宋雪琳, 李雅梅, 肖俊松,*, 吳 華, 曹雁平

（1.北京工商大學北京市食品風味化學重點實驗室/北京市食品添加劑工程技術研究中心/食品質量與安全北京實驗室，北京 100048；2.江漢大學生命科學院，湖北 武漢 430070）

葡萄籽原花青素對營養(yǎng)肥胖模型大鼠腸道菌群的影響

宋雪琳1, 李雅梅1, 肖俊松1,*, 吳 華2, 曹雁平1

（1.北京工商大學北京市食品風味化學重點實驗室/北京市食品添加劑工程技術研究中心/食品質量與安全北京實驗室，北京 100048；2.江漢大學生命科學院，湖北 武漢 430070）

以高脂膳食喂養(yǎng)大鼠，復制營養(yǎng)肥胖模型，然后灌胃原花青素，采用變性梯度凝膠電泳，實時熒光定量等不依賴微生物培養(yǎng)的手段和多元統計分析方法，研究葡萄籽原花青素對營養(yǎng)肥胖模型大鼠腸道菌群生態(tài)的影響。結果表明，低劑量（100 mg/（kg·體重·d））原花青素可以顯著抑制大鼠肥胖，處理后大鼠腸道菌群結構與模型組分離；葡萄籽原花青素顯著降低了肥胖大鼠腸道菌群中厚壁菌門的含量，提高了擬桿菌門的含量，顯著降低了厚壁菌門與擬桿菌門比值；實時熒光定量檢測顯示，原花青素可以促進擬桿菌增殖，抑制柔嫩梭菌增殖，初步揭示出葡萄籽原花青素可能具有調節(jié)腸道菌群的功能；原花青素作用的關鍵微生物種屬為Blautia，Bacteroides，Lactobacillus，Anaerostipes，Clostridium，Anaerofilum。

葡萄籽原花青素；肥胖；腸道菌群；變性梯度凝膠電泳；實時熒光定量PCR

腸道菌群是人體最大的菌庫，能夠為宿主機體提供本身不具有的酶系和生化代謝通路。腸道菌群不僅有增強免疫、解毒、促進食物吸收與藥物代謝等功能，而且能夠通過多種途徑調節(jié)宿主脂肪吸收、轉運、存儲和代謝全過程。腸道菌群作為人類的共生體，與人類體重及肥胖程度密切相關，可能是同遺傳、飲食等導致肥胖基本因子發(fā)生偶合的關鍵因素［1］。

原花青素是一類多酚類物質，是以黃烷-3-醇（flavan-3-ol），如（+）-兒茶素（（+）-catechin）和（-）-表兒茶素（（-）-epicatechin）為單體，通過C4-C6或C4-C8鍵連接而成的聚合物。原花青素是植物重要的次生代謝產物，廣泛存在于人類膳食中，果蔬中含量尤其豐富。研究表明，原花青素具有良好的抗氧化、清除自由基、減肥消炎等生理作用［2-3］。流行病學調查顯示，膳食中的原花青素等多酚類物質的攝入能顯著降低肥胖、糖尿病等代謝性疾病的發(fā)生概率［4］。Lee等［5］在研究原花青素對體外腸道菌群的影響中發(fā)現，原花青素能夠有效抑制腸道致病菌，而對益生菌的影響較小。

機體腸道菌群數量龐大，種類繁多，對機體正常生理活動具有重要作用，因此對腸道菌群的認識和研究具有重要意義。大多腸道菌都是厭氧菌，用傳統的分離、培養(yǎng)方法難以培養(yǎng)或目前的技術還不能夠對其進行培養(yǎng)，相應的分析也難以進行，只有低于30%的細菌可經過目前的體外培養(yǎng)技術獲得［6-7］。本實驗采用分子生物學手段如變性梯度凝膠電泳（denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE），實時熒光定量（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，PCR（RT-PCR））等方法研究糞便中菌群DNA的組成變化情況，分析葡萄籽原花青素對營養(yǎng)肥胖模型大鼠腸道菌群微生態(tài)環(huán)境的影響。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

葡萄籽原花青素（純度≥95%），天津尖峰天然產物公司；瓊脂糖，美國賽默飛世爾公司；DNA回收試劑盒、DL2000 DNA Marker、dNTP、10×buffer、Taq DNA聚合酶，寶生物工程（大連）有限公司；引物合成，上海生物工程有限公司；去離子甲酰胺、丙烯酰胺、尿素、過硫酸銨、四甲基二乙胺，北京拜爾迪生物技術有限公司；染料SYBR GreenⅡ，寶生物工程（大連）有限公司。

1.2 儀器與設備

MyCycler型PCR儀，變性梯度凝膠電泳儀和iQ5型實時熒光定量PCR儀，美國Bio-Rad公司；Image Quant 300型凝膠成像儀，美國GE公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 動物實驗

SPF級Wistar雄性大鼠80只（90±10）g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司。飼養(yǎng)于SPF級動物房，動物房溫度25℃左右，濕度約60%，光照10～12 h/d，5只1籠。將80只Wistar雄性大鼠隨機分為2大組，一組70只作為模型組，另一組10只作為正常組。正常組和模型組分別給予基礎飼料和高脂飼料、花生、蛋黃喂養(yǎng)。造模期間大鼠自由攝食、飲水。模型組高于正常組體重20%時，認為造模成功，進行分組給藥。給藥期間，高、中、低劑量組分別按400，250，100 mg/（kg·d）的劑量以無菌水為溶劑給大鼠灌胃葡萄籽原花青素，陽性對照組灌胃低聚果糖1 g/（kg·d），模型對照和正常組灌胃無菌水。灌胃6周后，收集大鼠糞便樣本至-80℃冰箱保存。

1.3.2 糞便細菌總DNA的提取

稱量約200 mg的糞便樣本，加入10 mL 0.1 mol/L，pH值為7.0的無菌磷酸鈉緩沖液中，充分震蕩懸浮5～10 min，500 r/min離心5 min，收集上清液。重復該步驟2～3次，上清液10 000 r/min離心10 min。收集沉淀，將沉淀懸浮于10 mL的緩沖液中，10 000 r/min離心5 min，洗滌沉淀，重復2～3次，最后收集沉淀。在菌體沉淀中加入570 μL TE buffer，反復吹打使之懸浮，加入30 μL 10%的十二烷基磺酸鈉和10 μL蛋白酶K，混勻后37℃溫育1 h；加入100 μL 5M NaCl，充分混勻加入80 μL，65℃預熱的十六烷基三甲基溴化銨裂解液，混勻后65℃溫育10 min；加入等體積的酚/氯仿/異戊醇（25∶24∶1），混勻，12 000 r/min離心10 min，直至有機相和水相間不再有蛋白質；轉移上清液至新的1.5 mL EP管中，加入約0.7倍體積的異丙醇，輕輕混勻沉淀DNA至少1 h，12 000 r/min離心5 min；棄上清液，沉淀用70%的乙醇1 mL洗滌，12 000 r/min離心10 min，棄上清液，重復一次；干燥后加30 μL TE buffer，輕彈管壁使其混勻，-20℃保存。

1.3.3 DGGE條件的確定

采用通用引物擴增16S rDNA基因V3可變區(qū)。擴增引物序列（上游引物341fGC：5'-CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGC CTACGGGAGGCAGCAG-3'。下游引物518r：5'-ATTACCGCGGCTGCTGG-3'）目的片段基因200 bp。PCR反應擴增體系（25 μL）：0.13 μL Taq DNA聚合酶（5 U/μL），2.5 μL 10×buffer（Mg2+Plus），2 μL dNTPs（各2.5 mM），上下游引物各0.5 μL，DNA模板0.5 μL，加無菌雙蒸水將體積補足至25 μL。采用降落PCR反應程序：94℃預變性4 min；94℃變性1 min，65℃退火1 min，72℃延伸1 min，執(zhí)行20個循環(huán)，每個循環(huán)退火溫度降低0.5℃；94℃變性1 min，55℃退火1 min，72℃延伸1 min，再執(zhí)行5個循環(huán)。將瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增合格樣品進行復原條件PCR（50 μL）擴增，滴入0.25 μL Taq DNA聚合酶（5 U/μL），5.0 μL 10×buffer（Mg2+Plus），4 μL dNTPs（各2.5 mM），上下游引物各1 μL，DNA模板1 μL，加無菌雙蒸水將體積補足至50 μL。反應體系：94℃預變性3 min；94℃變性1 min，55℃退火1 min，72℃延伸1 min，進行5個循環(huán)；72℃維持5 min。將瓊脂糖凝膠電泳檢測合格樣品進行DGGE。

DGGE采用7.5%的聚丙烯酰胺凝膠，變性梯度范圍25%～55%，上樣量為40 μL樣本和10 μL loading buffer，電泳緩沖液為1×TAE，電壓45 V，60℃電泳15 h，電泳結束后溴化乙錠染色20 min，然后用水漂洗20 min，通過凝膠成像系統成像。PCR擴增條帶切膠回收純化，送北京華大基因TA克隆測序。將測序得到的16S rDNA序列在Genebank上進行序列比對，得到每條條帶菌所屬的類別，并比較不同泳道（組別）樣本中不同門類菌的相對含量。

1.3.4 質粒標準品制備

采用特異性引物進行PCR，純化PCR產物，測定其濃度，并根據其分子量計算其拷貝數，即得相應菌屬的質粒標準品。各菌屬擴增引物及條件為：

乳酸菌屬特異性擴增［8］。引物Lac1：5'-AGCAGTAGGGAATCTTCCA-3'。Lac2：5'-ATTYCACCGCTACACATG-3'。擴增體系同1.3.3中25 μL體系。反應條件：94℃預變性2 min；94℃變性30 s，61℃退火1 min，72℃延伸1 min，進行30個循環(huán)；72℃延伸7 min。

擬桿菌特異性擴增［9］。引物Bfr-F：5'-CTGAACCAGCCAAGTAGCG-3'。Bfr-R：5'-CCGCAAACTTTCACAACTGACTTA-3'。擴增體系同1.3.3中25 μL體系。反應條件：95℃預變性2 min；95℃變性30 s，52℃退火30 s，72℃延伸1 min，進行30個循環(huán)；72℃延伸5 min。

柔嫩梭菌特異性擴增［10-11］。引物Clep-F：5'-GCACAAGCAGTGGAGT-3'。Clep-R3：5'-CTTCCTCCGTTTTGTCAA-3'。擴增體系同1.3.3中25 μL體系。反應條件：94℃預變性5 min；94℃變性20 s，50℃退火20 s，72℃延伸30 s，進行30個循環(huán)；72℃延伸5 min。

1.3.5 特定菌屬的RT-PCR檢測

質粒標準品進行10倍梯度稀釋，獲得系列拷貝數梯度的質粒標準品，以此為模板進行RT-PCR。以PCR反應的Ct值為縱坐標，初始拷貝數的對數作為橫坐標，構建標準曲線。

不同菌屬的實時熒光定量PCR（25 μL）的擴增體系：12.5 μL染料SYBR GreenⅡ，上下游引物各1 μL，DNA模板或者質粒標準品1 μL，雙蒸水9.5 μL。乳酸菌實時熒光定量PCR反應程序：94℃預變性3 min；94℃變性10 s，56℃退火30 s，72℃延伸30 s，進行40個循環(huán)；55℃保持10 s后，讀取反應管中的熒光信號。擬桿菌實時熒光定量PCR反應程序：94℃預變性3 min；94℃變性10 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，進行40個循環(huán)；55℃保持10 s后，讀取反應管中的熒光信號。柔嫩梭菌實時熒光定量PCR反應程序：94℃預變性3 min；94℃變性10 s，54℃退火30 s，72℃延伸30 s，進行40個循環(huán)；55℃保持10 s后，讀取反應管中的熒光信號。每個樣本重復3次，根據標準曲線計算樣本中該菌初始拷貝數，換算成每克糞便樣本中該菌的初始拷貝數。

1.3.6 數據處理

應用Quantity One軟件對DGGE圖譜進行數字化處理；采用SIMCA 13.0統計軟件進行多元統計分析PCA，PLS-DA分析；采用SPSS 17.0軟件進行顯著性檢驗；采用Origin 8.5軟件繪圖。

2 結果與分析

2.1 大鼠體重變化情況

造模成功后，按實驗設計給藥處理6周，每周測量各組大鼠體重，體重動態(tài)變化如圖1。

圖1 營養(yǎng)肥胖模型大鼠灌胃原花青素期間體重變化Fig.1 Change of body weight of diet-induced obesity rats treated with grape seed procyanidins

從圖1可以看出，灌胃初期，灌胃組和模型組體重幾乎沒有差異，均高于正常組體重20%。隨著灌胃時間的延長，高、中、低劑量原花青素灌胃組體重相較于模型組體重均有所減輕。第5周低劑量組體重顯著低于模型組（P＜0.05），第6周中、低劑量組體重均顯著低于模型組（P＜0.05）。高劑量組和陽性組體重有降低趨勢，但不顯著。

2.2 DGGE分析

將檢測合格的各組大鼠糞便DNA樣品，進行DGGE分析，染色后凝膠成像得到DGGE圖譜如圖2。

從圖2中可以看出，不同組別的DGGE圖譜存在相似和不同的條帶，但直觀上難以看出區(qū)別。故采用Quantity one軟件數字化處理，每個條帶的光密度值可作為該條帶所代表的微生物類群的豐度值，歸一化處理后得到其相對豐度。不同泳道上相同位置的條帶視為相同的微生物類群，作為一個變量，最終分析了33個不同位置條帶，故有33個變量。樣品按行整理，指標（33個菌群）按列整理，得到了16 ×33的數據矩陣。

采用SIMCA 13.0軟件進行數據降維分析和可視化呈現，嘗試主成分分析法（PCA，principal component analysis）和偏最小二乘判別分析（PLS-DA，partial least squares-discriminant analysis）。運用PCA嘗試發(fā)現反映事物主要特征的變量，反應樣品的特征，解釋實驗現象；PLS-DA利用現有的樣本判別模型，分析組間差異較小而組內差異較大的數據，消除隨機誤差，有利于發(fā)現組間差異和差異條帶。兩種模型分析結果如圖3。

圖2 各組大鼠腸道菌群16S rRNA V3可變區(qū)DGGE圖譜Fig.2 DGGE electropherogram of 16S rRNA V3 variable region of gut microflora in rats

圖3 DGGE條帶的PCA和PLS-DA分析Fig.3 Analysis of DGGE data using PCA and PLS-DA methods

圖3（a）顯示，低劑量組、陽性組和正常組較為接近，高劑量組則和模型組較為接近，說明低劑量組和陽性組腸道菌群有向正常轉化的趨勢。圖3（b）顯示，模型組與正常組距離較遠，說明高脂膳食確實顯著改變了腸道菌群；高劑量組與模型組距離較近，說明高劑量組對腸道菌群影響不大；低劑量組、正常組分別分布于第一和第二象限，其腸道菌群結構與模型組有較大區(qū)別，說明低劑量原花青素能改變高脂肥胖大鼠體內腸道菌群結構。

圖3（c）為因子載荷圖。以“VIP”值大于1為標準，初步篩選對解釋組間差異重要的條帶，共計15條，分別為B1，B2，B12，B13，B16，B17，B18，B19，B23，B24，B25，B27，B28，B31。多重比較顯示，與模型組相比，低劑量組B1，B2，B12，B13，B16，B23，B25，B27條帶的相對豐度有顯著差異（P＜0.05，陽性組與正常組因只有2個樣本，未作多重比較）。

2.3 各組別的菌群結構分析

所有36個條帶割膠測序，在16S rRNA數據庫中進行序列比對，以相似度＞95%為標準選取參考菌株，用Mega 6.0軟件Neighbour-Joint法構建系統發(fā)育樹，對條帶所代表的微生物種群進行鑒定，鑒定結果圖4。圖4顯示，原花青素作用的部分關鍵菌群為條帶B1（Blautia spp.），B2（Bacteroides spp.），B12（Lactobacillus spp.），B13（Anaerostipes spp.），B16（Blautia spp.），B17（Blautia spp.），B18（Clostridium spp.），B19（Anaerostipes spp.），B23（Lactobacillus spp.），B24（Lactobacillus spp.），B25（Lactobacillus spp.），B27（Anaerofilum spp.）。大部分為目前已知的腸道微生物，說明該方法對主要微生物類群有較好的分析效果，但是含量較少的微生物，由于提取的DNA量有限，無法在電泳上分離。

根據鑒定結果，分析各個條帶所代表的菌的類群。根據分析結果按照門（phylum），綱（class），目（order）對腸道菌群進行歸類，得到腸道菌群主要類群的相對豐度值分布如圖5。

從圖5可以看出，各組大鼠腸道菌群主要由擬桿菌門（Bacteroidetes）、厚壁菌門（Firmicutes）和變形菌門（Proteobacteria）三個門構成，與Hildebrandt等［10］的研究比較，缺少柔膜菌門（Tenericutes）。各組大鼠的腸道菌群以厚壁菌門所占比例最多，且其中梭狀芽胞桿菌綱（Bacillales）所占比例最大，其次為乳桿菌目（Lactobacillales）和芽孢桿菌目（Bacillales）。

圖5 大鼠腸道菌群主要細菌類群的相對豐度分析Fig.5 Relative content of main bacteria groups in gut microflora of rats

對厚壁菌門和擬桿菌門的微生物相對豐度進行比較結果見圖6.由圖6可以發(fā)現，與模型組相比，正常組、陽性對照組、高劑量組厚壁菌門細菌含量顯著降低；正常組、陽性對照組、高劑量組擬桿菌門含量顯著增加，且以陽性對照組最好；厚壁菌門與擬桿菌門比值各組與模型組相比都有顯著降低。

圖6 各組大鼠腸道菌群中厚壁菌門和擬桿菌門相對豐度的比較Fig.6 Comparison of Firmicutes and Bacteroidetes and their ratio in gut microflora of different rat groups

2.4 RT-PCR定量

根據DGGE條帶計算微生物相對豐度值，受到微生物16S rRNA序列擴增效率的干擾，結果有一定的失真。因此，采用實時熒光定量PCR（RTPCR）對腸道中比較重要的3個微生物類群乳酸菌（lactic acid bacteria）、擬桿菌（Bacteriodes spp.）、柔嫩梭菌（Clostridium leptum）進行定量，結果如圖7。

圖7 葡萄籽原花青素對營養(yǎng)肥胖大鼠腸道乳酸菌、擬桿菌、柔嫩梭菌豐度的影響Fig.7 Effects of GSP on the content of lactic acid bacteria，Bacteriodes and Clostridium leptum in gut microflora of DIO rats

由圖7可見，各組大鼠腸道菌群中乳酸菌豐度無顯著區(qū)別，提示低聚果糖、原花青素對乳酸菌豐度無顯著影響，可能與乳酸菌在腸道中豐度本來就很低有關；原花青素高劑量組擬桿菌豐度顯著高于模型組，達到與正常組無顯著區(qū)別水平，低聚果糖亦有類似效果，說明高劑量原花青素可以促進擬桿菌增殖，達到與正常大鼠相同的水平；低劑量原花青素組柔嫩梭菌豐度顯著低于模型組，而其他各組無顯著區(qū)別。

擬桿菌也稱類桿菌，是厭氧、糖發(fā)酵、有膽汁抗性且不形成孢子的革蘭氏陰性桿菌，是人體腸道內菌群數量最大的微生物之一，大約占腸道內細菌細胞總數的25%以上。擬桿菌具有參與人體的營養(yǎng)吸收以及維持腸道的正常生理的作用。擬桿菌可以吸收和降解膳食中人體不能夠降解的多種植物多糖，參與脂肪代謝，調節(jié)細菌毒素的產生與增強宿主固有的免疫反應等，有研究表明，擬桿菌豐度的增加可能有益健康，柔嫩梭菌與某些疾病，如結腸癌，潰瘍性結腸炎有關，其豐度的減少可能會有助于人體健康［12］。由本實驗結果可以得出，葡萄籽原花青素和低聚果糖能夠提高機體腸道中擬桿菌的豐度，降低柔嫩梭菌的豐度，具有調整腸道菌群的作用。

3 結 論

近年研究表明，腸道菌群異常可能是肥胖發(fā)生的原因［13］。長期的高脂膳食會導致腸道菌群微生態(tài)環(huán)境的紊亂，腸道通透性異常增加，內毒素、鞭毛蛋白等外界抗原透過腸道壁進入血液，導致慢性炎癥反應，誘發(fā)肥胖，糖尿病等慢性代謝性疾?。?4-15］。本研究表明，即使灌胃期間仍然給予高脂膳食，和對照組相比，葡萄籽原花青素也顯著抑制大鼠體重的增長。抑制效果以低劑量組原花青素最佳，說明原花青素可能不是通過抑制相關消化酶類，從而抑制營養(yǎng)物質吸收來抑制體重增長。原花青素可能通過改善腸道菌群結構，修復腸道通透性，從而抑制腸道內毒素進入血液誘發(fā)炎癥反應來抑制肥胖發(fā)生。

對腸道菌群結構的分析部分證實了原花青素通過腸道菌群抑制肥胖的假設，低劑量原花青素能使大鼠腸道菌群結構遠離模型組；DGGE的分析結果表明，腸道中各種微生物的相對豐度發(fā)生了顯著變化。從門的水平來看，高脂膳食喂食的肥胖大鼠腸道菌群中厚壁菌門所占的比例更高，擬桿菌門所占的比例相對較少。葡萄籽原花青素和低聚果糖都能夠有效降低營養(yǎng)肥胖型大鼠腸道菌群中厚壁菌門的量，增加擬桿菌門的量，提高F/B比值，說明葡萄籽原花青素能夠改善肥胖模型大鼠腸道菌群結構。RT-PCR定量研究也發(fā)現，原花青素可以促進有益的擬桿菌增殖，抑制有害的柔嫩梭菌增殖，對優(yōu)勢菌群具有顯著的調節(jié)作用。

肥胖與腸道菌群中的擬桿菌門和厚壁菌門豐度密切相關，它們能夠影響腸道菌群的代謝能力［16-17］。Ley等［11］研究發(fā)現肥胖小鼠中厚壁菌門比例增加，擬桿菌門比例降低，比值增加。人體試驗也表明，體質指數的下降伴隨著腸道擬桿菌門細菌的豐度逐漸升高［16-17］。本研究與Ley等的結果一致，揭示原花青素可能通過降低厚壁菌門，增加擬桿菌門微生物含量，起到減肥效果。

本研究受限于變性梯度凝膠電泳技術本身的精度，無法對腸道中豐富的微生物類群進行深度分析，因此，接下來將采用宏基因組測序技術等，考察原花青素對腸道菌群的具體影響。

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Effect of Grape Seed Proanthocyanidins on Gut Microbiota of Diet-Induced-Obesity Rats

SONG Xuelin1， LI Yamei1， XIAO Junsong1，*， WU Hua2， CAO Yanping1
（1.Beijing Key Laboratory of Food Flavor Chemistry/Beijing Engineering and Technology Research Center of Food Additives/Beijing Laboratory for Food Quality and Safety，Beijing Technology and Business University，Beijing 100048，China；2.College of Life Sciences，Jianghan University，Wuhan 430070，China）

Wistar rats were fed with high fat diet to induce the diet-induced obesity model（DIO），and then gavaged with grape seed proanthocyanidins（GSP）of different doses.Culture-independent methods such as denaturing gradient gel electrophoresis（DGGE）and real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction（real-time PCR）were applied，coupled with multivariate analysis，to explore the effect of GSP on the microbiota of DIO rats.Results showed that GSP treatment（100 mg/（kg·bw·d））could inhibit high-fat induced obesity，and its gut microbiota profile was separated from that of the model group. Results also suggested that GSP-treated groups had the lower Firmicutes content and higher Bacteroidetes

content and the ratio of Firmicutes to Bacteroidetes increased in this group.Real-time-PCR results indicated that GSP promoted the proliferation of Bacteriodes spp.and inhibited that of Clostridium leptum.The key genera the GSP might have an effect on were as follows：Blautia，Bacteroides，Lactobacillus，Anaerostipes，Clostridium，Anaerofilum.

grape seed proanthocyanidins；obesity；gut microbiota；denaturing gradient gel electrophoresis；real time-PCR

葉紅波）

TS201.3

A

10.3969/j.issn.2095-6002.2015.05.007

2095-6002（2015）05-0039-08

宋雪琳，李雅梅，肖俊松，等.葡萄籽原花青素對營養(yǎng)肥胖模型大鼠腸道菌群的影響［J］.食品科學技術學報，2015，33（5）：39-46.

SONG Xuelin，LI Yamei，XIAO Junsong，et al.Effect of grape seed proanthocyanidins on gut microbiota of diet-inducedobesity rats［J］.Journal of Food Science and Technology，2015，33（5）：39-46.

2015-01-11

國家自然科學基金資助項目（31201323）；“十二五”國家科技支撐計劃項目（2011BAD23B02）；北京市屬高等學校高層次人才引進與培養(yǎng)計劃項目（0142132014）。

宋雪琳，女，碩士研究生，研究方向為功能食品；*肖俊松，男，副教授，博士，主要從事功能食品方面的研究。通信作者。