周法東，張　瑋，李利元，盧曉宇，李　強(qiáng)

(1.滄州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，河北 滄州　061000； 2.河北省環(huán)境監(jiān)測(cè)中心站，河北 石家莊　050051；

3.北京出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心 北京　100026；4.河北省食品檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊　050091)

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高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定化妝品中2,4,6-三氯苯酚和五氯苯酚

周法東1，張瑋2，李利元1，盧曉宇3，李強(qiáng)4

(1.滄州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，河北 滄州061000； 2.河北省環(huán)境監(jiān)測(cè)中心站，河北 石家莊050051；

3.北京出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心 北京100026；4.河北省食品檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊050091)

摘要:本試驗(yàn)建立了化妝品(爽膚水和潤(rùn)膚乳)中禁用的含氯苯酚(2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚)的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法，采用Q1多離子監(jiān)測(cè)模式。1.0 g爽膚水和1.0 g潤(rùn)膚乳樣品經(jīng)10 mL正己烷超聲輔助提取后，取正己烷層45℃氮吹至近干，甲醇定容，經(jīng)液相色譜分離、質(zhì)譜測(cè)定，外標(biāo)法定量。2, 4, 6-三氯苯酚在添加水平200 μg/kg和800 μg/kg時(shí)，方法的回收率范圍為81.6%-94.5%，五氯苯酚在添加水平50 μg/kg和200 μg/kg時(shí)回收率范圍為65.3%-74.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于6%。爽膚水中2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的檢出限分別為20μg/kg和3μg/kg，定量限分別為50μg/kg和10μg/kg；潤(rùn)膚乳中2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的檢出限分別為30μg/kg和5μg/kg，定量限分別為100μg/kg和20μg/kg。該方法可用于爽膚水和潤(rùn)膚乳中2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的快速篩查和定量分析。

關(guān)鍵詞:化妝品；2, 4, 6-三氯苯酚；五氯苯酚；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

0引言

含氯苯酚(如2，4，6-三氯苯酚和五氯苯酚)常用于木材、紡織品、皮革中防腐劑。2，4，6-三氯苯酚和五氯苯酚可殘存于生物體內(nèi)并且富集，影響生長(zhǎng)發(fā)育，已經(jīng)被確定為環(huán)境類激素[1]。因?yàn)楹缺椒拥牧己玫臍⒕头栏Ч鼈円脖挥糜诨瘖y品中[2]，而我國(guó)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中明確規(guī)定2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚為禁用組分[3]。

目前，五氯苯酚的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法[4-6]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[7-12]、高效液相色譜法[2，13]。氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定五氯苯酚時(shí)前處理過(guò)程比較繁瑣，樣品提取后經(jīng)乙酸酐衍生化，衍生物經(jīng)電子捕獲檢測(cè)器或質(zhì)譜檢測(cè)器測(cè)定。液相色譜測(cè)定五氯苯酚時(shí)無(wú)須衍生，樣品經(jīng)液液提取后直接進(jìn)行測(cè)定。童成豹和張盼分別建立了液相色譜同位素稀釋質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定皮革及其制品和紡織品中五氯苯酚[14，15]。余宇燕建立了動(dòng)力學(xué)熒光法測(cè)定印染廢水中微量的2, 4, 6-三氯苯酚[1]，袁小雅等建立了固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定香蕉中咪鮮胺及2，4，6-三氯苯酚殘留量[16]。

該試驗(yàn)?zāi)康闹荚诮⑺w水和潤(rùn)膚乳中2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法。

1實(shí)驗(yàn)

1.1　儀器與試劑

Q-TRAP 6500液質(zhì)聯(lián)用儀(AB公司，美國(guó))，配有H-ESI源；UFLC液相色譜系統(tǒng)(島津公司，日本)； Sigma 3K13離心機(jī)(Sigma公司，德國(guó))；渦旋儀(IKA，德國(guó))。

甲醇(色譜純，美國(guó)Fisher Scientific 公司)；正己烷(分析純，北京化學(xué)試劑公司)； 2，4，6-三氯苯酚(純度≥98.5%，Supelco Analytical); 五氯苯酚(1 mg/mL，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中心)。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制：準(zhǔn)確稱取2, 4, 6-三氯苯酚10.0mg(精確至0.01mg)于10mL容量瓶中，以甲醇定容，配制成1000mg/L儲(chǔ)備溶液，于-20 ℃保存。用甲醇稀釋2, 4, 6-三氯苯酚儲(chǔ)備液和五氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成濃度為10μg/kg的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，4℃保存，備用。

1.2　樣品提取

分別稱取爽膚水、潤(rùn)膚乳樣品1.0g于50 mL離心管中，加入10mL正己烷，渦旋混勻后超聲輔助提取30 min；6000rpm離心5min，取正己烷層45℃氮吹至近干；用1mL甲醇溶液復(fù)溶，過(guò)0.22μm有機(jī)系濾膜，待測(cè)。

1.3　色譜-質(zhì)譜條件

1.3.1色譜條件

采用配有Phenomenex C18分析柱 (1.7μm, 100×2.1 mm)的超高效液相色譜系統(tǒng)分離分析物，甲醇/水(80/20，V/V)為流動(dòng)相，流速為0.25 mL/min，采用等度洗脫模式。進(jìn)樣量為2μL，分析時(shí)間為7 min。

1.3.2質(zhì)譜條件

離子源為電噴霧電離源(ESI)，源溫500℃；噴霧電壓-4500V；氣簾氣流速30L/min；輔助氣1(GS1)流速50L/min，輔助氣2(GS2)流速50L/min。采用Q1多離子監(jiān)測(cè)(Q1 MI)模式，監(jiān)測(cè)離子及質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1　監(jiān)測(cè)離子及質(zhì)譜參數(shù)

*定量離子

2結(jié)果與討論

2.1　質(zhì)譜條件的優(yōu)化

采用針泵直接注射方式進(jìn)行質(zhì)譜條件優(yōu)化，2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的全掃質(zhì)譜圖見圖1。2, 4, 6-三氯苯酚全掃質(zhì)譜圖可以看出 m/z 194.9、196.9、198.9峰響應(yīng)較高，其中m/z196.9、198.9為194.9的同位素峰。但是對(duì)m/z 194.9離子做二級(jí)掃描時(shí)，發(fā)現(xiàn)其打碎后子離子響應(yīng)比較低，因此選用Q1多離子監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行測(cè)定。其中m/z 194.9響應(yīng)最高，并且干擾比較小，因此選為定量離子，m/z196.9、198.9作為定性離子。對(duì)五氯苯酚做全掃，發(fā)現(xiàn)m/z 262.8、264.9、266.8、268.8響應(yīng)較高，但是響應(yīng)最好的m/z 264.9背景干擾比較大，因此選擇m/z 266.8為定量離子，m/z 262.8、268.8作為定性離子。

圖1　分析物全掃質(zhì)譜圖

2.2　色譜條件的優(yōu)化

為研究不同流相對(duì)分析物峰面積和峰型的影響，分別考察了流動(dòng)相為甲醇、甲醇/水(80/20，V/V)、甲醇/含0.1%甲酸的水溶液(80/20，V/V)、及甲醇/5mmol/L乙酸銨(80/20，V/V)時(shí)分析物出峰情況。結(jié)果表明100%甲醇為流動(dòng)相時(shí)，2, 4, 6-三氯苯酚的響應(yīng)最好，而且峰型對(duì)稱性比較好，但是五氯苯酚拖尾嚴(yán)重。流動(dòng)相為甲醇/水(80/20，V/V)時(shí)，2, 4, 6-三氯苯酚的響應(yīng)有所降低，但五氯苯酚的峰型得到很大改善。流動(dòng)相為甲醇/含0.1%甲酸的水溶液(80/20，V/V)、及甲醇/5mmol/L乙酸銨(80/20，V/V)時(shí)分析物的峰型稍微得到改善，響應(yīng)改善不大。最后及甲醇/5mmol/L乙酸銨(80/20，V/V)作為流動(dòng)相。

考察了Phenomenex C18分析柱 (1.7μm, 100×2.1 mm)和島津XR-ODS IIIC18分析柱 (1.6μm, 75×2.0 mm)對(duì)分析物的影響，結(jié)果表明用PhenomenexC18分析柱時(shí)分析物的峰型更好。因此選擇PhenomenexC18分析柱做后續(xù)試驗(yàn)。

在優(yōu)化好的色譜條件下，2, 4, 6-三氯苯酚的保留時(shí)間為1.9min，五氯苯酚的保留時(shí)間為5.4 min。2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的色譜質(zhì)譜圖見圖2。

圖2　分析物的色譜-質(zhì)譜圖

2.3　方法驗(yàn)證

2.3.1方法的線性范圍、檢出限和定量限

本試驗(yàn)采用外標(biāo)法定量，以定量離子的峰面積為縱坐標(biāo)(y)，以分析物的濃度(ng/mL)為橫坐標(biāo)(x)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2, 4, 6-三氯苯酚的線性方程為y=4.54e+004x+8.72e+005，在50-1000 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，線性相關(guān)系數(shù)為0.9993。五氯苯酚的線性方程為y=3.14e+006x+4.56e+005，在5-200 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，線性相關(guān)系數(shù)為0.9992。以信號(hào)/噪聲為3時(shí)分析物濃度為檢出限，以信號(hào)/噪聲為10時(shí)分析物濃度為定量限。爽膚水中2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的檢出限分別為20μg/kg和3μg/kg，定量限分別為50μg/kg和10μg/kg；潤(rùn)膚乳中2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的檢出限分別為30μg/kg和5μg/kg，定量限分別為100μg/kg和20μg/kg。

2.3.2方法的準(zhǔn)確度與精密度

方法的準(zhǔn)確度用回收率表示，2, 4, 6-三氯苯酚做200μg/kg和800μg/kg兩個(gè)水平添加，五氯苯酚做50μg/kg和200μg/kg兩個(gè)水平添加，每個(gè)水平5個(gè)重復(fù)。方法的精密度則用5次平行試驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)表示。2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的回收率范圍分別為81.6%-94.5%和65.3%-74.3%，RSD低于6%，回收率和精密度具體數(shù)據(jù)見表2。

2.3　實(shí)際樣品的測(cè)定

采用本方法，對(duì)當(dāng)?shù)爻匈?gòu)買的10個(gè)爽膚水、10個(gè)潤(rùn)膚乳樣品中2, 4, 6-三氯苯酚、五氯苯酚進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果均未檢出。

3結(jié)論

建立了化妝品爽膚水和潤(rùn)膚乳中禁用的含氯苯酚2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。1.0 g爽膚水和1.0 g潤(rùn)膚乳樣品經(jīng)10 mL正己烷超聲輔助提取后，取正己烷層45℃氮吹至近干，甲醇定容，經(jīng)液相色譜分離、質(zhì)譜測(cè)定，外標(biāo)法定量。

2, 4, 6-三氯苯酚在添加水平200μg/kg和800 μg/kg時(shí)，方法的回收率范圍為81.6%-94.5%，五氯苯酚在添加水平50 μg/kg和200 μg/kg時(shí)回收率范圍為65.3%-74.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于6%。爽膚水中2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的檢出限分別為20μg/kg和3μg/kg，定量限分別為50μg/kg和10μg/kg；潤(rùn)膚乳中2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的檢出限分別為30μg/kg和5μg/kg，定量限分別為100μg/kg和20μg/kg。該方法可用于爽膚水和潤(rùn)膚乳中2, 4, 6-三氯苯酚和五氯苯酚的快速篩查和定量分析，但由于受基質(zhì)效應(yīng)的影響要準(zhǔn)確定量時(shí)提取液需要進(jìn)一步凈化。

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Determination of 2, 4, 6-Trichlorophenol, pentachlorophenol in

toner and moisturizer by liquid chromatography-tandem mass spectrometry

ZHOU Fa-dong,ZHANG Wei,LI Li-yuan,LU Xiao-yu,LI Qiang

(1.CangzhouInstituteofProductQualitySupervisionandInspection,CangzhouHebei061001,China;

2.HebeiProvinceEnvironmentalMonitoringCenterStation,ShijiazhuangHebei050051China；

3.BeijingInspectionandQuarantineTestingCenter,Beijing010000China,

4.HeBeiFoodInspectionandResearchInstitute,ShijiazhuangHebei050091,China)

Abstract:A liquid chromatography-tandem mass spectrometry method was built to determine 2, 4, 6-trichlorophenol, pentachlorophenol in toner and moisturizer, Q1 multiple ions scan mode was used in the experiment. 1.0 g toner and 1.0 g moisturizer was extracted by n-hexane with ultrasonic assisted extraction. The extracts of n-hexane were dried by nitrogen at 45℃, and then dissolved by methanol. Anlytes were separated by liquid chromatography, determined by mass spectrometry and quantified with external standard method. Recoveries of 2, 4, 6-trichlorophenol were in range of 81.6%-94.5% with spike level of 200μg/kg and 800μg/kg; recoveries of pentachlorophenol were in range of 65.3%-74.3% with spike level of 50 μg/kg and 200μg/kg; relative standard deviations of method were lower than 6%. Limit of detection of 2, 4, 6-trichlorophenol and pentachlorophenol in toner was 20μg/kg和3μg/kg, limit of quantitation of 2, 4, 6-trichlorophenol and pentachlorophenol in toner was 50μg/kg和10μg/kg; limit of detection of 2, 4, 6-trichlorophenol and pentachlorophenol in moisturizer was 30μg/kg和5μg/kg, limit of quantitation of 2, 4, 6-trichlorophenol and pentachlorophenol in moisturizer was 100μg/kg和20μg/kg. This method could be used in rapid screening and quantitative analysis of 2, 4, 6-trichlorophenol, pentachlorophenol in toner and moisturizer.

Keywords:Cosmetics; 2, 4, 6-trichlorophenol; Pentachlorophenol; Liquid chromatography-tandem mass spectrometry

中圖分類號(hào)：O657

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-9383(2015)01-0047-07

作者簡(jiǎn)介:周法東(1958-)，男，正高級(jí)工程師，主要從事質(zhì)量管理、食品及相關(guān)產(chǎn)品檢驗(yàn).E-mail：czszjs@126.com.通信作者：李強(qiáng)(1981-)，男，碩士，高級(jí)工程師，研究方向：化學(xué)分析．E-mail：liqiang@nepp.com.cn.

收稿日期：2015-01-09