徐 巖

(天津市兒童醫(yī)院，天津 300074)

1.倍他米松磷酸鈉 2.倍他米松 3.堿破壞雜質(zhì)

1.倍他米松磷酸鈉 2.倍他米松

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HPLC法測定注射用倍他米松磷酸鈉的含量和有關(guān)物質(zhì)

徐 巖

(天津市兒童醫(yī)院，天津 300074)

目的：建立HPLC法測定不同廠家注射用倍他米松磷酸鈉的有關(guān)物質(zhì)及含量，考查了2個規(guī)格6批產(chǎn)品的質(zhì)量差異。方法：采用反相高效液相色譜法，色譜柱為C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(1∶1)，流速為1.0 ml/min，檢測波長為254 nm和241 nm。結(jié)果：倍他米松磷酸鈉在0.66～66.0 μg/ml (0.05%～5.0%)的濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.999 9)，倍他米松在0.5～50.0 μg/ml (0.05%～5.0%)的濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.999 9)。平均回收率為100.2%，RSD為0.4%(n=9)。結(jié)論：本方法結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，能有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

注射用倍他米松磷酸鈉，有關(guān)物質(zhì)，質(zhì)量控制，高效液相色譜法

倍他米松磷酸鈉為腎上腺皮質(zhì)激素類藥物，具有抗炎、抗過敏和抑制免疫等多種藥理作用。其原料及注射液均在《中國藥典》2010年版二部中收載[1]，目前注射用倍他米松磷酸鈉僅在國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中收載，國外藥典均無收載。本文采用HPLC法對注射用倍他米松磷酸鈉的有關(guān)物質(zhì)和含量測定進行了考查，以完善現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)，保證產(chǎn)品安全、有效和質(zhì)量可控。

1 儀器與試藥

Aglient 1260 Infinity 高效液相色譜儀，倍他米松磷酸鈉對照品(中國食品藥品檢定研究院化學(xué)藥品檢定所，批號100180-200902，按倍他米松磷酸鈉計，含量為89.7%)；倍他米松對照品(中國食品藥品檢定研究院化學(xué)藥品檢定所，批號100118-200403，含量為100.0%)；注射用倍他米松磷酸鈉供試品1#、2#(規(guī)格：5.26 mg，A藥廠提供，批號110314-1、110314-2)；注射用倍他米松磷酸鈉供試品3#、4#(規(guī)格：2.63 mg，B藥廠提供，批號10090701、11041501)；注射用倍他米松磷酸鈉供試品5#、6#(規(guī)格：5.26 mg，B藥廠提供，批號10072001、110120001)；甲醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，磷酸二氫鉀(分析純，天津市贏達稀貴化學(xué)試劑廠)，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 采用Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(1∶1)；流速為1.0 ml/min；含量測定的檢測波長為254 nm，有關(guān)物質(zhì)檢測波長為241 nm；柱溫為40 ℃；進樣量為20 μl。理論板數(shù)按倍他米松磷酸鈉峰計算大于2 000，倍他米松磷酸鈉峰與倍他米松峰的分離度為4.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 含量測定用溶液 取樣品10支，分別加水適量使內(nèi)容物溶解，并轉(zhuǎn)移至50 ml(規(guī)格：2.63 mg)或100 ml(規(guī)格：5.26 mg)量瓶中，用水分次洗滌容器，洗液并入量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取倍他米松磷酸鈉對照品適量，同法配制對照品溶液。

2.2.2 有關(guān)物質(zhì)檢查用溶液 取本品適量(相當(dāng)于倍他米松磷酸鈉13.2 mg)，置10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取倍他米松對照品10 mg，精密稱定，置10 ml量瓶中，加流動相適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液和供試品溶液各1 ml，置100 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液；精密量取對照溶液1 ml置50 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為靈敏度測試溶液。

2.3 專屬性試驗 分別取樣品適量(相當(dāng)于倍他米松磷酸鈉13.15 mg)，置5個10 ml量瓶中，加水適量振搖使溶解，前3個量瓶分別加1 mol/L鹽酸溶液1 ml、1 mol/L氫氧化鈉溶液1 ml和30%過氧化氫溶液1 ml，搖勻，60 ℃水浴加熱1 h，放冷，調(diào)節(jié)pH值至中性后用水稀釋至刻度，搖勻，分別作為酸破壞、堿破壞和氧化破壞溶液；將第4個量瓶置100 ℃水浴中加熱6 h，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，作為高溫破壞溶液；將第5個量瓶用水稀釋至刻度，搖勻，日光下放置1周，作為光照破壞溶液。分別量取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。試驗表明，樣品在酸性及氧化條件下比較穩(wěn)定；在堿性條件下雜質(zhì)顯著增加；在高溫條件下倍他米松峰顯著增加；在光照條件下主峰明顯下降。在該色譜條件下，倍他米松磷酸鈉峰與相鄰雜質(zhì)峰均可以達到良好分離，表明該方法的專屬性良好，適宜有關(guān)物質(zhì)檢查。

2.4 線性關(guān)系試驗 精密稱取倍他米松磷酸鈉對照品13.2 mg和倍他米松對照品10 mg，置同一100 ml量瓶中，加流動相適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液；精密量取適量，加流動相稀釋制成濃度為0.66、1.32、6.6、13.2和66.0 μg/ml(按倍他米松磷酸鈉計)的系列溶液。分別精密量取上述溶液20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進行線性回歸。結(jié)果表明，倍他米松磷酸鈉線性方程為：Y=12.83X+18.60(r=0.999 9，n=5)，在0.66～66.0 μg/ml濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系(對應(yīng)雜質(zhì)限度為0.05%～5.0%)；倍他米松線性方程為Y=10.51X+13.92(r=0.999 9，n=5)，在0.5～50.0 μg/ml濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系(對應(yīng)雜質(zhì)限度為0.05%～5.0%)。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗 將“2.2.2”項下的對照溶液及供試品溶液在室溫下分別放置0、2、4、8、12和24 h后依法進樣20 μl測定，觀察主峰及各雜質(zhì)峰面積的變化，RSD分別為0.6%和0.4%。試驗結(jié)果表明對照品溶液及供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

1.倍他米松磷酸鈉 2.倍他米松 3.堿破壞雜質(zhì)

圖1 酸破壞(A)堿破壞(B)氧化破壞(C)

高溫破壞(D)和光照破壞(E)HPLC色譜圖

2.6 重復(fù)性試驗 取5#樣品6份，按“2.2.1”項下方法配制供試品溶液，依法測定，倍他米松磷酸鈉的平均含量為101.8%，RSD為0.42%。

2.7 回收率試驗 精密稱取倍他米松對照品10 mg置100 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為雜質(zhì)對照品儲備液；分別精密稱取空白輔料9份，置50 ml量瓶中，加流動相適量，分別精密加入對照品儲備液4、5和6 ml各3份，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。平均回收率為99.8%，RSD為0.4%(n=9)，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.8 樣品的測定

2.8.1 含量測定 精密量取“2.2.1”項下供試品溶液和對照品溶液各20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標(biāo)法以峰面積計算每瓶的含量，并計算10支的平均含量，即得。按上述方法對6批樣品進行含量測定，結(jié)果分別為92.9%、93.7%、94.9%、92.9%、101.8%和99.9%。

2.8.2 有關(guān)物質(zhì)檢查 照含量測定項下的色譜條件，檢測波長為241 nm。精密量取“2.2.2”項下靈敏度測試溶液20 μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的信噪比不小于10，再精密量取“2.2.2”項下供試品溶液與對照溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀，記錄供試品溶液色譜圖至主成分峰保留時間的3倍，色譜圖見圖2，結(jié)果見表2。

1.倍他米松磷酸鈉 2.倍他米松

圖2 對照品(A)

3 討論

本方法在同一色譜系統(tǒng)中測定樣品的含量及有關(guān)物質(zhì)，但檢測波長不同。含量測定的檢測波長為254 nm，沿用《中國藥典》2010年版二部倍他米松磷酸鈉注射液的方法。有關(guān)物質(zhì)檢測波長為241 nm，在該波長下雜質(zhì)檢出的個數(shù)和雜質(zhì)量最大。

1 中國藥典[].二部.2010:844

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Determination of betamethasone sodium phosphate for injection and its related substances by HPLC

Xu Yan

(Tianjin Children' Hospital,Tianjin 300074)

Objective： To establish an HPLC method for determination of the related substances and the content in betamethasone sodium phosphate for injection and evaluate the quality variations. Methods： An RP-HPLC system,including a C18column (250 mm×4.6 mm，5 μm) and the solution of methanol-0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate(1∶1)(mobile phase), was used. The flow rate of mobile phase was 1.0 ml/min, and detecting wavelengths were 254 nm and 241 nm. Results： The assay displayed a good linearity of betamethasone sodium phosphate over the concentration range of 0.66～66.0 μg/ml(r=0.999 9)，and a good linearity of betamethasone over the concentration range of 0.5～50.0 μg/ml(r=0.999 9).The average recoveries were 100.2% and RSD was 0.4% (n=9). Conclusion： The established method is accurate and simple，and is a guarantee for quality control of betamethasone sodium phosphate for injection.

betamethasone sodium phosphate for injection，related substances，quality control，HPLC

2015-04-07

R927.2

A

1006-5687(2015)05-0012-03