趙文珠，居文政，2**，臧雨馨，孫冰婷，談恒山，蔣志濤

1南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南京 210029；2南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床藥理科，南京 210029；3南京軍區(qū)總醫(yī)院，南京 210002；4張家港市中醫(yī)醫(yī)院，張家港 215600

毛冬青膠囊對大鼠體內(nèi)細(xì)胞色素P450代謝活性的影響*

趙文珠1，居文政1，2**，臧雨馨1，孫冰婷1，談恒山3，蔣志濤4

1南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南京 210029；2南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床藥理科，南京 210029；3南京軍區(qū)總醫(yī)院，南京 210002；4張家港市中醫(yī)醫(yī)院，張家港 215600

目的：采用Cocktail探針?biāo)幬锓ㄑ芯棵嗄z囊對大鼠CYP1A2、CYP3A2、CYP2C6、CYP2D1、CYP2D2和CYP2E1體內(nèi)代謝活性的影響。方法：分別以茶堿、咪達(dá)唑侖、甲苯磺丁脲、奧美拉唑、右美沙芬和氯唑沙宗作為探針底物，將大鼠隨機(jī)分為3組：空白對照組、毛冬青的低劑量組和高劑量組。低、高劑量組每日分別灌胃給予毛冬青膠囊1.8、3.6 g·kg-1，空白對照組每日給予與低劑量組等體積的生理鹽水，各組均為1次/天，連續(xù)14 d。各組分別于第15天給予Cocktail探針?biāo)幬铮诮o藥前、后不同時(shí)間點(diǎn)取血，用LC-MS/MS檢測各探針?biāo)幬锏难帩舛?，?jì)算藥代動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果：茶堿低劑量組cmax、AUC0-t有極顯著差異（P≤0.01）；甲苯磺丁脲高劑量組和氯唑沙宗低劑量組AUC0-t有顯著差異（P≤0.05）；其他無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論：毛冬青膠囊對大鼠體內(nèi)CYP2C6和CYP1A2有強(qiáng)誘導(dǎo)作用，對CYP2E1有中強(qiáng)誘導(dǎo)作用，其他亞型基本無影響。

Cocktail探針法；CYP1A2；CYP3A2；CYP2C6；CYP2D1；CYP2D2；CYP2E1；毛冬青膠囊

毛冬青為冬青科（Aquifoliaceae）冬青屬植物毛冬青（Ilex pubescens Hook.et Arn.）的干燥根，主產(chǎn)于我國廣東、廣西、福建、江西等地，性寒，味苦、澀，入心、肝經(jīng)，富含黃酮、香豆素及三萜皂苷等多種化學(xué)成分。毛冬青具有清熱解毒、活血通絡(luò)功效，臨床用于冠心病、心絞痛及脈管炎等疾病的治療[1]。臨床上毛冬青膠囊與其他藥物聯(lián)合使用時(shí)，容易產(chǎn)生藥物相互作用，據(jù)統(tǒng)計(jì)，藥物相互作用約40%是由藥物代謝引起[2]。藥物對代謝酶的誘導(dǎo)或抑制，影響藥物代謝過程，其中細(xì)胞色素P450氧化酶系（cy-tochromap450s，CYP）起主導(dǎo)作用。本實(shí)驗(yàn)選擇茶堿、甲苯磺丁脲、奧美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗和咪達(dá)唑侖作為 CYP1A2、CYP2C6、CYP2C11、CYP2D2、CYP2E1和CYP3A2的特異性探針?biāo)幬?，同時(shí)測定毛冬青膠囊對CYP450酶6種主要亞型酶活性的影響。

1 材料

1.1 藥品與試劑

毛冬青膠囊（規(guī)格0.45 g/粒，批號130804，廣東和平藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）；咪達(dá)唑侖注射液（規(guī)格10 mg/mL/支，批號20130922，江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)）；奧美拉唑腸溶膠囊（規(guī)格20 mg/粒，批號060120932，石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）；咪達(dá)唑侖對照品（批號171250-200401）、奧美拉唑?qū)φ掌罚ㄅ?00367-201104）、吡羅昔康對照品（批號100177-200603）、替硝唑?qū)φ掌?（批號100336-200402），均為中國藥品生物制品檢定所提供；甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、茶堿、右美沙芬對照品（批號依次為：017K1025、017K1385、T1633、097K11348），均購自美國Sigma公司；肝素鈉注射液（規(guī)格1.25萬U/2 mL/支，批號110818，常州千紅生化制藥股份有限公司）。實(shí)驗(yàn)用水為超純水；除甲醇、乙腈為色譜純，其余均為分析純。

1.2 儀器

液質(zhì)聯(lián)用儀Waters Quattro Micro；色譜工作站Masslynx 4.0；電子天平Sartorius CPA225D；微型旋渦混合儀WH-2；Micro-17R型冷凍離心機(jī)；Drict-Q5型超純水機(jī)；KQ3200型超聲波清洗器。

1.3 動物

大鼠24只，雌雄各半，體重（250±20）g，由江蘇省中醫(yī)院藥理實(shí)驗(yàn)室提供，合格證號為scxk-（蘇）2014-0001。

2 方 法

2.1 溶液配制及動物給藥方法

2.1.1 毛冬青溶液的配制 稱取毛冬青膠囊內(nèi)容物11．25 g，研磨均勻，50 mL生理鹽水邊加邊研，直至全部溶解，即得濃度為0．225g·mL-1的毛冬青溶液。

2.1.2 動物給藥方法 24只大鼠隨機(jī)分為3組：空白對照組、實(shí)驗(yàn)低劑量組和實(shí)驗(yàn)高劑量組，每組8只。低、高劑量組每日分別灌胃給予毛冬青溶液2 mL、4 mL?？瞻讓φ战M每日給予與實(shí)驗(yàn)組等體積的生理鹽水。各組均為每日一次，連續(xù)14 d。第15天各組大鼠均灌胃給予Cocktail探針?biāo)幬锶芤?（茶堿33．8 mg·kg-1、甲苯磺丁脲24．6 mg·kg-1、奧美拉唑43 mg·kg-1、右美沙芬33．8 mg·kg-1、氯唑沙宗33．8 mg· kg-1、咪達(dá)唑侖19．2 mg·kg-1）。分別于給藥前及給藥后 5、10、20、40 min和 1、1．5、2、2．5、3、5、8、12、24 h眼眶取血0．3 mL至肝素化離心管中，3000 r·min-1離心10 min，分離血漿，于-20℃冰箱冷凍待測。

2.2 色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18（2．1 mm×150 mm，5 μm）；保護(hù)柱：Agilent Eclipase XDB2-C8（2．1 mm× 12．5 mm，5 μm）；流動相：乙腈-（0．1%甲酸-4 mmol· L-1甲酸銨）=75∶25；流速：0．2 mL·min-1；進(jìn)樣量：5 μL。

2.3 質(zhì)譜條件

離子化方式：電噴霧（ESI），正負(fù)離子同時(shí)檢測，多反應(yīng)監(jiān)測。檢測電壓：3．5 kV，離子源溫度：120℃，脫溶劑溫度：350℃，脫溶劑氣體流速:450 L·h-1。各分析物的檢測離子、質(zhì)核比、錐孔電壓、碰撞能量見表1。

2.4 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及質(zhì)控溶液的配制

2.4.1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密稱取茶堿、咪達(dá)唑侖、甲苯磺丁脲、奧美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗各對照品適量，乙腈溶解并定容，即得各對照品儲備液，濃度分別為：1．113、1．00、1．172、1．407、1．151、1．171 mg·mL-1。另精密吸取各對照品儲備液適量，用75%的乙腈配制混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，并倍比稀釋為7個(gè)不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，于4℃冰箱冷藏備用。

2.4.2 質(zhì)控溶液的配制 精密吸取各對照品儲備液適量，用75%的乙腈依次配制高、中、低3種不同質(zhì)量濃度的質(zhì)控溶液，于4℃冰箱冷藏備用。

表1 內(nèi)標(biāo)和探針?biāo)幬锏馁|(zhì)譜參數(shù)

2.4.3 內(nèi)標(biāo)溶液的配制 精密稱取替硝唑、吡羅昔康各對照品適量，分別置于10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻即得各對照品儲備液。另精密吸取各對照品儲備液適量于同一10 mL量瓶中，以75%的乙腈定容至刻度，搖勻，即得替硝唑和吡羅昔康混合內(nèi)標(biāo)溶液，濃度分別為10．21、26．79 μg·mL-1，于4℃冰箱冷藏備用。

2.5 血漿樣品處理方法

精密吸取含藥血漿樣品50 μL，依次加入內(nèi)標(biāo)工作液 （替硝唑10．21 μg·mL-1和吡羅昔康26．79 μg·mL-1）10 μL、75%的乙腈10 μL，渦旋30 s，再加入乙酸乙酯400 μL，渦旋3 min，12000 r·min-1離心10 min。吸取上清液350 μL，氮?dú)饬鞔蹈桑?0℃）。50 μL 75%的乙腈復(fù)溶，12000 r·min-1離心5 min，吸取上清液5 μL，進(jìn)樣分析。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

精密吸取空白血漿50 μL，依次加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)混合工作液10 μL、內(nèi)標(biāo)工作液（替硝唑10．21 μg· mL-1和吡羅昔康26．79 μg·mL-1）10 μL，渦旋30 s，再加入乙酸乙酯400 μL，渦旋3 min，12000 r·min-1離心10min。吸取上清液350μL，氮?dú)饬鞔蹈桑?0℃）。以 75%的乙腈 50 μL復(fù)溶，12000 r·min-1離心 5 min，吸取上清液，進(jìn)樣分析。

2.7 數(shù)據(jù)處理

藥動學(xué)參數(shù)采用DAS 1．0軟件計(jì)算，用SPSS 11．5統(tǒng)計(jì)給藥前后各探針?biāo)巹訉W(xué)參數(shù)的差異，采用單因素方差分析。P＜0．05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 色譜行為

在上述色譜條件下，替硝唑、吡羅昔康、咪達(dá)唑侖、奧美拉唑、右美沙芬、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗及茶堿的保留時(shí)間依次為：2．07、2．62、3．28、2．27、3．01、2．49、2．36、1．99 min。結(jié)果表明，各分析物間分離良好，且無血中內(nèi)源性雜質(zhì)干擾，基線平穩(wěn)（見圖1）。該測定方法特異性好，能準(zhǔn)確測定血漿中6個(gè)探針?biāo)幬锏臐舛?，且重現(xiàn)性好。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

取空白血漿50 μL，加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液10 μL、混合內(nèi)標(biāo)10 μL，按照大鼠空白“血漿樣品處理方法”操作，分別計(jì)算各成分的峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)的峰面積的比值為Y，以比值Y對探針?biāo)幬锏臐舛菴作線性回歸，得回歸方程，見表2。

表2 6種探針?biāo)幬锘貧w方程與線性關(guān)系

3.3 精密度及準(zhǔn)確度

取空白血漿50 μL，分別加入高、中、低三個(gè)濃度質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)液10 μL，每個(gè)濃度平行5份，按“血漿樣品處理方法”操作，進(jìn)樣分析，根據(jù)隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各分析物濃度，日內(nèi)重復(fù)測定5次，日間平行測定3天。結(jié)果（見表3）日內(nèi)、日間精密度均小于10%，準(zhǔn)確度在86%～100%。

表3 6種探針的精密度與準(zhǔn)確度

3.4 提取回收率[3]

取大鼠空白血漿50 μL，配制高、中、低3個(gè)不同濃度含藥血漿質(zhì)控樣品，按“血漿樣品處理方法”處理樣品，記錄分析物峰面積Ax。另以流動相配制相同進(jìn)樣濃度的含藥溶液，記錄分析物峰面積As，提取回收率R（%）=Ax/As×100%×（8/7）。結(jié)果表明：咪達(dá)唑侖、奧美拉唑、右美沙芬、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、茶堿、替硝唑和吡羅昔康的提取回收率依次為 79．91%～87．13%、80．46%～90．88%、84．72%～96．54%、76．59%～97．68%、87．47%～93．87%、90．82%～97．09%、78．61%、74．79%。

3.5 基質(zhì)效應(yīng)[4]

取大鼠空白血漿，加乙酸乙酯，渦旋，離心，獲得空白血漿洗脫液若干。分別精密吸取高、中、低質(zhì)控工作液各10 μL，向其中分別依次加入內(nèi)標(biāo)工作液10 μL、空白血漿洗脫液30 μL，渦旋混勻，進(jìn)樣分析。每個(gè)濃度平行3個(gè)樣本。記錄各探針?biāo)幬锿粷舛鹊暮退袧舛葍?nèi)標(biāo)藥物的

分別精密吸取高、中、低質(zhì)控工作液各10 μL，向其中分別依次加入內(nèi)標(biāo)工作液10 μL、乙腈30μL，渦旋混勻，進(jìn)樣分析。每個(gè)濃度平行3個(gè)樣本。記錄各探針?biāo)幬锿粷舛鹊暮退袧舛葍?nèi)標(biāo)藥物的

結(jié)果表明：咪達(dá)唑侖、奧美拉唑、右美沙芬、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、茶堿、替硝唑和吡羅昔康的介質(zhì)效應(yīng)分別為88．14%～89．77%、88．60%～91．09%、87．65%～89．96%、88．40%～89．92%、88．87%～90．16%、88．20%～91．33%、90．52%、90．31%。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

考察6種探針?biāo)幬锏臉?biāo)準(zhǔn)品及含藥血漿在不同條件下保存的穩(wěn)定性。標(biāo)準(zhǔn)品在4℃冰箱保存2個(gè)月以上仍穩(wěn)定，含藥血漿置于-20℃冰箱冷凍保存一個(gè)月及反復(fù)凍融3次均穩(wěn)定，血漿樣品室溫避光保存24 h穩(wěn)定。

3.7 藥動學(xué)參數(shù)

3.7.1 6種探針?biāo)幬锏乃?時(shí)曲線圖 大鼠連續(xù)給予不同劑量毛冬青膠囊14天后灌胃Cocktail探針?biāo)幬锱c空白對照組直接灌胃Cocktail探針?biāo)幬?，按血漿樣品處理方法操作，得6種探針?biāo)幬锏乃?時(shí)曲線圖，見圖2。

圖2 6種探針?biāo)幬锏乃?時(shí)曲線圖

3.7.2 各組大鼠的藥動學(xué)數(shù)據(jù) 采用DAS 1．0軟件處理各組大鼠藥動學(xué)數(shù)據(jù)，結(jié)果如下：奧美拉唑和右美沙芬符合一室模型（W=1），茶堿、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲符合一室模型（W=1/CC），咪達(dá)唑侖符合二室模型 （W=1）。6種探針?biāo)幬锏淖畲笱帩舛龋╟max）、藥時(shí)曲線下面積（AUC）、半衰期（t1/2）、表觀分布容積（Vd/F）、總清除率（CL/F）、達(dá)峰時(shí)間（tmax）等參數(shù)，見表4。

由表4可知，咪達(dá)唑侖：高劑量組與空白組間t1/2存在顯著差異（P≤0．05）；甲苯磺丁脲：高劑量和空白組對比，cmax（P≤0．01）和AUC（P≤0．05）存在顯著差異，低、高劑量組對比，cmax存在顯著差異 （P≤0．05）；氯唑沙宗：低、高劑量組間AUC存在顯著差異（P≤0．05）；茶堿：低劑量組與空白、高劑量組間AUC及cmax均存在顯著差異（P≤0．01）。

4 討 論

細(xì)胞色素P450酶系是一組由結(jié)構(gòu)和功能相關(guān)的超家族基因編碼的含鐵血紅素同工酶，CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和 CYP3A4是其主要亞型，參與體內(nèi)大多數(shù)藥物代謝[5]。大鼠的2C6[6-7]、2D1[7]、2D2[7]、3A2[6，8]分別對應(yīng)人的 2C9[9]、2C19、2D6、3A4[7，10-11]。應(yīng)用Cocktail法首先需排除聯(lián)合使用探針底物間是否存在體內(nèi)的代謝性相互作用；其次必須確保每種探針底物選擇性地作用于某一種酶[12-13]。本實(shí)驗(yàn)采用空白對照的方法，排除了眼眶取血刺激對試驗(yàn)大鼠代謝可能造成的影響。并參考文獻(xiàn)[11，14]，排除了實(shí)驗(yàn)所選6種探針底物潛在的體內(nèi)代謝性相互作用，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基本符合Cocktail法的條件。

實(shí)驗(yàn)初期分別考察了甲醇、乙腈、甲酸、甲酸銨和乙酸銨在不同配比及用量時(shí)，對分析物色譜峰的影響，發(fā)現(xiàn)75%乙腈和0．1%甲酸-4 mmol·L-1甲酸銨為流動相，比例為75∶25時(shí)響應(yīng)及峰形最佳。

由表4可知，連續(xù)給予毛冬青膠囊14天后，甲苯磺丁脲：與空白組對比，低劑量組AUC降低約18%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，高劑量組cmax和AUC依次降低約81%、79%，存在極顯著差異（P≤0．01）；與低劑量組對比，高劑量組cmax降低約80%，存在顯著差異（P≤0．05）。氯唑沙宗：與低劑量組對比，高劑量組AUC升高約2．48倍，存在顯著差異 （P≤0．05）；空白、高劑量組比較，MRT存在極顯著差異 （P≤0．01），其余參數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。茶堿：低劑量組與空白組對比，tmax升高約1．29倍，cmax和AUC依次降低約52%、67%，統(tǒng)計(jì)學(xué)顯示cmax和AUC存在極顯著差異（P≤0．01）；高劑量組與低劑量組對比，cmax升高約88%，AUC升高約3．06倍，存在極顯著差異（P≤0．01）。咪達(dá)唑侖：與空白組對比，低劑量組t1/2β和tmax升高，AUC降低40%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0．05），高劑量組t1/2β升高，cmax降低67%、AUC降低70%，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，t1/2β存在顯著差異（P≤0．05），其他參數(shù)無顯著差異（P＞0．05），這與咪達(dá)唑侖高劑量組的藥-時(shí)曲線圖不符，產(chǎn)生原因可能與雌雄大鼠個(gè)體間差異較大有關(guān)。另外，有文獻(xiàn)報(bào)道[15]咪達(dá)唑侖個(gè)體間變異較大。奧美拉唑：高劑量組對比空白組，AUC降低約74%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。右美沙芬：與空白組對比，低、高劑量組t1/2α、tmax、cmax升高，AUC降低，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表4 毛冬青膠囊不同給藥組，各探針?biāo)幹饕巹恿W(xué)參數(shù)（±s，n=8）

表4 毛冬青膠囊不同給藥組，各探針?biāo)幹饕巹恿W(xué)參數(shù)（±s，n=8）

經(jīng)單因素方差分析，三組間兩兩對比，與空白組對比結(jié)果標(biāo)記為：*P≤0.05、**P≤0.01；與低劑量組對比結(jié)果標(biāo)記為：△P≤0.05、△△P≤0.01。

探針參數(shù)空白組低劑量組高劑量組探針參數(shù)空白組低劑量組高劑量組t1/2β/h 1.67±0.63 4.03±1.72 3.76±1.49*t1/2β/h 10.32±5.16 13.52±7.16 9.16±6.99 tmax/h 0.87±0.83 3.3±2.68 0.34±0.32 tmax/h 2.75±0.48 4.14±2.90 2.75±0.29 Vd/F，L·kg-115.85±3.65 14.95±10.53 175.36±165.58 Vd/F，L·kg-10.31±0.16 0.17±0.04 0.79±0.20咪達(dá)唑侖CL/F，L·h-1·kg-119.87±3.59 19.13±15.65 18.41±17.19 CL/F，L·h-1·kg-10.03±0.01 0.03±0.01 0.06±0.02 cmax，mg·L-12.10±1.67 1.82±1.58 0.69±0.54 cmax，mg·L-187.46±35.30 79.76±20.08 16.30±1.04**△AUC0-t，mg·L-1·h 9.64±8.30 5.78±5.32 2.87±2.11 AUC0-t，mg·L-1·h 1321.98±679.90 1086.15±462.50 283.69±0.72*甲苯磺丁脲AUC0-∞，mg·L-1·h 9.66±8.30 5.81±5.31 2.88±2.11 AUC0-∞，mg·L-1·h 2426.82±1940.72 1835.88±1164.95 399.58±0.69*MRT0-t/h 2.02±0.70 3.43±1.86 3.76±1.20**△MRT0-t/h 9.80±0.90 9.11±2.25 5.9±2.9**△MRT0-∞/h 2.15±0.60 3.61±2.06 4.09±1.20**△MRT0-∞/h 23.75±14.70 22.35±14.25 9.02±2.18**△t1/2β/h 0.99±0.65 1.01±0.74 0.34±0.20 t1/2β/h 0.69±0.20 0.71±0.40 1.55±0.55 tmax/h 0.25±0.09 0.20±0.19 0.14±0.04 tmax/h 0.25±0.09 0.23±0.20 0.30±0.17 Vd/F，L·kg-18.61±0.04 9.27±0.07 14.69±1.19 Vd/F，L·kg-11.49±0.07 76.86±5.70 2.21±0.11奧美拉唑CL/F，L·h-1·kg-16.03±0.04 6.36±0.07 29.95±4.13 CL/F，L·h-1·kg-11.5±0.23 75.02±9.87 0.99±0.14 cmax，mg·L-14.62±2.29 4.33±2.47 3.32±1.32 cmax，mg·L-119.83±12.43 7.06±5.73 8.86±1.48 AUC0-t，mg·L-1·h 8.42±5.44 9.52±4.34 2.14±1.50氯唑沙宗AUC0-t，mg·L-1·h 22.35±17.70 5.36±4.53 18.67±6.36△AUC0-∞，mg·L-1·h 8.45±5.44 9.53±4.34 2.17±1.49 AUC0-∞，mg·L-1·h 22.36±17.70 5.36±4.53 19.66±6.89△MRT0-t/h 1.45±0.48 2.53±1.60 1.91±0.52 MRT0-t/h 1.33±0.53 2.79±1.41 3.09±0.84**MRT0-∞/h 1.51±0.53 2.57±1.61 2.87±1.98 MRT0-∞/h 2.67±2.64 3.41±1.74 4.53±2.59**t1/2β/h 2.36±1.99 5.33±2.76 4.68±2.06 t1/2β/h 3.20±2.03 3.06±1.23 3.50±2.37 tmax/h 1.71±0.67 2.79±1.92 2.36±0.87 tmax/h 1.40±0.88 3.21±2.46 3.31±1.16 Vd/F，L·kg-11.63±0.48 0.50±0.11 0.73±0.23 Vd/F，L·kg-10.75±0.44 0.88±0.02 0.99±0.0007右美沙芬CL/F，L·h-1·kg-113.97±4.21 16.29±5.33 16.49±5.04 CL/F，L·h-1·kg-10.17±0.03 0.44±0.02 0.17±0.02 cmax，mg·L-10.53±0.47 0.90±1.59 0.92±0.27 cmax，mg·L-125.12±8.30 12.08±4.46**22.67±4.71△△AUC0-t，mg·L-1·h 3.96±3.43 2.29±1.83 2.51±2.07茶堿AUC0-t，mg·L-1·h 171.12±87.18 57.26±37.20**232.71±57.72△△AUC0-∞，mg·L-1·h 3.97±3.43 2.30±1.83 2.51±2.06 AUC0-∞，mg·L-1·h 178.57±101.41 60.39±36.14**242.24±66.34△△MRT0-t/h 3.24±1.20 4.38±3.56 5.10±0.44 MRT0-t/h 6.22±0.89 5.52±1.16 7.02±0.99△△MRT0-∞/h 3.33±1.15 4.43±3.62 5.70±2.03 MRT0-∞/h 6.77±1.70 6.55±1.17 7.95±2.23△△

綜上分析，毛冬青膠囊連續(xù)給予14 d后，甲苯磺丁脲和氯唑沙宗在大鼠體內(nèi)濃度降低，代謝迅速，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，毛冬青膠囊對CYP2C6有強(qiáng)誘導(dǎo)作用，對CYP2E1有中強(qiáng)誘導(dǎo)作用，毛冬青中劑量時(shí)對CYP1A2有強(qiáng)誘導(dǎo)作用，而高劑量時(shí)對CYP1A2有弱抑制作用。奧美拉唑和右美沙芬的代謝變化不明顯，表明對CYP2D1和CYP2D2基本沒有影響。咪達(dá)唑侖的代謝變化由于統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果與DAS1.0分析結(jié)果存在差異，需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。此外，和凡等[4]考察了復(fù)方毛冬青顆粒（成分毛冬青、大青葉和南板藍(lán)根）對CYP450酶的誘導(dǎo)作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該藥對CYP1A2和CYP2E1具有誘導(dǎo)作用，且呈劑量依賴性。與本實(shí)驗(yàn)對比，相同之處：毛冬青對CYP1A2和CYP2E1酶具有誘導(dǎo)作用；不同之處：本實(shí)驗(yàn)毛冬青對CYP1A2和CYP2E1酶的作用不呈劑量依賴性，同時(shí)發(fā)現(xiàn)毛冬青對CYP2C6也具有誘導(dǎo)作用。由于兩個(gè)實(shí)驗(yàn)一個(gè)體內(nèi)，一個(gè)體外，且選用的探針底物及動物性別不完全相同，所以結(jié)果可能會有差異。

根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提示臨床聯(lián)合用藥中，毛冬青膠囊與CYP2C6、CYP1A2和CYP2E1酶的底物藥物合用時(shí)需調(diào)整劑量，避免產(chǎn)生毒副作用或藥效降低。由于人與大鼠存在種族差異，所以在臨床用藥時(shí)還需進(jìn)一步臨床驗(yàn)證。

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Influence of Maodongqing Capsules on Metabolic Activities of Cytochrome P450 Enzymes in Rats

ZHAO Wen-zhu1,JU Wen-zheng1,2,ZANG Yu-xin1,SUN Bing-ting1,TAN Heng-shan3,JIANG Zhi-tao4
1College of Pharmacy,Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210029;2Department of Clinical Pharmacology,the Affiliated Hospital of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nan-jing 210029;3General Hospital of Nanjing Military Command,Nanjing 210002;4Zhangjiagang Hospital of Traditional Chinese Medicine,Zhangjiagang 215600

Objective:To study the influence of Maodongqing Capsules on metabolic activities of CYP1A2,CYP3A2,CYP2C6,CYP2D1,CYP2D2 and CYP2E1 by Cocktail probe drugs in rats.Methods:Theophylline,midazolam,tolbutamide,omeprazole,dextromethorphan and chlorzoxazone were used as the probe drugs of cytochrome P450s.The rats were randomly divided into three groups:control group,low group and high group.Maodongqing capsules were orally given to rats of the low and high groups once a day with the dose of 0.45 g and 0.9 g per rat,respectively.The control group and the low group administered equal volume of saline,each group was once a day,for 14 days.Cocktail probe drugs in each group were given in the 15th day,the plasma samples were taken at different time before and after the probe drugs.The plasma concentrations of probe drugs were determined by LC-MS/MS and their corresponding pharmacokinetic parameters were calculated.Results:The cmaxand AUC0-tof theophylline in the low group were significantly different (P≤0.01);the AUC0-tof tolbutamide in the high group was significantly different (P≤0.01);the AUC0-tof chlorzoxazone in the low group was significantly different (P≤0.05);while no other significantly different activities were found.Conclusion:Maodongqing capsules had a significant induction to CYP2C6 and CYP1A2 in rats,a moderate induction to CYP2E1 in rats, while no significant influence on the other subtypes.

Cocktailprobe drugs;CYP1A2;CYP3A2;CYP2C6;CYP2D1;CYP2D2;CYP2E1; Maodongqing capsule

R965

A

1673-7806（2015）03-217-06

江蘇省中醫(yī)藥領(lǐng)軍人才項(xiàng)目（No.LJ200906）；江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目2010；中藥新藥臨床評價(jià)研究技術(shù)平臺（南京）建設(shè)（No.2012ZX09303009-002）重大新藥創(chuàng)新

趙文珠，女，碩士，研究方向：中藥學(xué)E-mail:zhaowenzhu0604@126.com

**通訊作者居文政，男，主任藥師，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥臨床藥物代謝動力學(xué) E-mail:wzhju333@163.com

2014-12-03

2015-03-05