于琬姝，范紅艷 (吉林醫(yī)藥學(xué)院:．202級(jí)影像學(xué)本科班，2．藥理教研室，吉林吉林 3203)

吐溫80對(duì)蟾蜍離體心臟收縮活動(dòng)的影響

于琬姝1，范紅艷2*(吉林醫(yī)藥學(xué)院:1．2012級(jí)影像學(xué)本科班，2．藥理教研室，吉林吉林 132013)

目的 探討不同濃度的吐溫80對(duì)蟾蜍離體心肌收縮活動(dòng)的影響，為吐溫80作為臨床注射劑的常用增溶劑提供安全性指導(dǎo)。方法 用不同濃度(0．001% ～1%)的吐溫80任氏液溶液對(duì)蟾蜍離體心臟進(jìn)行灌流，觀察不同濃度吐溫80對(duì)心肌收縮活動(dòng)的影響。結(jié)果 吐溫80在濃度為0．001%(V/V)對(duì)心肌收縮力無(wú)明顯抑制作用(P＞0．05);濃度為0．01% ～1%范圍內(nèi)對(duì)心肌收縮呈明顯抑制作用(P＜0．05，P＜0．01，P＜0．001)，心肌收縮力降低幅度分別為13．86%，19．23%，24．63%，呈現(xiàn)濃度效應(yīng)依賴關(guān)系(r=-0．905)。結(jié)論低于0．001%濃度吐溫80對(duì)心肌無(wú)明顯作用抑制，濃度超過(guò)0．01%的吐溫80溶液對(duì)心肌收縮呈明顯的抑制作用。

吐溫80;蛙心灌流;心肌收縮力;蟾蜍

吐溫80又名聚山梨酯80，化學(xué)名為聚氧乙烯-20-山梨醇酐單油酸酯，屬多元醇型非離子表面活性劑，由于具有較長(zhǎng)的碳鏈結(jié)構(gòu)，對(duì)親脂性藥物有較好的助溶作用，故常被用作增溶劑、乳化劑等，為中西藥注射劑的常用輔料之一［1-2］。近年來(lái)臨床上以吐溫80為輔料的制劑靜脈注射引發(fā)類過(guò)敏反應(yīng)事件已引起醫(yī)藥界的廣泛重視，如魚(yú)腥草注射液和維生素K1注射液等［3-5］。因?yàn)橥聹?0為一種聚合物，穩(wěn)定性不佳，在一定條件下可發(fā)生降解［6-7］。高純度的吐溫80呈無(wú)色透明，而大多數(shù)吐溫80含有一定的雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，外觀呈淡黃色，這些雜質(zhì)或降解產(chǎn)物可能是導(dǎo)致吐溫80出現(xiàn)不良反應(yīng)的主要原因［8-9］。各國(guó)藥典對(duì)吐溫80質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)不盡相同，國(guó)內(nèi)外不同廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量差別很大，可以直接影響其安全性［10-11］。吐溫80的不良反應(yīng)與其用量間存在明顯的量效關(guān)系［12-13］，故選擇優(yōu)質(zhì)的吐溫80并限定其使用濃度，是保證注射液安全性的關(guān)鍵。吐溫80在科研實(shí)驗(yàn)中也經(jīng)常作為藥物的助溶劑，本研究目的在于探討吐溫80對(duì)動(dòng)物心肌收縮力的影響。利用變溫動(dòng)物離體心臟為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行的Straub's法和八木-Hartung法蛙心插管能夠直觀地觀察整體心臟收縮，具有操作簡(jiǎn)單、不需恒溫裝置和供氧設(shè)備，心臟活動(dòng)不受神經(jīng)體液調(diào)節(jié)等優(yōu)點(diǎn)。故本實(shí)驗(yàn)以蟾蜍離體心臟為研究對(duì)象，觀察吐溫80對(duì)離體蛙心心肌收縮力的影響及其濃度與效應(yīng)的關(guān)系。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)材料

蟾蜍，雌雄兼用，體質(zhì)量50～70 g，延邊大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，張力換能器(四川成都泰盟科技有限公司);吐溫80(南京威爾化工有限公司，批號(hào)090813-3)，臨用前以任氏液配置成相應(yīng)濃度備用;任氏液為標(biāo)準(zhǔn)配方(所需試劑為國(guó)產(chǎn)分析純)。

1．2 離體蟾蜍心臟標(biāo)本的制作

采用斯氏蛙心插管法［14］。取蟾蜍60只，毀腦毀髓，背位固定于蛙板上，打開(kāi)胸腹腔，暴露心臟及相連的大血管。在主動(dòng)脈干及左主動(dòng)脈下分別穿1條絲線，并打虛結(jié)備用;在左主動(dòng)脈根部剪1個(gè)V字型切口，將盛有任氏液的插管由切口向心臟內(nèi)插入至動(dòng)脈圓錐，再旋轉(zhuǎn)插管尖端向心室方向，在心臟收縮瞬間插入左心室腔內(nèi)。插管成功后，用新鮮任氏液沖洗插管3～5次，洗去心室內(nèi)殘留血液。用手術(shù)線分別結(jié)扎插管和左右主動(dòng)脈，固定于插管側(cè)鉤上。剪斷左右主動(dòng)脈，提起心臟，結(jié)扎腔靜脈，并剪斷使心臟離體，向心管內(nèi)加入1 mL任氏液，用試管夾將蛙心插管固定在萬(wàn)能支臺(tái)上。在每次給藥前從心管中準(zhǔn)確抽出1 mL任氏液，再加入同等容量的含有不同濃度吐溫80的灌流液，以便保持心臟前后負(fù)荷的一致性。

1．3 蟾蜍心臟收縮活動(dòng)的記錄

用連有張力換能器的蛙心夾于心室舒張期夾住心尖，用張力換能器連接離體蛙心與BL-420S系統(tǒng)，使收縮曲線的波動(dòng)幅度局限在2．0 g左右。待心肌收縮曲線平穩(wěn)后，記錄心肌收縮幅度。準(zhǔn)確抽出1 mL心管內(nèi)的任氏液，重復(fù)灌注任氏液，穩(wěn)定30 min，待心臟舒縮曲線平穩(wěn)后記錄心肌收縮力及心率，作為空白對(duì)照(自身對(duì)照)。用任氏液沖洗3～5次，1 mL/次，至心肌收縮曲線恢復(fù)，同上述方法，依次灌注給予0．001% ～1%的吐溫80任氏液，分別記錄上述觀察指標(biāo)［15］。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和 Bonferroni檢驗(yàn)，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

用濃度范圍為0．001% ～1%的吐溫80灌注離體蛙心后，測(cè)得的蟾蜍心肌收縮力及其與基礎(chǔ)值差值的百分比見(jiàn)表1，其中與基礎(chǔ)值差值的百分比(%)=(處理后收縮幅度-空白對(duì)照收縮幅度)/空白對(duì)照收縮幅度×100。由表1可見(jiàn)，與空白對(duì)照組比較，濃度為0．001%的吐溫80對(duì)蟾蜍心肌無(wú)明顯抑制作用(P ＞0．05)，但是濃度為 0．01%，0．1%，1% 的吐溫80對(duì)心肌收縮力均有明顯抑制作用(P＜0．05，P＜0．01，P ＜0．001，見(jiàn)圖1 及表 1，圖 1 中 A-D 分別表示灌流液為任氏液及不同濃度的吐溫80)。與空白對(duì)照組比較，吐溫80在0．01% ～1%濃度范圍內(nèi)時(shí)可使心肌收縮幅度分別降低13．86%，19．23%和24．63%，隨著劑量的增加而抑制程度增強(qiáng)，呈負(fù)相關(guān)(r=0．905，見(jiàn)圖 2)。

表1 吐溫80對(duì)蟾蜍離體心臟收縮功能影響(，n=12)

表1 吐溫80對(duì)蟾蜍離體心臟收縮功能影響(，n=12)

與空白對(duì)照組比較，*P ＜0．05，＊＊P ＜0．01，＊＊＊P ＜0．001

組別 心肌收縮幅度g與基礎(chǔ)值差值的百分比%2．05 ±0．05 -0．001%吐溫80 組 2．11 ±0．14 2．97 0．01%吐溫80 組 1．76 ±0．30* -13．86 0．1%吐溫80組 1．66±0．23＊＊ -19．23 1%吐溫80 組 1．54 ±0．32＊＊＊空白對(duì)照組-24．63

3 討論

劉倩等研究發(fā)現(xiàn)，吐溫80作為中藥注射劑的輔料，在高于0．062 5%的濃度下即存在細(xì)胞毒性［16］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦表明，吐溫80在濃度為0．001%(V/V)以下時(shí)對(duì)心肌收縮力無(wú)顯著影響，提示科研實(shí)驗(yàn)或臨床用藥時(shí)血漿藥物濃度低于0．001%時(shí)是相對(duì)安全的;而濃度高于0．01%的吐溫80則對(duì)離體蛙心收縮力存在明顯抑制作用，且存在濃度效應(yīng)依賴性。提示臨床注射劑使用吐溫80作為助溶劑時(shí)濃度應(yīng)盡量降低，確保血漿藥物濃度低于0．01%，以最大幅度減少吐溫80本身作為輔料的副作用，是保證注射液安全性的關(guān)鍵;科研實(shí)驗(yàn)中血漿藥物濃度高于0．01%則必須設(shè)溶劑對(duì)照組，以排除吐溫80作為溶劑本身對(duì)心肌的直接抑制作用。

圖1 任氏液及不同濃度的吐溫80對(duì)蟾蜍離體心臟收縮力的影響

圖2 不同濃度的吐溫80對(duì)蟾蜍離體心臟收縮力抑制作用的線性相關(guān)性

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Effects of tween 80 on m yocardial contractility of isolated hearts in toads

YUWanshu1，F(xiàn)AN Hongyan2*(1．Imageology Undergraduate Class of Grade 2012;2．The Departament of Pharmacology，Jilin Medical College，Jilin City，Jilin Province，132013，China)

Objective To investigate the effects of different concentrations of tween 80 on themyocardial contractility of isolated hearts in toads，and provide a guidance for tween 80 as a clinical solubilizer．Methods The different concentrations(0．001% ～1%)of tween 80 solution were employed to perfusion of isolated toad hearts，and the changes ofmyocardial contractility on toad hearts were observed and recorded．Results Compared with the normal control group，tween 80 at a concentration of 0．001%(V/V)had no significant inhibition on myocardial contractility(P ＞0．05)．And themyocardial contractility was significantly inhibited by the Tween 80 at the concentration of0．01%to 1%(P ＜0．05，P ＜0．01，P ＜0．001)，the reduction ofmyocardial contractility were 13．86%，19．23%or 24．63%，which appeared in a concentration dependentmanner(r=-0．905)．Conclusion Tween 80 less than 0．001%concentration has no significant inhibition on cardiac，and themyocardial contractility could be inhibited bymore than 0．01%tween 80 solution．

tween 80;heart perfusion;myocardial contractility;toad

R96

A

1673-2995(2015)04-0251-03

吉林省教育廳“十二五科技計(jì)劃”項(xiàng)目資助課題(2012337)．

于琬姝(1994-)，女(漢族)，本科在讀．

范紅艷(1975-)，女(漢族)，副教授，碩士．

10.13845/j.cnki.issn1673-2995.2015.04.005

2014-11-12)