顯示E-cadherin在正常結(jié)直腸組織中表達率為93.33%, 明顯高于結(jié)直腸癌中的表達率40.00%(P＜0.01), 結(jié)直腸癌組織中E-cadherin的表達較癌旁正常組織明顯下降, 與Karamitopoulou等[6]的研究結(jié)果一致。推測結(jié)直腸癌組織E-cadherin表達明顯減少可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

臨床病理資料統(tǒng)計顯示, E-cadherin與患者性別、年齡、腫瘤浸潤深度無關(guān), 而與發(fā)病部位有關(guān)(χ2=6.282, P＜0.01)。直腸占50%(65/130), 是結(jié)直腸癌發(fā)病的主要部位, 這與珠珠等[7]對昆明地區(qū)結(jié)直腸癌患者調(diào)查結(jié)果較一致。有關(guān)直腸發(fā)病部位E-cadherin低表達(29.23%)的機制有待進一步研究。

高、中、低分化各組E-cadherin的表達總體比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.079, P＞0.05), 而高+中分化組及中分化組與低分化組E-cadherin的表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05), E-cadherin的表達與腫瘤的分化程度顯著相關(guān)。E-cadherin在結(jié)直腸癌的表達較正常組織明顯減少, 而且隨著腫瘤分化程度下降(惡性程度上升)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移, 表達逐漸降低, 表明E-cadherin表達減少使同種細胞失去接觸抑制及相互粘連減弱, 浸潤和轉(zhuǎn)移能力上升, 導(dǎo)致腫瘤細胞的侵襲性生長與轉(zhuǎn)移, 促進了腫瘤的惡性進展。

在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的28例結(jié)直腸癌中E-cadherin明顯低表達, 其陽性表達率僅為21.43%, 統(tǒng)計結(jié)果顯示, 結(jié)直腸癌E-cadherin蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)(χ2=8.024, P＜0.05)。提示E-cadherin的低表達與結(jié)直腸癌的淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。其原因可能為癌細胞E-cadherin表達明顯減少,細胞間及細胞與基質(zhì)間相互粘附能力減弱, 瘤細胞容易從原發(fā)灶脫落和游走, 進而引起腫瘤細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。因此, 檢測E-cadherin蛋白表達可能為判斷結(jié)直腸癌是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及判斷預(yù)后提供參考指標。

綜上所述, E-cadherin蛋白低表達可能促進了結(jié)直腸癌的惡性進展及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移, 觀察E-cadherin的表達情況,可有助于了解結(jié)直腸癌的惡性程度及判斷預(yù)后。

[1]Trabulo D, Ribeiro S, Martins C, et al. Metabolic syndrome and colorectal neoplasms: An ominous association. World J Gastroenterol,2015,21(17):5320-5327.

[2]代珍, 鄭榮壽, 鄒小農(nóng), 等. 中國結(jié)直腸癌發(fā)病趨勢分析和預(yù)測. 中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2012,46(7):598-603.

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[7]珠珠, 黃鑒, 李文亮, 等.1628例大腸癌臨床發(fā)病特點及發(fā)病趨勢分析. 昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013(10):84-87.

Expression of E-cadherin in colorectal cancer tissue and its relationship with pathological clinical characteristics

WANG Jun, WEN Da-xiong, HUANG Xiu-fan, et al. Department of Pathology, Heyuan City People’s Hospital, Heyuan517000, China

ObjectiveTo investigate expression of E-cadherin in colorectal cancer patients and its significance.MethodsImmunohistochemical technique was applied to detect expression of E-cadherin in130 colorectal cancer tissue and30 normal tissue near cancer. Relationship between expression of E-cadherin and pathological clinical characteristics was observed.ResultsExpression of E-cadherin decreased remarkably in cancer tissue, and it had statistically significant difference comparing with that in normal tissue near cancer (P＜0.01). Low expression of E-cadherin was correlated with lesion position, degree of differentiation and lymphatic metastasis, and it had no correlation with gender, age and infiltration depth.ConclusionLow expression of E-cadherin may accelerate malignant progress and lymphatic metastasis of colorectal cancer. Thus, observation of expression of E-cadherin is helpful for understanding severity and judging in colorectal cancer.

E-cadherin; Colorectal cancer; Differentiation; Metastasis

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.15.007

2015-04-14]

517000 河源市人民醫(yī)院病理科