張健欣，唐紅

(甘肅農(nóng)業(yè)大學林學院，甘肅 蘭州　730070)

?

不同外源激素對紫斑牡丹愈傷組織誘導的影響

張健欣，唐紅

(甘肅農(nóng)業(yè)大學林學院，甘肅 蘭州730070)

摘要：試驗以‘美髯公’‘粉荷’‘粉冠彩帶’3個紫斑牡丹品種的葉片和葉柄為材料，研究不同處理時間0.1% HgCl2處理牡丹對葉片、葉柄污染率、褐化率、存活率及死亡率的影響.并研究了6-BA和NAA組合，2,4-D和NAA組合以及2,4-D和6-BA組合分別對紫斑牡丹葉片和葉柄愈傷組織誘導、增殖以及再分化的影響.結果表明：(1)用0.1% HgCl2進行消毒處理，葉片和葉柄的最佳消毒時間分別為6、8 min.(2)3個品種的牡丹葉片在6-BA(2.0 mg/L)/NAA(0.3 mg/L)處理下的愈傷組織誘導率均為最高，葉柄在6-BA(2.0 mg/L)/NAA(0.4 mg/L)處理下的愈傷組織誘導率均為最高；‘粉冠彩帶’葉片和葉柄的愈傷組織誘導率顯著高于其他兩個品種；同一品種之間葉柄的愈傷組織誘導率明顯高于葉片的誘導率.(3)2,4-D(0.5 mg/L)/ NAA(1.5 mg/L)組合處理中，葉片和葉柄愈傷增殖率均達到最高，且NAA質量濃度越高愈傷組織質地越好.(4)2,4-D(0.2 mg/L)/6-BA(4 mg/L)處理愈傷組織再分化過程中發(fā)現(xiàn)有少數(shù)透明狀的胚狀體.

關鍵詞：紫斑牡丹；葉片；葉柄；愈傷組織；

第一作者：張健欣(1989-)，女，碩士研究生，主要從事園林觀賞植物遺傳育種研究.E-mail:chenyo258@126.com

紫斑牡丹(Paeoniarockii)屬于芍藥科芍藥屬牡丹組,花大色美，因其花瓣基部有明顯的紫斑而得名.紫斑牡丹集中栽培分布于甘肅省蘭州市、臨夏以及臨洮等地區(qū)，是僅次于中原牡丹的第二大品種群.紫斑牡丹除了有很高的觀賞價值外還有較高的藥用價值和油用價值[1]，且資源需求量大，但繁殖困難.近年來紫斑牡丹組培等快速繁殖的方法成為研究熱點，相關研究在國內(nèi)外已有少數(shù)報道[2-13]，但由于外植體褐化嚴重以及組培苗生根困難，市場上尚未有成功的組培苗出售，而使紫斑牡丹組織培養(yǎng)成為目前研究的難點.因愈傷組織生長具有繁殖速度快、數(shù)量多、再生率高較外植體培養(yǎng)污染率低等優(yōu)點使得愈傷組織培養(yǎng)成為紫斑牡丹組織培養(yǎng)研究中的一個重點.為了進一步降低紫斑牡丹誘導過程中的褐化率、污染率，提高其誘導率，本試驗以紫斑牡丹營養(yǎng)器官(葉片、葉柄)為材料，研究不同激素配比對其愈傷組織誘導、增殖以及分化的影響，以期為以后紫斑牡丹愈傷組織誘導分化研究提供科學依據(jù).

1材料與方法

1.1供試材料

試驗材料于2013年4月采自甘肅省蘭州市榆中縣和平牡丹園.選擇‘美髯公’‘粉荷’‘粉冠彩’帶3個品種的紫斑牡丹，采摘一年生嫩枝上健壯、無病害且長勢良好的葉片和葉柄.采摘后置于4 ℃的冰箱中儲藏備用.

1.2培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件

本試驗中均以MS為基本培養(yǎng)基(pH5.6、蔗糖30 g/L、瓊脂5 g/L、LH 500 mg/L、PVP 0.1 g/L).培養(yǎng)箱光照強度為(2 000±100)lx，光照時間為16 h光照/8 h黑暗，溫度(20±3)℃，空氣相對濕度為(70±5)%.

1.3試驗方法

1.3.1外植體處理及HgCl2消毒比對將采摘的葉片和葉柄用細毛刷洗干凈后在流水下沖洗2 h，用蒸餾水沖洗5次后置于超凈工作臺上，用75%酒精將材料浸泡15 s后用無菌水迅速沖洗3次.從3個品種牡丹中選取等量的葉片和葉柄混合，用0.1% HgCl2進行2、4、6、8、10、12 min的消毒處理，用無菌水沖洗5次.將處理過的葉片沿主葉脈切成約0.5 cm2的方塊、葉柄切成約1 cm的條塊，并刻劃傷口，接種到MS培養(yǎng)基中.每處理各接種30塊，重復3次.將接種后的材料置于上述條件培養(yǎng)箱中.10 d后統(tǒng)計污染率、褐化率、存活率及死亡率.

1.3.2啟動培養(yǎng)將材料進行消毒處理后，每個品種的葉片和葉柄分別接種300塊，置于上述條件箱中暗培養(yǎng)(用錫紙包裹遮光).7 d后選擇生長良好的葉片和葉柄轉接至愈傷組織誘導培養(yǎng)基中，以緩解外植體的褐化.

1.3.3愈傷組織誘導培養(yǎng)MS基本培養(yǎng)基加入6-BA(2.0 mg/L)和不同質量濃度的NAA (0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/L).選擇啟動培養(yǎng)中無污染、生長良好的葉片、葉柄，轉接至誘導培養(yǎng)基中，每處理接30個，重復3次，置于培養(yǎng)箱中進行誘導比對試驗.每天上午10∶00觀察統(tǒng)計，40 d后統(tǒng)計愈傷組織誘導率.

1.3.4愈傷組織增殖培養(yǎng)MS基本培養(yǎng)基中加入0.5 mg/L的2,4-D和不同質量濃度的NAA(0.5、1.0和1.5 mg/L).選擇誘導比對試驗中誘導率最高并且生長最良好的品種：‘粉冠彩帶’進行愈傷組織增殖生長比對試驗.選取葉片和葉柄中被誘導生長良好的愈傷組織切割成0.5 cm2左右的塊狀，轉至增殖培養(yǎng)基中.每處理接20個，重復3次，置于培養(yǎng)箱中.每天上午10∶00觀察，30 d后統(tǒng)計愈傷組織增殖情況.

1.3.5愈傷組織分化培養(yǎng)MS基本培養(yǎng)基中加入不同質量濃度的2,4-D(0.2、0.4 mg/L)和不同質量濃度的6-BA(4.0、6.0 mg/L).因增殖培養(yǎng)中葉柄愈傷組織質地優(yōu)于葉片，故選取葉柄愈傷組織為材料進行后續(xù)試驗.將增殖培養(yǎng)基中生長良好的葉柄愈傷組織轉至分化培養(yǎng)基中，每處理接10個，重復3次，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng).每天10∶00觀察并記錄愈傷組織生分化情況，40 d后統(tǒng)計愈傷組織分化率.

1.4評價指標與數(shù)據(jù)分析

本試驗數(shù)據(jù)評價指標有污染率、褐化率、存活率、死亡率、愈傷組織誘導率以及愈傷組織增殖率.用Excel和SPSS 19.0統(tǒng)計分析軟件對數(shù)據(jù)進行相應的分析，用Duncan多重比較法進行差異顯著性檢測.

2結果與分析

2.1不同消毒時間對外植體生長的影響

由表1、2可知，不同消毒時間處理均在一定程度上影響葉片和葉柄的污染率、褐化率、存活率以及死亡率.隨著消毒時間的延長，葉片的污染率逐漸降低，6 min后污染率均為零，與2、4 min的差異性顯著(P<0.05)；葉柄的污染率隨著消毒時間的延長逐漸降低， 8 min與10、12 min的差異不顯著，與2、

4 min和6 min的差異極顯著(P<0.01).葉片褐化率隨著時間的延長呈先降低后增大的趨勢，在6 min時達到最低(50%)，與其他處理間的差異極顯著(P<0.01)；葉柄褐化率隨著時間的延長先降低后增大，2～6 min褐化率降低，8～12 min褐化率升高.葉片存活率隨消毒時間延長逐漸降低，處理 6 min(82.22%)以后開始急劇下降，與8、10 min和12 min的差異極顯著(P<0.01)，與4 min的差異不顯著；存活率隨消毒時間的延長先升高后降低，8 min與2、4 和6 min的差異極顯著(P<0.01).葉片死亡率隨時間延長逐漸升高，處理6 min(17.78%)以后開始急劇升高，與8、10和12 min的差異極顯著(P<0.01)，與2、4 min的差異顯著(P<0.05)；葉柄死亡率隨時間延長呈降低趨勢， 處理8 min與10、12 min的差異顯著(P<0.05).

表1　不同消毒時間對紫斑牡丹葉片生長的影響

表中同列數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01).

表2　不同消毒時間對紫斑牡丹葉柄生長的影響

表中同列數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01).

2.26-BA與不同質量濃度 NAA配比對紫斑牡丹不同品種離體葉片、葉柄愈傷組織誘導的影響

由表3、4可知，紫斑牡丹不同品種間，‘粉冠彩帶’葉片和葉柄的愈傷誘導率都最高，分別為60.00%、84.44%.3個品種的葉片愈傷誘導率都在0.3 mg/L NAA處理下最高，與其他處理的差異顯著(P<0.05)且生長表現(xiàn)良好；在0.1、0.5 mg/L NAA處理下誘導率較低，且所有品種中0.5 mg/L NAA處理與其他處理間差異極顯著(P<0.01).在0.4 mg/L NAA處理下3個品種的葉柄愈傷誘導率都最高，且在‘美髯公’與‘粉荷’兩個品種中0.4 mg/L NAA處理與其他處理間差異極顯著(P<0.01)，愈傷組織生長良好，縱向切口處綠色團狀愈傷組織較多；在0.1、0.2 mg/L NAA處理下誘導率相對較低，且所有品種中0.1 mg/L NAA處理與其他處理間差異顯著(P<0.05)，愈傷組織質地較差，大多呈淡黃色或黃褐色顆粒狀.由配比結果可知，在6-BA(2.0 mg/L)質量濃度不變的情況下，隨著培養(yǎng)基中NAA質量濃度的升高，葉片和葉柄的愈傷誘導率隨之增大，增加到一定程度后愈傷誘導率又隨著NAA質量濃度的增大而降低.

分別選取3個品種中葉片和葉柄的最高誘導率進行比較，如圖1所示， 3個品種愈傷組織誘導率大小為：‘粉冠彩帶’>‘美髯公’>‘粉荷’，差異性極顯著(P<0.01)，且葉柄愈傷組織的誘導率明顯大于葉片愈傷組織的誘導率.以上分析說明，不同品種、不同外植體和不同質量濃度激素配比均可在一定程度上影響紫斑牡丹愈傷組織誘導率.

表3　6-BA和不同質量濃度NAA配比對紫斑牡丹不同品種離體葉片愈傷組織誘導的影響

表中同列數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01).

表4　6-BA和不同質量濃度NAA配比對紫斑牡丹不同品種離體葉柄愈傷組織誘導的影響

表中同列數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01).

圖1　不同品種及不同外植體對愈傷誘導率的影響Fig.1　Effects of different variety and explant oncallus induction rate

2.32,4-D和不同質量濃度NAA配比對愈傷組織增殖的影響

由表5可知，2,4-D和不同質量濃度NAA配比對葉片和葉柄愈傷組織增殖率影響明顯.1.5 mg/L NAA處理的葉片增殖率(86.67%)顯著高于0.5 mg/L NAA處理(P<0.05)；1.5 mg/L NAA處理葉柄的增值率最高(98.33%)，于其他處理間差異極顯著(P<0.01).在2,4-D(0.5 mg/L)質量濃度不變的情況下，隨著NAA質量濃度的增大，葉片和葉柄的愈傷組織增殖率相應升高，顏色由白色逐漸變?yōu)榈G色，質地由疏松狀變?yōu)榫o密狀.當NAA質量濃度達到1.5 mg/L時，葉片和葉柄愈傷組織增殖率均最高且愈傷組織質地較好，生長旺盛.

2.4不同細胞分裂素和生長素配比對愈傷組織分化的影響

分化培養(yǎng)中愈傷組織的生長狀況，接種48d表中同列數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01).后，只有極少數(shù)愈傷組織在2,4-D(0.2 mg/L)/6-BA(4 mg/L)處理中分化出透明狀、淡綠色的胚狀體，分化率不到10%，且在其他3種處理中均未觀察到分化現(xiàn)象.在分化培養(yǎng)基中，大部分愈傷組織褐化死亡，只有個別組織塊邊緣生長出新的愈傷組織，分化困難.

表5　2,4-D和不同質量濃度NAA配比對愈傷組織增殖的影響

A：葉片褐化程度；B：葉柄褐化程度；C：葉片在MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.4 mg/L+LH 500 mg/L+PVP0.1 g/L誘導的愈傷組織；D：葉柄在MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.3 mg/L+LH500 mg/L+PVP 0.1 g/L誘導的愈傷組織；E：葉片愈傷組織在MS+2,4-D0.5 mg/L+NAA1.5 mg/L+CH500 mg/L+PVP 0.1 g/L中的增殖；F：葉柄愈傷組織在MS+2,4-D0.5 mg/L+NAA1.5 mg/L+CH500 mg/L+ PVP0.1 g/L中的增殖.圖2　紫斑牡丹愈傷組織誘導及增殖Fig.2　Callus induction and proliferation of Paeonia rockii

3討論與結論

3.1外植體的消毒處理

在植物組織培養(yǎng)中，直接以野外生長的材料作為外植體進行組織培養(yǎng)的過程中常因野外材料攜帶大量病菌導致培養(yǎng)過程中污染率較高.選擇適當?shù)南緞┘跋緯r間成為有效控制污染，促進組織培養(yǎng)成功的首要環(huán)節(jié).不同消毒時間對外植體的影響不同，時間過短會因為消毒不徹底而造成組織污染，時間過長則會對外植體造成損傷使得死亡率增高.所以選擇適宜的處理時間，盡量減少材料的損傷和死亡成為紫斑牡丹不同外植體組織培養(yǎng)的首要任務.

本試驗以紫斑牡丹葉片和葉柄為外植體，用0.1% HgCl2對材料進行不同消毒時間處理，結果表明，不同消毒時間處理對不同外植體培養(yǎng)造成不同影響，葉片和葉柄理想消毒時間分別為6 min和8 min，這與王軍娥等[14]對牡丹葉片以及葉柄最佳消毒時間的研究結果不太一致，這可能是因為紫斑牡丹本身抗逆性較強對HgCl2的耐受力較中原牡丹強，也有可能是因為選取材料所處生長發(fā)育階段不同使外植體的污染率、褐化率、存活率和死亡率存在著明顯差異.

3.2不同激素配比對不同品種及組織器官愈傷組織誘導率的影響

愈傷組織是組織培養(yǎng)過程中在人工培養(yǎng)基上由外植體延伸出來的一團無序的薄壁細胞，是一群原始的未分化的細胞，可以在一定培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下誘導分化形成胚或直接形成小植株[15].愈傷組織生長具有繁殖速度快、數(shù)量多、再生率高較外植體培養(yǎng)污染率低等優(yōu)點.之前研究表明各種激素對牡丹愈傷組織誘導的影響不同，而且不同品種和不同組織器官愈傷組織誘導對激素的要求存在較大差異.陳笑蕾[16]、王瓊[17]、李艷敏[18]以及陳怡平等[5]的研究中表明NAA、6-BA和2,4-D能有效地誘導牡丹愈傷組織.在紫斑牡丹愈傷組織誘導的研究中發(fā)現(xiàn)，組織脫分化對 NAA的質量濃度變化比 6-BA的變化敏感，且NAA質量濃度稍高于6-BA質量濃度是比較理想的配方.本試驗參考前人的研究結果，以紫斑牡丹3個不同品種的葉片和葉柄組織為材料，研究在6-BA質量濃度不變(2.0 mg/L)的情況下，添加較低質量濃度的NAA對愈傷組織誘導率的影響.結果表明，不同質量濃度的NAA對葉片、葉柄誘導率的影響不同.3個品種葉片的最佳誘導質量濃度都為0.3 mg/L，葉柄的最佳誘導質量濃度為0.4 mg/L，這與陳怡平得出的6-BA(1.5 mg/L)/NAA(2.0 mg/L)處理下誘導率最高的結果不同，主要可能是因為選取的組織器官內(nèi)源激素水平不同所致[19].另外，在試驗中發(fā)現(xiàn)，NAA不僅能夠促進愈傷組織形成，而且對愈傷組織的質地也有影響.結果表明，隨NAA質量濃度的升高，愈傷組織的顏色逐漸加深.這說明在一定范圍內(nèi)，NAA質量濃度越高愈傷組織的質地越好[20].另外對不同品種及不同組織器官最佳誘導率進行比較發(fā)現(xiàn)不同品種間誘導率存在明顯差異，‘粉冠彩帶’的葉片和葉柄愈傷組織誘導率均最高且顯著高于其他品種；同一品種葉柄的愈傷誘導率高于葉片，與前人的研究結果基本一致.

3.3不同激素配比處理對愈傷組織增殖率的影響

為了從愈傷組織中誘導出分化苗，首先要保證有足夠數(shù)量的愈傷組織，所以愈傷組織的增殖培養(yǎng)是十分必要的.王瓊[17]在對‘鳳丹’幼胚愈傷組織進行增殖試驗中發(fā)現(xiàn)KT和6-BA對牡丹愈傷組織增殖有很大影響.為了研究其他激素對紫斑牡丹愈傷組織增殖是否也有促進作用，本試驗研究了0.5 mg/L的2,4-D和不同質量濃度NAA組合對紫斑牡丹愈傷組織增值率的影響.結果表明,1.5 mg/L NAA處理中，葉片和葉柄的愈傷組織增殖率均最高.另外隨著NAA質量濃度的升高，愈傷組織的質地由疏松狀到緊密狀、顏色由淺至深.說明在一定范圍內(nèi)高質量濃度(1.5 mg/L)的NAA有利于葉片和葉柄愈傷組織的增殖.在以后的試驗中，更高質量濃度NAA處理對紫斑牡丹葉片和葉柄愈傷組織增殖的影響還有待進一步研究.

3.4不同激素種類和質量濃度組合對愈傷組織再分化的影響

愈傷組織再分化形成芽一直是牡丹組織培養(yǎng)技術中的難點之一，陳笑蕾[16]對牡丹愈傷組織進行了增殖分化培養(yǎng)，結果很不理想，沒有分化出苗，愈傷組織在培養(yǎng)一段時間后褐化死亡；Beruto等[10]把牡丹花絲和花瓣接種在含有生長劑組合2ip+PIC或TDZ+2,4-D的培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)TDZ能夠促進花瓣上的愈傷組織分化出不定芽.本試驗用不同質量濃度 6-BA和不同質量濃度2,4-D組合進行愈傷組織分化的研究中發(fā)現(xiàn)2,4-D(0.2 mg/L)/6-BA(4 mg/L)處理中有少數(shù)透明狀的胚狀體，但因后期酚類物質大量產(chǎn)生，抑制組織再分化，最終導致胚狀體死亡.紫斑牡丹愈傷組織誘導以及增殖已經(jīng)成功，但誘導紫斑牡丹愈傷組織再分化的途徑遠未成熟，且紫斑牡丹屬于系統(tǒng)進化中原始類群，組織培養(yǎng)再分化就越困難.因此，探索紫斑牡丹愈傷組織分化以及成苗的新途徑及方法是今后努力的方向.

綜上所述，在本試驗中，用0.1%HgCl2對紫斑牡丹進行消毒處理，葉片和葉柄最佳消毒時間分別為6 min和8 min.6-BA(2.0 mg/L)/NAA(0.3 mg/L)處理在3個品種中葉片的愈傷組織誘導率均為最高，6-BA(2.0 mg/L)/NAA(0.4 mg/L)處理在3個品種中的葉柄的愈傷組織誘導率均為最高；‘粉冠彩帶’葉片和葉柄的愈傷組織誘導率顯著高于其他兩個品種；同一品種葉柄的愈傷組織誘導率明顯高于葉片的誘導率；在一定范圍內(nèi)NAA質量濃度越高愈傷組織的質地越好.2,4-D(0.5 mg/L)/ NAA(1.5 mg/L)組合處理中，葉片和葉柄愈傷增殖率均達到最高.2,4-D(0.2 mg/L)/6-BA(4 mg/L)處理誘導愈傷組織在分化過程中發(fā)現(xiàn)有少數(shù)透明狀的胚狀體.

參考文獻

[1]陳慧玲，楊彥伶，張新葉，等.油用牡丹研究進展[J].湖北林業(yè)科技，2013,42(5):41-44

[2]周仁超，姚崇懷.紫斑牡丹胚培養(yǎng)與植株再生[J].亞熱帶植物科學，2001(3)：58-60

[3]曹小勇.瀕危植物紫斑牡丹胚離體培養(yǎng)[J].氨基酸和生物資源，2003，25(2)：35-36

[4]陳怡平，廉永善，王勛陵.紫斑牡丹休眠地下芽在組織培養(yǎng)條件下的發(fā)育研究[J].西北植物學報，2003，23(2)：314-317

[5]陳怡平，丁蘭，趙敏桂.用紫斑牡丹不同外植體誘導愈傷組織的研究[J].西北師范大學學報：自然科學版，2001，37(3)：66-69

[6]周秀梅，成仿云，鐘原,等.紫斑牡丹 '書生捧墨' 的體胚誘導與發(fā)生[J].北京林業(yè)大學學報，2009，31(2)：151-154

[7]鐘原.紫斑牡丹分生結節(jié)的誘導與培養(yǎng)[D].北京：北京林業(yè)大學，2011

[8]成仿云.紫斑牡丹花粉發(fā)育的細胞形態(tài)學研究[J].園藝學報，1998，25(4)：367-373

[9]成仿云，李嘉玨，陳德忠.中國野生牡丹自然繁殖特性研究[J].園藝學報，1997，24(2)：180-184

[10]Beruto M，Curir P.Invitroculture of tree peony through axillary budding[C].Berlin：Springer-Verlag，2007

[11]Beruto M，Lanteri L，Portogallo C.Micro-propagation of tree Peony (Paeoniasuffruticosa)[J].Plant Cell Tissue and Organ Culture，2004，79(2)：249-255

[12]Wu S H，Wu D G，Chen Y W.Chemical constituents and bioactivities of plants from the Genus Paeonia[J].Chemistry & Biodiversity，2010，7(1)：90-104

[13]安阿莉，蘇小玲，陳佰鴻，等.紫斑牡丹胚培養(yǎng)研究[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學學報，2009,44(6)：63-68

[14]王軍娥，鞏振輝，李新鳳.牡丹愈傷組織誘導與分化技術的優(yōu)化研究[J].西北農(nóng)業(yè)學報，2008，17(5)：282-286

[15]徐海榮，徐吉軍，常緒源，等.中國茶事大典[M].北京：華夏出版社，2000

[16]陳笑蕾.牡丹組織培養(yǎng)的初步研究[D].鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學，2005

[17]王瓊.牡丹組織培養(yǎng)與快速繁殖[D].鄭州：河南師范大學，2007

[18]李艷敏.三種牡丹品種組織培養(yǎng)技術的研究[D].北京：北京林業(yè)大學，2004

[19]謝從華，柳俊.植物細胞工程[M].北京：高等教育出版社，2004

[20]韓婷婷，孫周平.矮叢藍莓葉片的愈傷組織誘導及植株再生[J].西北植物學報，2010，30(3)：615-620

(責任編輯趙曉倩)

Effects of different hormone combinations on callus

induction ofPaeoniarockii

ZHANG Jian-xin,TANG Hong

(College of Forestry,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China)

Abstract：Takinginvitroleaves and leafstalks ofPaeoniarockiias study materials,the effects of treating with 0.1% HgCl2in different time on the pollution rate,browning rate,survival rate and mortality of leaves and petioles were studied.In addition,the effects of 6-BA and NAA,2,4-D and NAA as well as 2,4-D and 6-BA combinations on callus induction,proliferation and re-differentiation of leaves and petioles ofPaeoniarockiiwere also researched.The results showed that: (1) Using 0.1% HgCl2for disinfection treatment,the best sterilization time for leaves and petioles were 6，8 min respectively.(2) Under the treatment of 6-BA (2.0 mg/L)/NAA (0.3 mg/L),the callus induction rates of leaves from three cultivars were all the highest.Under the treatment of 6-BA (2.0 mg/L)/NAA (0.4 mg/L),the callus induction rates of petioles from three cultivars were all the highest.The callus induction rates of leaves and petioles of ‘Fen Guan Cai Dai’ were both significantly higher than that of other two cultivars.For the same cultivar,callus induction rate of petiole was significantly higher than that of leaf.(3) Under the treatment of 2,4-D (0.5 mg/L)/NAA (1.5 mg/L),callus proliferation rates of leaves and petioles reached to the highest,and the callus texture getting better with the increasing of the NAA concentration.(4)A few transparent embryoid were found in the process of callus re-differentiation under the treatment of 2,4-d (0.2 mg/L)/6-BA(4 mg/L).

Key words：Paeoniarockii；leaf；petiole；callus

收稿日期：2014-10-29；修回日期：2014-12-25

基金項目：甘肅紫斑牡丹無性繁殖關鍵技術研究(GAU-QNDS-201202)；甘肅農(nóng)業(yè)大學青年導師基金.

通信作者：唐紅，女，博士，副教授，碩士生導師，主要從事園林觀賞植物遺傳育種研究.E-mail:gsth@21cn.com

中圖分類號：S 685.11

文獻標志碼：A

文章編號：1003-4315(2015)06-0074-07