楊鮮銀

(湖南省洞口縣高沙鎮(zhèn)動(dòng)物防疫站,湖南洞口 422312)

活疫苗用于小反芻獸疫防控的安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)

楊鮮銀

(湖南省洞口縣高沙鎮(zhèn)動(dòng)物防疫站,湖南洞口 422312)

2014年3月11日，湖南省邵陽(yáng)市洞口縣某鄉(xiāng)鎮(zhèn)某村部分養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的羊出現(xiàn)疑似小反芻獸疫癥狀，發(fā)病羊360只，其中死亡234只。3月24日，湖南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心診斷為疑似小反芻獸疫疫情。3月25日，經(jīng)國(guó)家外來(lái)動(dòng)物疫病研究中心確診，該起疫情為小反芻獸疫疫情。對(duì)剩余126只病羊及同群羊進(jìn)行撲殺和無(wú)害化處理。此病目前尚無(wú)有效治療方法，主要通過(guò)早期診斷和疫苗免疫進(jìn)行控制。結(jié)合國(guó)內(nèi)新疆、西藏等地疫苗接種防控經(jīng)驗(yàn)，遴選三批次小反芻獸疫活疫苗做接種試驗(yàn)，試驗(yàn)疫苗均由新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，探究疫苗用于本地接種的安全性評(píng)價(jià)，是否適合本地此病防疫的大面積應(yīng)用。經(jīng)比較試驗(yàn)，所有接種動(dòng)物均存活。結(jié)果表明，該疫苗安全性良好，可在民間大規(guī)模使用。

小反芻獸疫免疫接種試驗(yàn)

小反芻獸疫（PPR）又名小反芻獸假性牛瘟，是由小反芻獸疫病毒引起的一種急性、烈性、接觸性傳染病，易感群發(fā)病率高達(dá)100%，嚴(yán)重暴發(fā)時(shí)，死亡率達(dá)100%。自2014年起，湖南多地有小反芻獸疫疫情報(bào)道，多家畜牧批發(fā)市場(chǎng)由此紛紛歇業(yè)，嚴(yán)重影響本地畜牧產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展。據(jù)農(nóng)業(yè)部通報(bào)，目前中國(guó)有新疆、西藏、甘肅、寧夏、四川、山東、遼寧、江西、江蘇和安徽等省市，以及湖南邵陽(yáng)市、湘潭市等地發(fā)生（或監(jiān)測(cè)到）小反芻獸疫。因此，湖南省將繼續(xù)執(zhí)行活羊限制移動(dòng)措施，關(guān)閉所有活羊交易市場(chǎng)，暫?；钛蚪灰?。

目前，該病尚無(wú)有效治療方法，主要通過(guò)早期診斷和疫苗免疫進(jìn)行控制。結(jié)合國(guó)內(nèi)新疆、西藏等地疫苗接種防控經(jīng)驗(yàn)，遴選3批次小反芻獸疫活疫苗做接種試驗(yàn)，試驗(yàn)疫苗均由新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，探究疫苗用于本地接種的安全性評(píng)價(jià)，是否適合本地此病防疫的大面積應(yīng)用。

1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

接種疫苗：2007006、2007007、2007008三批小反芻獸活疫苗。

試驗(yàn)動(dòng)物：小白鼠、豚鼠，從長(zhǎng)沙市某專業(yè)公司自繁自養(yǎng)健康動(dòng)物室購(gòu)買；

5～18月齡山羊，懷孕3個(gè)月左右的湘東黑山羊、馬頭山羊，由地方規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)提供。試驗(yàn)前，采血測(cè)定體內(nèi)PPRV中和抗體效價(jià)，比較遴選抗體效價(jià)1：4之下的羊做試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)方法及過(guò)程

1.2.1 檢驗(yàn)疫苗

取3批次疫苗，分別按農(nóng)業(yè)部有關(guān)中小反芻獸疫活疫苗接種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行動(dòng)物體檢測(cè)試驗(yàn)分析。遴選質(zhì)量檢驗(yàn)合格的疫苗，進(jìn)行安全性試驗(yàn)。

1.2.2 單劑量和超劑量安全性試驗(yàn)

取檢疫陰性健畜湘東黑山羊、馬頭山羊各5只，3批次疫苗按照使用說(shuō)明分別稀釋。2007006接種劑量：1頭份/只；2007007接種劑量：10頭份/只；2007008接種劑量100頭份/只，統(tǒng)一頸部皮下接種。接種后，每日測(cè)定統(tǒng)計(jì)羊只體溫，連續(xù)觀察2周，詳細(xì)記錄臨床反應(yīng)。

1.2.3 單劑量和超劑量重復(fù)接種安全性試驗(yàn)

取檢疫陰性健畜湘東黑山羊、馬頭山羊各5只，3批次疫苗按照使用說(shuō)明分別稀釋，2007006接種劑量：1頭份/只；2007007接種劑量：10頭份/只；2007008接種劑量100頭份/只，統(tǒng)一頸部皮下接種。接種后間隔2周，按照相同劑量接種分別接種1次。每日測(cè)定統(tǒng)計(jì)羊只體溫，連續(xù)觀察2周，詳細(xì)記錄臨床反應(yīng)。

1.2.4 疫苗對(duì)懷孕羊的單劑量和超劑量安全性試驗(yàn)

健畜湘東黑山羊、馬頭山羊各5只，3批次疫苗任選2007006型號(hào)，參照1頭份/只、10頭份/只、100頭份/只的劑量，統(tǒng)一頸部皮下接種。接種后，每日測(cè)定統(tǒng)計(jì)羊只體溫，連續(xù)觀察2周，詳細(xì)記錄臨床反應(yīng)。同時(shí)，安排不免疫的對(duì)照懷孕山羊、懷孕綿羊同樣5只。比較有無(wú)接種，母羊流產(chǎn)、死胎等癥狀，同時(shí)詳計(jì)產(chǎn)羔數(shù)，做比較試驗(yàn)。

1.2.5 疫苗對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物安全性接種試驗(yàn)

與2.2.4同等型號(hào)的疫苗，與無(wú)血清MEM細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋，調(diào)配成含100頭份/ml的注射溶劑。遴選6只體重在200～250g的豚鼠，2只肌肉注射，0.5ml/只；2只腹腔注射，0.5ml/只；2只不接種，僅作對(duì)照試驗(yàn)。2周為觀察周期，做數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。遴選8只體重在18～22g的小白鼠，5只腹腔注射，0.1ml/只；5只不接種，僅作對(duì)照試驗(yàn)。2周為觀察周期，做數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

2.1 疫苗檢驗(yàn)效果分析

接種疫苗用于安全評(píng)價(jià)性試驗(yàn)之前，首先做檢驗(yàn)效果分析。取3批次疫苗分別按農(nóng)業(yè)部有關(guān)中小反芻獸疫活疫苗接種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行動(dòng)物體檢測(cè)試驗(yàn)分析。

表1 疫苗質(zhì)量檢測(cè)效果

從表1的數(shù)據(jù)可以看出，3批次疫苗安全檢驗(yàn)病毒含量分別為104.9TCID50/頭份、104.1TCID50/頭份、104.8TCID50/頭份，效力檢驗(yàn)均≥1：25。由此可見，3批疫苗的質(zhì)量檢驗(yàn)均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，可安全用于評(píng)價(jià)試驗(yàn)。

2.2 單劑量和超劑量安全性試驗(yàn)結(jié)果分析

經(jīng)疫苗接種后，逐日觀察接種湘東黑山羊、馬頭山羊的體溫、臨床癥狀，經(jīng)連續(xù)2周不間斷的觀察分析，接種湘東黑山羊、馬頭山羊均未出現(xiàn)不良反應(yīng)，所有接種湘東黑山羊、馬頭山羊精神狀態(tài)良好、食欲正常，安全性良好。統(tǒng)計(jì)結(jié)果詳見表2，圖中記錄溫度曲線為接種5頭羊的平均體溫變化。

2.3 單劑量和超劑量重復(fù)性接種安全性試驗(yàn)結(jié)果分析

疫苗接種后14 d，按照相同劑量接種。相關(guān)數(shù)據(jù)以表格形式記錄分析，詳見表3。

從表3數(shù)據(jù)可以看出，僅馬頭山羊接種2007008100頭份/只，在重復(fù)接種中出現(xiàn)一過(guò)性體溫波動(dòng)反應(yīng)，其余接種湘東黑山羊、馬頭山羊均未出現(xiàn)不良反應(yīng)。接下來(lái)的2周觀察，幾乎所有接種湘東黑山羊、馬頭山羊精神狀態(tài)良好、食欲正常，安全性良好。統(tǒng)計(jì)結(jié)果匯總?cè)缦?，圖中記錄溫度曲線為接種5頭羊的平均體溫變化。

表2 單劑量和超劑量安全性試驗(yàn)結(jié)果分析

表3 單劑量和超劑量重復(fù)性接種安全性試驗(yàn)結(jié)果分析

2.4 安全性試驗(yàn)結(jié)果分析

表4 懷孕湘東黑山羊、馬頭山羊的安全性試驗(yàn)結(jié)果

隨意取任意批號(hào)疫苗接種懷孕期母羊和山羊，接種后觀察發(fā)現(xiàn)經(jīng)接種懷孕期、馬頭山羊，均為發(fā)生流產(chǎn)、難產(chǎn)等繁殖類疾病。延長(zhǎng)觀察期，發(fā)現(xiàn)分娩后胎兒均顯正常，未見畸形胎、死胎等等。在繁殖數(shù)量上，經(jīng)對(duì)照也沒有很大的變化。

2.5 試驗(yàn)動(dòng)物安全性接種試驗(yàn)結(jié)果分析

對(duì)試驗(yàn)用小白鼠、豚鼠接種同等劑量疫苗，連續(xù)觀察2周。經(jīng)對(duì)照組和試驗(yàn)組比較，沒有任何異常情況出現(xiàn)，由此可證實(shí)非特異性安全良好。

3 試驗(yàn)結(jié)果討論

為明確疫苗的安全性能，本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)《新獸藥研制管理辦法》、《獸用生物制品注冊(cè)分類及注冊(cè)資料要求》的有關(guān)規(guī)定，對(duì)疫苗的安全性進(jìn)行了系統(tǒng)評(píng)價(jià)。

為全面評(píng)價(jià)疫苗的安全性，本研究選擇了不同年齡、不同品種的羊進(jìn)行特異性安全試驗(yàn)；同時(shí)選擇小白鼠、豚鼠進(jìn)行非特異性安全試驗(yàn)。特異性安全試驗(yàn)結(jié)果表明，按l頭份、10頭份、100頭份單次和重復(fù)接種健康易感湘東黑山羊、馬頭山羊，均未觀察到異常臨床反應(yīng)；按同樣劑量接種懷孕湘東黑山羊、馬頭山羊，接種后懷孕母羊未發(fā)生流產(chǎn)、死胎等異常臨床反應(yīng)；所產(chǎn)羔羊數(shù)量與對(duì)照無(wú)明顯差異。非特異性安全試驗(yàn)結(jié)果表明，按10頭份接種小白鼠，按50頭份接種豚鼠，所有接種動(dòng)物均未觀察到異常臨床癥狀。

4 建議

做好當(dāng)前小反芻獸疫防控工作，基層防疫單位必須要認(rèn)清形勢(shì)，及時(shí)做好疫苗接種工作，防控于未然。經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)，選擇的三批次疫苗用于基層小反芻獸疫防控安全性較好，可批量推廣應(yīng)用。在接種過(guò)程中，應(yīng)該注意影響接種效力的其他安全因素，像是接種群體健康程度；疫苗裝瓶有無(wú)破損；用前注意預(yù)熱和搖勻；注射器、針頭及其他稀釋用具在用前應(yīng)嚴(yán)格消毒；經(jīng)稀釋后避光陰涼保存；接種后有無(wú)應(yīng)激反應(yīng)等等，真真切切將接種效力發(fā)揮到最大。

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